流产布鲁氏菌诱导人类T淋巴细胞的凋亡

Brucella abortus induces apoptosis of human T lymphocytes

流产布鲁氏菌诱导人类T淋巴细胞的凋亡

摘要：免疫逃避是布鲁氏菌在面对CD4+T细胞有效的适应性反应后在其内存活的必

要条件。之前我们已经证明B.abortus可以通过下调MHC-Ⅱ分子的表达及巨噬细胞的抗原呈递间接的抑制CD4 + T细胞。然而，目前还不清楚B.abortus是否能够直接干扰T淋巴细胞。据报道，即使低水平的和非复制型的入侵T淋巴细胞，B.abortus也能诱导人类T淋巴细胞的凋亡。灭活的B.abortus也能产生同样的现象，说明有一个复杂的细菌的结构成分。我们已证明，典型的B.abortus外膜脂蛋白（L-Omp19），而并非他的非脂化形式，能诱导人类T淋巴细胞的凋亡。此外，合成的脂己肽能模拟蛋白的脂质部分的结构也能诱导T淋巴细胞死亡的增加，这表明牵连到现象的结构部件可以是任何B.abortus脂蛋白。B.abortus诱导的T淋巴细胞的凋亡依赖于TNF-α的分泌，因为用抗TNF-α的单克隆抗体预孵育的T淋巴细胞细胞的凋亡被抑制。总体而言，这些结果说明了一种新机制，通过直接抑制T细胞介导的反应B. abortus可能逃避适应性免疫反应。

1.前言

布鲁氏菌的感染已被证明能强而有效的激活先天的免疫系统，能导致一个前炎症反应，有利于T淋巴细胞分化Th1。此反应是消除感染的关键。然而，布鲁氏菌可以在巨噬细胞存活很多年，逃避宿主细胞介导的免疫反应并建立慢性感染。T细胞免疫应答的产生需要抗原呈递细胞（APCs）的提呈和MHC 的基因表达。 MHC 分子在免疫应答中具有重要的生物学意义：一方面，MHC 分子直接参与抗原提呈细胞(APC) 对内源性或外源性抗原的提呈；另一方面，TCR (T细胞表面特异性识别受体) 在特异性识别 APC 所提呈的抗原肽过程中，必须同时识别与抗原肽结合成复合物的 MHC 分子，才能产生 T 细胞激活信号，即 MHC 限制性。因此，为了逃避T淋巴细胞的应答反应，建立慢性感染，布鲁氏菌可能采用不同的方法。这种策略可以间接靶向APCs（例如：抗原呈递受损），直接靶向T淋巴细胞，或者两者都可以。

关于流产布鲁氏菌是如何在巨噬细胞生存的，已经了解的很多。然而，流产布鲁氏菌是以何种方式干扰适应性T细胞免疫还不完全了解。我们目前的研究已经证明，流产布鲁氏菌感染人类单核细胞或巨噬细胞能抑制MHC-II分子的表达和CD4+T淋巴细胞抗原的呈递。这种现象是由布鲁氏菌脂蛋白引起的，依赖于Toll样受体2（TLR2），并受到白细胞介素-6（IL-6）调节。同时，流产布鲁氏菌的脂多糖（LPS）通过在APCs的细胞膜上形成LPS的微结构域破坏MHC-II的递呈途径。布鲁氏菌在巨噬细胞内长时间的生存和繁殖的机制说明，布鲁氏菌能间接调节CD4 + T细胞的功能。

目前还不清楚流产布鲁氏菌是否能够直接干扰T淋巴细胞。本实验室以前的研究结果已经证明，流产布鲁氏菌感染个体在疾病的慢性期Th1反应发生减弱。此外，还指出慢性布鲁氏菌病患者外周血CD4+、CD8+淋巴细胞呈现出一个减少的时期。这些结果表明，流产布鲁氏菌可以通过减少在慢性感染的T淋巴细胞的数量限制T淋巴细胞反应。

近来病原体诱导T淋巴细胞凋亡受到很大的关注，因为它是一个重要的免疫系统的调节机制，并涉及了感染性疾病在发展过程中效应功能的损失。某些微生物的病原体可能会提高他们在受感染的宿主内生存能力，使宿主细胞在防御过程中致使细胞死亡，其中T淋巴细胞是一个主要的靶细胞。因此，T淋巴细胞的凋亡在布鲁氏菌的感染和生存的过程中发挥着重要的作用。尽管布鲁氏菌主要存在于巨噬细胞内，在细胞外的感染和传播过程中也存在。因此，这些微生物会在他们的生活周期中直接与T淋巴细胞相互作用。

在这项研究中，我们研究流产布鲁氏菌是否能直接影响T淋巴细胞的生存。此外，我们还研究了流产布鲁氏菌的组成部分及其在这种现象中的相关作用机制。

2材料与方法

2.1 细菌的培养

流产布鲁氏菌S2308细胞在10ml的胰蛋白酶大豆汤中37℃摇床培养过夜。4℃ 6000转离心15min收菌，用10ml PBS洗两次。与实验室在600nm处的光密度的标准曲线相比较计算细菌的数量。将培养物用PBS稀释到所需的浓度，通过在胰酶大豆琼脂糖培养基上涂板来测定接种物的浓度。为了获得灭活的流产布鲁氏菌，用无菌的PBS洗涤5次，每次10min，70度热灭活20min，分装，-70°C保存备用。灭活后的流产布鲁氏菌涂板验证，没有细菌生长。所有活的布鲁氏菌要在P3安全实验室进行。

2.2克隆，表达和纯化重组L-Omp19和U-OMP19

如先前所述，克隆和纯化脂蛋白，为了消除LPS造成的污染，用琼脂糖多粘菌素B吸附重组的外膜蛋白。用Limulus Amebocyte Lysate鲎试剂是由海洋生物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品，含有能被微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原，凝固蛋白原，能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素和（1,3）-β-葡聚糖激。目前，鲎试剂广泛用于制药、临床以及科研等领域，用于细菌内毒素和真菌葡聚糖检测。目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎试剂两大类。 实验检测，这两种蛋白所含内毒素均小于0.25U/ug。BCA法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。测定蛋白浓度，用牛血清白蛋白为标准。将纯化的蛋白分装，-70°C保存备用。

2.3 LPS和脂肽

流产布鲁氏菌s2308 LPS由I.Moriyon提供（纳瓦拉大学，潘普洛纳，西班牙）。该制剂的纯度和特性在其他地方已经描述了。人工合成的脂己肽购自Boehringer Mannheim德国宝灵曼公司。

2.4细胞和培养基

所有的实验均在RPMI1640培养基37度5%的CO2。采集健康人的血液通过聚蔗糖-泛影葡胺（GE医疗）梯度离心分离外周血单核细胞（PBMCS）。T淋巴细胞从外周血单核细胞分离得到，使用CD3+ CD4+和CD8+T淋巴细胞负分离试剂盒，按照操作说明进行分离。通过流式细胞仪验证分离纯化的CD3+ CD4+和CD8+T的浓度分别大于98%，90%和78%。THP-1细胞从美国典型培养物保藏中心获得的，并如前面所述培养。通过台酚蓝排斥实验测定，细胞的存活率为95%以上。

2.5体外感染

用流产布鲁氏菌以不同方法多重感染THP-1细胞或T细胞并在不含抗生素的培养基上培养2h。然后将细胞充分的洗涤以除去外面的细菌，感染的细胞应在含100微克/毫升庆大霉素和50微克/毫升链霉素的条件下培养以便杀死残留的胞外菌。在不同的时间感染后，在处理之前用PBS将细胞洗涤3次。为了检测布鲁氏菌在细胞内的生存，用0.1%的Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)裂解感染的细胞，然后用PBS洗涤稀释后在蛋白胨大豆琼脂糖培养基上培养CFU计数。

2.6细胞凋亡检测

用布鲁氏菌以不同的MOI :multiplicity of infection，感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为PFU（plaque forming unit，空斑形成单位）。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是PFU number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值感染T淋巴细胞或者用HKBA, L-Omp19,U-Omp19, Pam3Cys刺激并在特定的浓度下培养24h，48h或者6天。然后，洗涤细胞并用膜联蛋白V-FITC（BD Biosciences公司）和碘化丙啶（PI;BD Biosciences公司在冰上避光孵育10分钟。通过FACSCalibur流式细胞仪检测细胞凋亡率和使用FlowJo软件处理数据。Annexin V的阳性细胞被认为是细胞凋亡。通过流式细胞仪用FragEL 荧光检测试剂盒TUNEL法进行检测细胞凋亡。将T淋巴细胞接种于培养皿中密

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度为每孔1.5×10用Hoechst 33,3 42燃料染色培养48小时后可用荧光显微镜观察凋亡细胞。标记的细胞可通过荧光显微镜分析。

2.7流式细胞技术FCM

为了描述T淋巴细胞的表型特征，用PE标记的抗人CD8单克隆抗体，FITC标记的抗人CD4单克隆抗体，PerCP标记的抗人CD3单克隆抗体或者同类型的抗体进行染色。标记后，用FACSCalibur流式细胞仪进行细胞分析并用FlowJo软件处理数据。

2.8前列腺素的产生

放射免疫法（RIA）是用来检测上清中PEG2的水平的。简单的说，就是用抗血清在4度孵育30min。加入标记物后4度培养60min。再加入活性炭：葡聚糖(1%: 0.1%)溶液4度孵育10min。离心15分钟，用液体闪烁计数仪测定上清中氚的活性。

2.9抑制PGE2的产生

在用100um吲哚美辛存在或缺乏的的条件下用流产布鲁氏菌感染T淋巴细胞48小时。然后，用Annexin V/PI检测细胞凋亡。

2.10细胞因子的产生

使用ELI SA法检测上清中人类TNF-a的浓度。

2.11抑制可溶性TNF-a的产生

用人类的TNF-α孵育T淋巴细胞30分钟中和单克隆抗体或者同类型分别做对照。然后用L -Omp19培养48小时，用Annexin V/PI进行细胞凋亡检测分析。

2.12统计分析

试验结果用单因素或双因素方差分析，用GraphPad Prism软件进行邦弗朗尼（Bonferroni）事后检定/检验。数据表示为平均值+标准差或标准误。

3 结果

3.1 流产布鲁氏菌能感染T淋巴细胞但不复制 流产布鲁氏菌寄生于巨噬细胞，会采用不同的免疫逃避策略。为了研究流产布鲁氏菌采用的这些策略是否也使用于其他的免疫细胞，我们决定探讨其对T淋巴细胞的影响。我们首先要确定流产布鲁氏菌感染T淋巴细胞的能力。高度纯化从人体外周血单核细胞负筛选的T淋巴细胞。通过流式细胞仪检测分离纯化的CD3的结果到达98%以上。(图1A和B)。用流产布鲁氏菌2308菌株以不同的感染复数去侵染纯化的T淋巴细胞。用THP-1单核细胞系作为对照，众所周知，它也能被布鲁氏菌感染并在胞内复制。如图1C所示，即使流产布鲁氏菌侵入T淋巴细胞的细菌数大大低于THP-1细胞，然而，动力学分析，我们观察到流产布鲁氏菌不能够在T淋巴细胞内复制（图1D）,这个结果表明B. abortus能够感染T淋巴细胞，但是，这些细胞不能为细菌提供复制的场所。

3.2布鲁氏菌诱导T淋巴细胞的凋亡

接下来我们评估在缺失APCs的情况下流产布鲁氏菌是否能诱导T淋巴细胞的凋亡。为此，纯化MOI感染24h，48h，6天的T淋巴细胞，并用Annexin V-FITC和PI染色进行流式细胞仪分析。2%的PFA用作阳性对照。在24h时，布鲁氏菌不能显著的诱导T淋巴细胞的凋亡（图2A）。然而，我们发现，在48h和6天培养的凋亡细胞的数量明显增加（图2A,B）。用血小板结合抗CD3刺激T淋巴细胞也获得类似的结果，说明流产布鲁氏菌能够在自然条件下激活T淋巴细胞（数据未显示）。为了更进一步的证实结果，我们用TUNEL法检测T淋巴细胞的凋亡。在这些实验中我们用DNase I作为阳性对照。再次证明，B.abortus能诱导TUNEL阳性细胞的数目的剂量依赖性增加（图2C）。为了确定被B. abortus感染的T淋巴细胞的数量，我们通过PBMCs负筛选纯化获得CD4+和CD8+淋巴细胞用不同MOI布鲁氏菌感染这些细胞，在48h，Annexin V/PI对细胞染色和流式细胞仪对其凋亡进行检测。如图2D,E所示，B.abortus诱导CD4+T淋巴细胞的凋亡存在剂量依赖性。另一方面，尽管B. abortus提高诱导CD8+T淋巴细胞的增加，但是不明显。总之，这些结果表明，B. abortus能够诱导T淋巴细胞凋亡不依赖于APCs，CD4+T淋巴细胞相比于CD8+T淋巴细胞更容易被B. abortus感染引起凋亡。

3.3 HKBA也能够诱导T淋巴细胞的凋亡

为了检测活的细菌对于诱导T淋巴细胞的凋亡是否是必需的，我们研究HKBA是否能够也能够引起凋亡。如图3A和B所示，48小时后，活菌和灭活的流产布鲁氏菌都能诱导Annexin V阳性细胞剂量依赖性增加。HKBA诱导的凋亡也是通过Hoechst dye.染色检测的。由HKBA培养的细胞与未刺激的细胞的稠核相比较，结果如图3C所示。这些结果表明，流产布鲁氏菌对T淋巴细胞的影响不依赖于细菌的生存能力，说明T淋巴细胞的凋亡是由细菌的结构元件引起的。

3.4 L-Omp19诱导T淋巴细胞的凋亡

我们分析B. abortus LPS对HKBA诱导T淋巴细胞的凋亡的影响，发现高度纯化的B.abortus LPS不能够诱导T淋巴细胞的凋亡（数据未显示），与所使用的细菌浓度相比。然后，认为细菌的脂蛋白和许多细胞类型中的促凋亡因子类似。我们调查发现，布鲁氏菌的脂蛋白可能是诱导凋亡的结构元件。为了验证这个假设，我们使用重组脂化的omp19（L-Omp19）作为布鲁氏菌的脂蛋白模型。用L-omp19孵育T淋巴细胞，48小时后Annexin V染色。L-omp19能诱导T淋巴细胞剂量依赖性凋亡。另外，T淋巴细胞的凋亡依赖于脂化的L- Omp19，未脂化的Omp19（U- Omp19）不能诱导凋亡（图4A和B）。此外，Pam3Cys，一种合成的脂己肽，模拟了脂蛋白的脂质不分的结构，也能诱导Annexin V阳性细胞的剂量依赖性增加（图4C）。这表明，L-omp19的影响可以扩展到所有流产布鲁氏菌的脂蛋白。用Hoechst dye.染色再次证明了这个结果。用L-omp9表达的核与染色质结合孵育细胞，并用阳性对照PFA孵育形态相似的细胞（图4D）。综上所述，结果表明，B. abortus 的脂蛋白L-O mp19也能够诱导T淋巴细胞的凋亡。

3.5 B. abortusT淋巴细胞的凋亡不依赖于PGE2的分泌

由于前列腺素如PGE2能有效的调节T细胞的活性，我们推测，他们可能参与了B. abortus.诱导的细胞凋亡。为了验证，用B.abortus.感染T淋巴细胞，48小时后，用RIA检测PGE2的水平。如图5A所示，B. abortus.感染使得PGE2分泌显著增加。接下来，我们在吲哚美辛存在或缺乏的情况下感染T淋巴细胞48小时，抑制前列腺素的产生。Annexin V检测凋亡。在PGE2缺乏的情况下，不影响B. abortus对T淋巴细胞的诱导凋亡（图5B）。结果表明，PGE2不参与诱导T淋巴细胞的凋亡。

3.6 TNF-a有助于L-OMP19调节T淋巴细胞的凋亡

考虑到TNF-a是T淋巴细胞凋亡的一个调解子，当用TLR2配体刺激细胞时，T淋巴细胞可以分泌这种因子。我们决定调查TNF-a是否参与B. abortus 和 L-Omp19, 两个 TLR2 l配体引起的细胞凋亡。首先，用不同MOI的B.abortus感染T淋巴细胞，48h，6天后用ELISA分别检测TNF-a的浓度。如图6A，感染后TNF-a的分泌明显增加。这种因子的产生在48h增加，6天略有下降。L-OMP19也诱导剂量依赖于TNF- a的分泌。正如预期的那样，U-OMP19不能产生这个结果(图6B)。接着 ，在中和性抗-TNF-a抗体存在的情况下或者其他的同类型的作为对照，用L-omp19孵育T淋巴细胞。48小时后，用Annexin Vassay检测凋亡细胞。中和TNF-a的L-OMP19诱导的细胞凋亡显著下降（图6C）。总而言之，这些结果表明B. abortus 和 L -Omp1 9都能诱导T淋巴细胞分泌TNF-α和诱导这种细胞因子介导的细胞凋亡。

4 讨论

B.abortus作为一种慢性和持久的进化成功的病原体依赖于它以各种不同的方式逃避宿主细胞的免疫反应。先前，我们证明了，感染B. abortus能够下调MHC-II的表达和对人类巨噬细胞的抗原呈递。这一策略可以被视为躲胞内持续感染巨噬细胞，从而间接的阻碍T淋巴细胞的反应。然而，B. abortus也可以利用其他的手段操纵宿主细胞的免疫反应，通过直接的攻击它的主要靶细胞，T淋巴细胞。在这项研究中，我们评估了这种可能性。具体来说，我们调查了B. abortus是否能够调节T淋巴细胞的生存。

首先我们问B. abortus是否能够感染这类细胞。我们提出了证据，B. abortus无法以一种有效的方式感染T淋巴细胞。事实上，观察到不仅入侵的水平大大低于THP-1细胞，而且细菌也不能在T淋巴细胞内复制。这似乎并不奇怪，如果我们已经确定，吞噬细胞是细菌在宿主细胞内的优先复制细胞，尽管它也能够感染其他的非吞噬细胞类型。可能，T淋巴细胞中不包含合适的吞噬器官或者布鲁氏菌复制形成液泡足够的细胞环境。

虽然T淋巴细胞的入侵是非常低和非复制的，我们证明了B.abortus能够以一种独立的APC方式诱导T淋巴细胞的凋亡。这一结果引发了一个问题，细菌是如何在巨噬细胞内生存的，以及以一种直接的方式与T淋巴细胞作用的。已经确定，在布鲁氏菌感染过程中的某些时期，细菌的接种物是如此之高，局部防御机制是无法遏制感染，因此，这些微生物可以到达血液而导致菌血症。菌血症不仅发生在急性布鲁氏菌患病者而且也发生在慢性布鲁氏菌病患者复发时期。因此，当细菌位于细胞外的T淋巴细胞环境时，可以与T淋巴细胞直接作用。

本研究是第一次描述，在没有APCs作用下，B. abortus可以直接调节T淋巴细胞。但是，也有证据表明，该机制也可用于其他病原体。例如，分支杆菌肺结核，另一种细胞内细菌，通过直接干扰近端的TCR信号，可以抑制活化的CD4＋T淋巴细胞，细胞壁的糖脂结构部件参与了此现象。同样，其他病原体如疱疹病毒家族也能够抑制TCR信号近端。

Annexin V的凋亡也通过使用TUNEL分析法得到证实。Annexin V分析法可以检测早期的凋亡，这可能不是朝着晚期凋亡恢复到正常的状态，因此，过高的估计了凋亡的细胞数目。同时，TUNEL法检测DNA片段化，即晚期凋亡。不过，用这两种技术我们已取得了类似的百分比凋亡细胞，这可能表明大部分的T淋巴细胞在感染B.abortus过程中都经历从早期凋亡到晚期凋亡的过程。

近日，Skendros等审阅了细胞免疫反应，可以解释Th-1缺陷的免疫反应和T细胞在慢性布鲁氏菌病患者中的无效性。一些最相关的数据表明慢性布鲁氏菌病患者呈现出减少了周围CD4+ CD25+ T淋巴细胞与CD4/ CD8的比例。此外，与急性布鲁氏菌病患者相比，来自慢性布鲁氏菌病患者的PBMCs表现为低增生性反应和针对特定布鲁氏菌抗原的TH1细胞因子产生有所下降。特别是，在慢性布鲁氏菌病患者的PHA的缺陷的T细胞增殖反应与CD4+子集相关。在另一项研究中，来自于慢性布鲁氏菌病患者中的T淋巴细胞显示出减少了CD69早期活化标志的表达。此外，用长时间患病的全血培养HKBA的特征在于CD3+IFN-γ+T细胞显著减少。我们的结果表明，B. abortus能诱导T细胞的凋亡，也表明CD4+T细胞与CD8+T细胞更易于导致细胞凋亡，与这些研究结果相一致。不仅如此，至少部分的也可以解释，所有这些临床证据可以改变慢性布鲁氏菌病患者的T细胞反应。

凋亡被描述为一个活跃的，自主的细胞拆除编程过程，避免引发炎症。因为细胞凋亡被看作一个稳定的控制过程，其发生在特定的传染过程，引起了很大的关注。先前描述的多种病原体已成为导致凋亡的特征细胞死亡。Kremer等已经表明，在C57BL/6小鼠体内有丝分裂后体外T淋巴细胞增殖缺陷或TCR刺激都将导致CD4+和CD8+T淋巴细胞凋亡增多更易感染牛结核分枝杆菌BCG。此外，其他病原体，如莱姆病螺旋体，单核细胞增生李斯特氏菌，沙眼衣原体和肺炎链球菌也能诱导T淋巴细胞的凋亡无论是以直接或间接（从感染

的巨噬细胞内）的方式。因此，T淋巴细胞的凋亡在建立感染和随后病原体的生存中发挥重要作用。

B. abortus诱导的凋亡不依赖于细菌的生存能力，因为HKBA也能产生同样的效应。此外，这一结果表明，有一种细菌结构元件参与了此反应。在这项研究中，我们已经证明，B. abortus外膜脂蛋白就是导致T淋巴细胞凋亡的元件。L -Omp19，一个典型的B. abortus脂蛋白，在整个细菌中概括的诱导T淋巴细胞的凋亡。相反，U- Omp19没有这样的效果，表明，OMP19的酰化反应是其生物活性所必需的。不仅L-Omp19而且Pam3Cys都能诱导T淋巴细胞的凋亡。由于所有的布鲁氏菌的脂蛋白都被类似Pam3cys所修饰，相比于其他的脂蛋白都能产生这样的效果。我们的研究结果，B. abortus的脂蛋白对T淋巴细胞的促凋亡的能力，与Aliprantis等人研究的TLR2介导的细胞活性，用其转染HEK293细胞，观察到细菌的脂蛋白/脂肽有促凋亡的性能的结果相一致。如之前所述，伯氏疏螺旋体脂化的脂蛋白ISPA 和OSPC能诱导T淋巴细胞凋亡。此外，在我们的实验室，我们展示了布鲁氏菌脂蛋白在星形胶质细胞中的促凋亡特性。总之，这些结果表明，在不同的细胞类型中细菌脂蛋白能诱导细胞凋亡。前列腺素是一种强有力的免疫调节剂，特别是T淋巴细胞。如先前所述，PGE2不仅能抑制T细胞的增殖，而且对T淋巴细胞的凋亡也有很大的影响。Chattopadhyay等表明肿瘤分泌物PGE2能下调IL-2受体的表达，因此抑制CD4+T细胞的生存。在这里我们表明，感染B. abortus能诱导T淋巴细胞分泌PGE2.然而，PGE2不参与T淋巴细胞的凋亡，因为阻止了前列腺素的产生而吲哚美辛对此没有影响。PGE2在感染期间分泌有另一个目的，例如抑制T细胞的增殖或促炎症性细胞因子的产生。

TNF-a是T淋巴细胞促凋亡的细胞因子。此外，有证据表明，结核分枝杆菌和感染沙眼衣原体的巨噬细胞通过分泌TNF-a能诱导T淋巴细胞的凋亡。尽管巨噬细胞不包括在我们所研究的内容中，但当用TLR2配体刺激时，CD4+T淋巴细胞有分泌TNF- a的能力。在我们的研究中，我们提出B. abortus能诱导TNF-a调节T淋巴细胞的凋亡。用B. abortus或者L-Omp19刺激T淋巴细胞能诱导TNF- a的产生。此外，L-Omp19诱导的凋亡在中和抗-TNF- a抗体存在的情况下可以恢复。这些结果表明TNF- a参与了诱导T淋巴细胞的凋亡。

总而言之，我们的结果表明，B. abortus通过它的脂蛋白和TNF-a的分泌的方式诱导T淋巴细胞的凋亡，一种新的机制强调了这种病原体有利于调节宿主免疫反应的能力。这可以被认为是一个新的B.abortus靶向T淋巴细胞的逃避策略，各种临床证据也可以解释在慢性布鲁氏菌病患者中B. abortus改变了细胞的功能。

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