第五周化学实验报告

华南农业大学实验报告

专业班次 11农学1班 组别 201130010110

题目 分光光度法测定食品中的亚硝酸盐 姓名 梁志雄 日期

一、目的要求

了解并熟练掌握分光光度计的结构和使用方法；掌握比色法测定食品中亚硝酸盐的原理和方法。

二、实验原理和技术

利用分光光度法测量亚硝酸盐含量，样品经过沉淀分离出蛋白质，除去脂肪后，在弱酸的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮化反应，生成重氮化化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合，形成紫红色染料，其颜色的深浅与亚硝酸盐的含量成正比，在最大吸收波长538nm处测定其吸光度，服从朗伯比尔定律，通过标准曲线法可以计算出样品中亚硝

酸盐的含量。﹙备注：朗伯比尔定律，A=K·C·l﹚ 三、操作步骤

1、 配置标准系列 吸取0.00ml 、0.40 ml 、 1.20 ml 、1.60 ml 、 2.00 ml亚硝酸钠

标准使用液，分别置于25 ml的容量瓶中，分别加入2 ml对氨基苯磺酸溶液，均匀，静置三到五分钟后各加入1 ml盐酸萘乙二胺溶液，加去离子水至刻度，混匀，静置15分钟，即可测定；

2、 绘制标准曲线 试剂空白做参考调节零点，用1cm比色皿，将所配置的标准系列在

538nm处依次测定其吸光度，绘制标准曲线；

3、 测定 吸取十毫升上述滤液于25ml容量瓶中，与标准系列一样加入显色

剂，显色剂与标准溶液一起进行测定，并在标准曲线上查出相应的亚硝酸盐质量，计算样品中其的含量。

4、 分光光度计的操作步骤 1操作前预热三十分钟 ○2调波长到538nm ○3按下Mode键让“ABS”亮 ○4放入 ○

5测定参比时，6记录各个样品的吸光度 ○7取参比和样品 ○按下0A/100%T 调零-0.000 ○

出比色品洗干净。

四、实验现象

在加对氨基苯磺酸之前，比色管中的溶液都是无色的，当加入对氨基苯磺酸溶液之后，先前加入过亚硝酸苯磺酸标准使用液的比色管中的溶液呈现出紫红色，且随着亚硝酸钠标准使用液体积的增加而颜色逐渐加深。

五、实验数据记录和处理

1、 2 3 4 5 6 编号 1参比 样品 亚硝酸钠盐/ug 吸光度 0 0.000 2 0.089 4 0.135 6 0.190 8 0.246 10 0.295 4.102 0.129 2、从“分光光度法测定食品中的亚硝酸盐线性分布图”中得知，拟合的直线的线性方程为Y=0.1477X+0.0078 拟合度R2=0.9954 把样品中的分光度代入得出样品中亚硝酸盐含量为4.102ug 故综上样品中亚硝酸盐的浓度为0.4102/mL

六、 数据处理与分析

1、 实验中亚硝酸钠标准使用液应该准确加入，因为这些试剂是作为一个标准，对于实

验中要测量的分光度有一个决定性的影响；其次对于对氨基苯磺酸和盐酸萘乙二胺溶液，则并不需要准确加入，但为了实验效果，可以适量增加；

2、 实验中当加入了对氨基苯磺酸溶液之后，一定要静置3~5分钟后才能加入盐酸萘乙

二胺溶液，经查阅资料可知，在正常情况下，亚硝酸盐在酸性情况下，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸萘乙二胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物，其颜色与样品中的亚硝酸盐含量成正比，但是如果加入了对氨基苯磺酸后，提前加入盐酸萘乙二胺试剂，则盐酸萘乙二胺会与亚硝酸盐反应，减少了亚硝酸盐的含量，造成了实验的误差。

3、 在分光度测定的过程中，由于分光皿的吸光度的差异，会影响最终实验结果，解决

的办法是先用蒸馏水做分光度实验，了解每个分光皿的吸光度，在测量实验样品时，根据各个分光皿的差异对实验数据进行合理的处理。

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