动物疫苗工艺手册

更新时间：2023-03-18 21:56:01 阅读量：人文社科文档下载

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动物疫苗管理办法推荐度：
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兽用生物制品包括两个主要类型：细菌活(灭活)疫苗和病毒活(灭活)疫苗。其中病毒疫苗(例如禽类的流感疫苗、新城疫苗,兽类的猪瘟疫苗、蓝耳疫苗、口蹄疫疫苗、圆环疫苗等)占据了这类疫苗的重要市场。

动物疫苗制品工艺流程及产品推荐

应用于动物疫苗工艺的澄清、浓缩、除菌过滤方案

前言

兽用生物制品包括两个主要类型：细菌活（灭活）疫苗和病毒活（灭活）疫苗。其中病毒疫苗（例如禽类的流感疫苗、新城疫苗，兽类的猪瘟疫苗、蓝耳疫苗、口蹄疫疫苗、圆环疫苗等）占据了这类疫苗的重要市场。

病毒类疫苗除以尿囊液为起始原料制造流感疫苗的工艺外，其它以真核细胞作为宿主，用细胞培养方法生产的病毒疫苗具有基本一致的工艺流程和处理手段。

本方案，针对细胞培养法病毒疫苗工艺流程推荐Pall成熟的技术产品，以期为阁下带来更高效、更经济的解决方案。

病毒纯化路线概览

直流过滤澄清方案介绍

细胞培养的动物疫苗澄清工艺，推荐首选“直流过滤模式”的过滤器进行澄清处理。依据病毒、宿主细胞类型，培养基组份，生产批量大小而选择不同精度、材质和结构的过滤器。

0.45～0.2μm40～10μm

5～1μm

公称精度

混浊培养液

澄清的培养液

一级过滤二级过滤三级过滤

选型说明

针对一级、二级粗过滤，可考虑采用具有渐变孔径的聚丙烯纤维缠绕构造滤芯，例如Pall公司Polypure滤芯，以及Profile新月型打褶

结构滤芯。其特点参考下图说明：

普通聚丙烯纤维过滤器，纤维缠绕密度均一，细胞及细胞碎片等污染物颗粒主要集中拦截在表面15％的深度。

Pall渐变微孔结构的聚丙烯纤维过滤器，纤维缠绕密度由疏松逐渐过渡到紧密，细胞及细胞碎片等污染物颗粒可以逐渐渗透到滤膜构造内部60％的区域。过滤器使用寿命延长3倍。

eg1. 口蹄疫疫苗的发酵批量可能达到2~5吨，细胞培养液澄清度品质较为恶劣，含大量细胞碎片、细胞团聚体等。对该类较混浊样液的预过滤处理，建议考虑三级过滤的组合。

eg2. 猪瘟疫苗、狂犬疫苗等的发酵批量较小，细胞培养液澄清度品质较好（特别是部分疫苗采取贴壁细胞转瓶培养，其收获液澄清度

很好）。对该类品质较好的样液的预过滤处理，建议考虑两级过滤的组合（参考左图二级过滤、三级过滤的选型推荐）。

eg3. 是采用切向流微滤模式进行澄清和微生物限度控制，常规建议选择0.45μm精度膜包，或0.65μm精度中空纤维膜柱。膜包处理的物料固体含量或细胞碎片含量（w/v）应控制在1%以下，中空纤维膜柱可处理的料液湿固含量允许达到50%。

Pall Profile新月型打褶结构滤芯，在具备渐变微孔结构的基础上，对滤膜打褶结构进行了革新（Pall专利技术），使滤芯内膜面积增加30~100%。过滤器的使用寿命进一步延长1~3倍。

（注意：过滤器面积增大一倍，相应的使用寿命不仅仅只增大一倍）

Polypure滤芯材质符合FDA6级生物安全规范，具有渐变滤膜结构，过滤精度定义分类为公称精度，相关产品规范参考下表：

精度μm10英寸滤芯面积m2

流量L/min@100mbar

30，600.79910，5，30.6731，0.450.5520.20.4340.1

0.4

Profile滤芯采用Ultipleat新月型超级打褶结构，从而在滤芯内多装填30％的具有深层过滤效果的滤膜，使滤芯具有滤速快、压差小和寿命长的特点。

Profile Ultipleat滤芯全聚丙烯结构，符合美国药典关于材质安全性、内毒素、纤维脱落、TOC、电导率、pH等相关要求和规范。其精度定义为绝对精度，10英寸70μm~2μm精度范围滤芯的净水通量均>40L/min @100mbar。

针对一、二级预过滤后的第三级过滤，除了考虑沿用1中推荐类型的过滤器之外，还可以考虑具有高度澄清效果的Pall PreFlow 玻璃纤维过滤器。

PreFlow玻璃纤维过滤器是Pall公司专门针对细胞培养疫苗类生物制品预过滤而特别优化开发的过滤器，具有通量大、容污能

力强、蛋白吸附量低、病毒回收率高的特点。

PreFlow UB已被广泛应用并成为各类疫苗品种的细胞澄清过滤工

艺的首选。

该型号滤芯的精度为公称精度，产品规范参考下表型号

精度μm10英寸滤芯面积m2

流量L/min@100mbar> 25UUA0.20.57> 30

0.45

0.65

切向流超滤浓缩方案介绍

对应澄清过滤后含病毒颗粒的料液，部分动物疫苗工艺采取直接除菌过滤成为终产品。随着对产品品质要求规范的提高，各厂家对提高病毒滴度、减少培养基小分子杂质、降低动物过敏反应、制备多价疫苗等方面的需求越来越强烈。因此，引入超滤浓缩工艺，是一个最简单、同时最有效提高产品品质的考虑。

推荐使用Pall Omega改性聚醚砜（mPES）超滤膜包和系统。

膜包

超滤膜电镜（切面）

超滤系统（5m2）

推荐用于病毒疫苗超滤浓缩的Omega T

系列膜包截留精度参数

截留精度病毒拦截效率

净水滤速KDLogTr

LMH@1bar测试病毒nm300*> 4> 62075nm φ6噬菌体100*> 3.7> 81020nm 牛细小病毒70－> 280－50

－

> 280

－

*注，有拦截病毒《验证指南》，或应用研究文献参考。

一次性生物容器、无菌连接方案介绍

对浓缩/洗滤后的病毒液，按需进行脱毒处理。通过严格的无菌操作，将物料传送至灭菌好的不锈钢容器内进行搅拌和贮存，是较为普遍的常规做法。

然而对很多无法除菌过滤的全病毒疫苗大生产而言，如何充分避免因物料传送操作，或搅拌贮存操作引入的二次染菌污染，才是工艺设计上最重点最迫切的考量。

罐体的清洗、灭菌验证？

罐体呼吸器的灭菌和完整性检测管理？罐体气密性确认？

火焰灼烧的无菌操作SOP及其稳定重现性？

各种连接部件灭菌柜内包扎方法和无菌转移操作的风险控制？

推荐使用Pall Allegro一次性生物容器系统，和Kleenpak无菌连接器，替代传统的不锈钢容器和火焰灼烧无菌连接操作，将过程污染风险降低至最低。

Allegro一次性生物容器，免除清洗、灭菌验证，无须呼吸器安装管理

Kleenpak一次性无菌连接器，严格验证、明确无误的操作，杜绝染菌风险

一次性系统的案例示

除菌过滤方案介绍

对浓缩/洗滤后的病毒液，部分制剂需要进行除菌过滤后才能成为品质可靠的制品（部分病毒疫苗因病毒颗粒较大、乳状絮凝、或佐剂限制，无法采用除菌过滤者不在本方案描述范围）。通常，国内厂家应用于动物疫苗的除菌过滤产品（滤芯），受动物疫苗特殊的市场需要、定位限制，可能需要重点考虑过滤器的以下几点特性：

性能－价格（合理）

材质化学耐受（能耐受强碱清洗）滤芯灭菌耐受（能多次反复灭菌）完整性检测（有细菌挑战验证）

本方案综合考虑上述4个方面对过滤器的综合特性要求，推荐阁下在疫苗除菌工艺中使用Pall Supor EKV聚醚砜（PES）除菌过滤器。

0.65μm渐变预过滤层

Supor EKV过滤器（10英寸）主要特点参数

项目

参数描述

非对称双层聚醚砜滤膜表层滤膜0.65μm，底层滤膜0.2μm

综合了良好的容污能力（寿命）和病毒滤过回收率

10英寸面积

0.6 m2 耐受流体压差5.5bar@40℃，4.0bar@80℃；

耐受最大反向压差2bar@40℃

高温灭菌（最少耐受）

30次×60min@125℃滤速特性净水通量> 17L/min@100mbar，20℃除菌过滤验证

经过验证，有《验证指南》备索

颇尔公司过滤技术服务部非常高兴与贵公司合作，并且希望在过滤技术方面为您提供进一步服务。

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