多酚测定方法原理

原理

以没食子酸为主的多酚类化合物在碱性溶液中可将钨钼酸还原成蓝色化合物，该化合物在765nm处有最大吸收，且吸收值与多酚化合物含量成正比，以没食子酸为标准物质，标准曲线法定量。

试剂

（1） 钨酸钠——钼酸钠混合溶液：称取50.0g钨酸钠，12.5g钼酸钠，用350ml水溶解到

1000ml的回流瓶中，加入25ml磷酸及50ml盐酸，充分混匀，小火加热回流两小时，再加入75g硫酸锂、25ml蒸馏水、数滴溴水，然后继续沸腾15min（至溴水完全挥发为止），冷却后，转入500ml容量瓶定容，过滤，至棕色瓶中保存，使用时稀释一倍。

（2） 75g/L碳酸钠溶液：称取37.5g无水碳酸钠溶于250ml温水中，混匀，冷却，稀释至500ml，过滤到储液瓶中备用。

（3） 没食子酸标准储备液：准确称取0.1100g一水合没食子酸，溶解并定容至100ml，此溶液没食子酸质量浓度为1000mg/L,在冰箱中2——3度可保存五天。

（4） 没食子酸标准使用液：分别称取1000mg/L的没食子酸标准储备液0、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml和5.0ml至100ml容量瓶中，定容，溶液质量浓度为0、10.0mg/L、20.0mg/L、30.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L。

分析步骤

（3）标准曲线的绘制：吸取0、10.0mg/L、20.0mg/L、30.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L的没食子酸标准使用液各1.0ml，分别加5.0ml水，1.0ml钨酸钠——钼酸钠混合溶液和3.0ml 碳酸钠溶液，混匀，没食子酸标准溶液浓度分别为0、1.0mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L、5.0mg/L，显色，放置2小时，以标准曲线的“0”管为空白，在765nm波长下测定标准溶液的吸光度，以没食子酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

（4）样品的测定：吸取1.0ml试样提取液，分别加入5.0ml水，1.0ml钨酸钠——钼酸钠混合溶液和3.0ml 碳酸钠溶液，显色，放置2小时，以标准曲线的“0”管为空白，在765nm波长下测定试样溶液的吸光度，根据标准曲线求出试样溶液的多酚浓度，以没食子酸计，如果吸光度值超过5.0mg/L没食子酸的吸光度时，将样品提取液稀释后重新测定。 计算多酚含量的公式 X=(c×10×A)/m

X——试样中多酚含量，mg/kg或mg/L；

C——试样测定液中没食子酸的浓度，mg/L； 10——试样测定液定容体积，ml； A——样品稀释倍数；

m——试样质量或体积，g或ml。

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