130109132 杨玉敏 实验一、维生素C的测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法

实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)

姓名：杨玉敏 学号：130109132 组号：4组

实验日期：2016年/4月/7日 实验地点：逸夫楼食品营养实验室7D302

一、测定原理

2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO—C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。

2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。

还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。

当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。

在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。

反应式如下：

二、实验仪器与试剂 1.仪器

(1)公用仪器

①组织捣碎机；水果刀；②托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；③1000ml烧

杯；250ml烧杯；500ml、1000ml量筒；④20cm镊子；⑤蒸馏水，蒸馏水洗瓶；⑥记号笔、标签纸、定性滤纸。

(2)分组及仪器：(12人一组，共4组) 每组仪器包括：

①100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL棕色容量瓶，250mL棕色容量瓶；②10ml量筒；③5ml、10ml移液管；

④(微量)酸式滴定管；⑤50ml、500ml烧杯；⑥50ml或100ml三角烧瓶；⑦漏斗；漏斗架；

⑧台式离心机；⑨电炉；⑩吸耳球；玻璃棒。

2.原料及试剂

本实验材料是橙子、草酸、抗坏血酸、2,6-二氯酚靛酚、碳酸氢钠，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯。

原料：橙子。

(1)2%草酸溶液:草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。 (2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。（以上全班统一配制）

(3)抗坏血酸标准溶液：

精确称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，最好临用前配制，冰箱中保存。1mL含0.2mg抗坏血酸。

(4)0.02%2,6-二氯酚靛酚溶液：

称取碳酸氢钠52mg，溶解在200mL沸水中。再称取2,6-二氯酚靛酚50mg，溶于上述碳酸氢钠溶液中。冷后，过滤于250ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。于冰箱中保存。。

临用前按下法标定：

取2mL浓度为0.2mg/ml的抗坏血酸标准溶液于三角瓶中，加1%草酸5mL，摇匀，用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微红色，15s不褪色即为终点，并计算如下：

每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=C×V1/V2。

式中：C----抗坏血酸的浓度(mg/ml)；V1----抗坏血酸的量(ml)；V2----消耗染料溶液的量(ml)。

三、实验步骤

1.取300～500g新鲜橙子(去皮、去核)，置于1000ml烧杯内，称重，精确至0.01g。 2.将样品倒入组织捣碎机，加入等量2%草酸（W∶V），加盖旋紧，匀浆2～5min。 3.取出匀浆物质。（以上统一进行）

4.称取10-30g匀浆物质(使其含有VC1-5mg)于50ml小烧杯中，精确度1%，编号，记录。(第一组取10g，第二组取20g，第三、四组取30g)。

5.用少量1%草酸将称取的匀浆物质倒入100ml容量瓶中，并用1%草酸反复洗涤 烧杯（3次），其洗涤液一并移入，并用1%草酸定容到100ml。 6.加塞后将匀浆物质与1%草酸充分混合，静置10min。 7.取上述溶液过滤或离心。

8.用移液管吸取5-10ml滤液置于三角烧瓶内，加入10ml1%草酸（2个平行样品）；用移液管吸取5-10ml蒸馏水，加入10ml1%草酸（空白对照）。(第1-3组取10ml，第4组取5ml)

9.2,6二氯酚靛酚染料滴定至终点（淡粉红色，15s不褪色），记录染料消耗量。若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可加1ml氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。

10.计算每100g样品中维生素C的含量（ml）及平行样品误差范围，公式如下： 维生素C含量（ml/100g）=[(V`1-V`2)×T/W]×100 式中：V`1----滴定样品时耗去的染料溶液的量(ml)；

V2----滴定空白时耗去的染料溶液的量(ml)； T----1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数； W----滴定时所取的滤液中，含样品的量(g)。

`

四、实验结果、数据计算与分析

《食物成分表》（全国平均值）中橙子的VC含量约33mg/100g。与测定值比较。

实验数据：橙子：300.10g、草酸：20g、抗坏血酸：0.0225g、橙汁：30g、

2,6-二氯酚靛酚染料：0.0510g。

V1=20ml V2=21.77ml C=0.225mg/ml

计算得出：每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数

=滴定度(T)

=C×V1/V2=（0.225*20/21.77）mg/ml =0.207 mg/ml

样本一：7.12ml 样本二：7.25ml

V`1=7.185ml V`2=0.25ml W=0.75g 4.35

计算得出：维生素C含量（ml/100g）

=[(V`1-V`2)×T/W]×100

=

五、注意事项及说明

(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物定容时泡沫太多，可加数滴丁

醇或辛醇消泡。

(2)大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用2％草酸溶液制成匀浆以保存维生素C。 (3)样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免抗坏血酸被破坏。

(4)整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。

(5)本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。 2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用。

(6)干扰滴定因素有：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶，直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。 (7)提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。

(8）市售2,6-二氯酚靛酚质量不一，以标定0.4mg抗坏血酸消耗2mL左右的染

料为宜，可根据标定结果调整染料溶液浓度。

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