原生质体制备方法
更新时间:2024-06-12 19:44:01 阅读量: 综合文库 文档下载
原生质体制备方法
培养基:
① PDA:200g土豆、20g葡萄糖、20g琼脂、1L水
② MYG液体培养基:5g麦芽糖、5g酵母提取物、10g葡萄糖、1L水、PH6.5
③ MYG液体再生培养基:5g麦芽糖、5g酵母提取物、10g葡萄糖、0.5mol蔗糖、1L
水、PH6.5
④ MYG软再生培养基:5g麦芽糖、5g酵母提取物、10g葡糖糖、8g琼脂粉、0.5mol
蔗糖、PH6.5
试剂:
① 1mol/L MgSO4 ② 0.5mol/L MgSO4
③ STC:0.8M 山梨醇、50mM Tris-Hcl(PH8.0)、50mM CaCl2 ④ 肝素
⑤ SPTC:0.8M 山梨醇、40% PEG、50mM Tris-Hcl(PH8.0)、50mM CaCl2 ⑥ 无菌水
操作步骤:
① 倒若干PDA平板,将GF-WT接入PDA平板,23℃,活化5-7days
② 用无菌黄枪头在GF-WT平板上打孔,用长牙签挑出4个菌饼接入50ml/瓶的MYG
液体培养基中,120rmp,28℃,12h
③ 以10%的接种量接5瓶以上50ml/瓶的MYG液体培养基中,60rpm,28℃,16h ④ 混有大量悬浮菌丝的培养基用无菌的带有三层擦镜纸的漏斗过滤下来,用无菌
水和1mol/L MgSO4各冲洗三次,菌丝发白即可,冰上备用
⑤ 酶解体系的配制:取Dryslase 45mg+Yartlase105mg至无菌量管中,用10ml
1mol/L MgSO4溶解彻底,用无菌滤头和针筒过滤除菌,滤液保存于冰上
⑥ 1g菌丝加入到10ml酶解体系中,于无菌三角瓶中进行酶解反应,30℃,60rpm,
3h
⑦ 用带有无菌滤布的漏斗过滤酶解液,滤液用无菌50ml大管收集,用20ml
0.5mol/L MgSO4冲洗三角瓶和漏斗,3500rpm,10min,取上清 ⑧ 沉淀用20ml STC溶解悬浮,3500rpm,10min,取上清
⑨ 沉淀下来的原生质体用800μL STC溶液悬浮,并加入200μL的SPTC溶液,加
7
入SPTC时一滴一滴加,混匀后镜检计数,大于10可用,冰上备用
正在阅读:
原生质体制备方法06-12
给七月的一封信10-28
2018年最新人教部编版七年级语文上册全册单元导学案及答案11-15
安徽建筑工业学院模电期末试题07-27
实验二 细菌抹片的制备及染色12-24
与美国大选有关的英语词汇07-03
自动控制原理精品课程第三章习题解(1)11-19
语法专用名词解释09-07
增值税专用发票开红字发票流程08-17
“伦敦鲸”事件的系统解读 - 图文01-22
- Win7 安装MySql图示
- 计算器课程设计报告
- 部编版八年下语文第三单元第六单元古诗文理解默写练习及答案
- 13质量通病防治方案和施工措施
- 土力学试题~~~~
- 公务员打印资料
- 传热膜系数测定实验报告 - 图文
- 新时期煤矿协管安全工作的创新与实践
- 第五章 习题及参考答案
- 220kV架空线路强条执行记录表
- 音乐欣赏读后感
- 高炉
- 劳动教育需要新的时代内涵
- 10建筑地面工程施工质量验收规范GB50209-20021
- 银行会计练习题2答案
- 2013年七年级地理上册知识点复习提纲湘教版
- 人教版三年级语文上册第四单元测试题(A卷)(有答案)
- 营养师第九章练习题
- 湖北省武汉市2018届高三毕业生二月调研 理综化学
- 行业分析2018-2023年中国男性护肤品行业市场发展分析及投资前景
- 质体
- 原生
- 制备
- 方法
- 3种最简单神经网络的结构及学习算法
- 江苏省无锡市2018年中考语文试题及答案解析(word版)
- 苏教版小学科学三年级下册期末重点复习题
- 西安碑林导游词
- 2015届高考调研文科课时作业22
- 高考复习-地理(地球运动练习)
- 孙金龙在市委常委中心组理论学习会上的讲话
- 文献翻译陈朋
- 辽宁林业职业技术学院毕业论文规范
- 小学科技活动记录簿(一.二年级)
- 纳米SiO2聚合物复合材料 (1)
- 山东省邹平双语学校2017-2018学年高三上学期期中考试语文试题 Wo
- 高考小说阅读——理解文中重要语句 学案
- 《我爱红领巾》说课稿
- 金融危机下我国科技创新的八大使命资料
- 计算机组网技术实验报告 - 图文
- 如何订立合同提纲
- 八年级上册学生评语
- 一元线性回归模型习题及答案
- 三角函数解三角形题型归类练习