实验 观察人血涂片

更新时间:2023-04-27 13:02:01 阅读量: 实用文档 文档下载

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实验观察人血涂片

本实验在中学是为学习血涂片制作,了解红细胞与白细胞的形态特点。但常因怕取血、和推片不匀、染色出现色渣及白细胞观察不清等而不作此实验。为此教师必须解决涂片技术及观察指导等问题。

一、目的要求

(一)了解本实验的准备。

(二)掌握血涂片制作技术及注意事项。

(三)掌握红细胞与白细胞的特征。

二、材料用具

采血针(三棱针或大号缝衣针)、脱脂棉球、酒精棉球、载片、显微镜、滴管、伊红-甲基蓝染液、血细胞彩色挂图或剪贴图。

三、实验步骤

(一)按照生理卫生本实验指导制作涂片观察(染色后再观察)。

(二)讨论本实验关键及如何指导实验。

四、实验准备

(一)配制伊红-甲基蓝染液

实验前半年,取伊红-甲基蓝粉末0.1克(旧称瑞氏染剂),放在研缽内加适量甘油研磨。量取纯甲醇60毫升,少许倒入研缽内使染料溶解,已溶部分移入棕色瓶中,未溶部分再加少许甲醇研磨,直到全部溶解为止。把装染液的棕色瓶密封放阴暗处保存。如来不及配制,可就近向医院化验室索取。

(二)配制缓冲液

用缓冲液作血涂片稀释液效果更好。取磷酸二氢钾(KH2PO4)6.63克,磷酸氢二钠(Na2HPO4)2.56克,溶于蒸馏水或去离子水1,000毫升中其pH值是6.4的缓冲液。

(三)培训小组长

血涂片的关键在推片手法的掌握。必须先使小组长熟练掌握,可取兔血多推两片,并镜检厚薄是否合适。

(四)载片去污

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所用的载片要放肥皂水中煮沸20分钟,洗涤干净后再放入肥皂水中浸泡一天,取出用自来水冲净,再用蒸馏水冲1~2次,放入95%酒精中浸泡后,用镊子取出以干净的绸或涤纶擦净,放入培养皿保存备用。

五、实验指导

参照生理卫生本实验指导,可分消毒、取血、推片、染色,观察等5个步骤进行。

(一)消毒

应先按摩取血部位,使血流通畅后,再用酒精消毒针和取血部位。

(二)取血

待酒精干后,刺破皮肤,待血自然流出,勿挤。取干净载片,让血滴在离载片一端中4~5毫米处,注意手指持握载片的边缘,勿触及其表面。不能使载片接触取血部位的皮肤。必须两人密切配合,抓紧时间,一人取血,另一人迅速推片。

(三)推片

这步最重要,但又不易推均匀。取一块边缘光滑的载片做推片。将其一端置于血滴前方,向后移动到接触血滴,血液便均匀分散在推片与载片的接触处。然后使推片与载片呈30°~40°角,向另一端平稳地推片,如图9-17所示。注意用力要均匀,角度始终不变,才能推成均匀的涂膜。用力太轻,涂膜过厚,无法观察,且不能推第二次。用力太重,又会损伤血细胞。涂片推好后,迅速在空气中摇动载片,使之自然干燥,不要用火加热。

(四)染色

用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线,防止染液外溢。再将伊红-甲基蓝染液滴在血膜上,至染液淹没全部血膜,染半分钟。加等量蒸馏水或缓冲液与染液混合再染5分钟。最后用自来水把染液冲掉,用吸水纸吸干,待自然干燥后,即可。涂片如有色渣,可用三种方法清除:一是再加伊红-甲基蓝染液于涂片上,略加摆动,使色渣溶于甲醇中,待甲醇挥发,加蒸馏水或缓冲液。二是把血片放水槽中,保持水平,色渣即从玻片边缘溢出。三是把血片呈45°倾斜,吸95%酒精徐徐滴涂片面,至流下酒精变蓝后,清水冲净晾干。涂片如有香柏油,用擦

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镜纸擦去仍可用酒精处理。

制血涂片应注意:

(1)所用的玻片必须十分干净,无油污。

(2)取血部位、刺针及载片上的酒精挥发完以后才能取出。

(3)判断染液是否起到了染色的作用,可在冲洗染色液前观察染液有无一层黄色的金属光泽,如果没有,则表示染色失败。

(4)如染色太浅,可按照原来步骤重染。

(5)如染料有很多颗粒沉于载片表面,可将载片滴有染料的一面向下,两端置于玻棒上架空,使染料靠表面张力附着于载片表面。

(五)观察

用低倍镜观察血涂片,可见红细胞染成粉红色,呈中间色浅、周围色深的圆盘状,没有细胞核。白细胞较少,难找到,多集中在涂片边缘或推片方向前缘。比红细胞大,染成蓝紫、红紫色。主要看白细胞中较多的嗜中性粒细胞与淋巴细胞的形态。

1.嗜中性粒细胞细胞质染成红紫色,核染成蓝紫色。核分为2~5叶。刚成熟的细胞仅有一叶呈“S”状的细胞核。

2.淋巴细胞直径大小不一,以小淋巴细胞为主,其大小与红细胞相似。细胞核呈圆形或卵圆形,一侧有凹痕,染色质致密块状,被染成深蓝紫色。核周围可见少数淡蓝色细胞质。

3.血小板为不规则小体,直径约2~3微米。血小板周围部分为浅蓝色,中央有细小的紫红色颗粒,且聚集成群。

教师应经常观察、熟练掌握各种血细胞形状,不能仅凭染色来区分。为更好观察白细胞,可在看了红细胞后,在涂片上加一滴醋酸使红细胞破坏,白细胞就清楚可见。

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本文来源:https://www.bwwdw.com/article/qhpq.html

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