Agilent 1290 超高效液相色谱仪标准操作规程

Agilent 1290 超高效液相色谱仪标准操作

规程

Ⅰ 目 的：制定Agilent 1290超高效液相色谱仪使用操作规程，确保操作人

员能正确规范地操作液相色谱仪。

Ⅱ 范 围：适用于Agilent1290超高效液相色谱仪的使用。 Ⅲ 规 程： 1 开机

1.1 打开计算机，进入 Windows画面。 1.2 打开 1290INFINITY HPLC 各模块电源。

1.3 待各模块自检完成后，双击“Instrument 1 Online”图标，化学工作站自

动与12001290INFINITY HPLC 通讯。

1.4 从“View”菜单中选择“方法和运行控制”画面， 点击”视图”菜单中的“样品视图“系统视图”， 使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。 1.5 点击泵下面的瓶图标，选择‘瓶填充‘如下图所示，输入溶剂的实际体积和

瓶体积。 也可输入停泵的体积。点击“Ok”。

1.6 从菜单 “视图”中，选中“在线信号”，选中“信号窗口 1”，然后点击“改

变?” 钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击“确定”。(如同时检测二个信号，则重复选中“信号窗口 2”) 2 排气

2.1 首先在方法编辑中，泵的参数设置部分，选好需要排空的通道（保证是开的） 2.2 点击仪器状态视图中泵的图标，选择控制，出现如下图

2.3 勾上吹扫，并且输入流速，时间，比例就可以 purge 泵头。排空的时候阀

会自动切换，无需人为介入。

2.4 当我们发现泵头里面有气泡出不来的时候，选择预备---开。然后点击确定。

此时泵会用很强烈的方式朝外泵液体，并持续 20 次自动停止。 3 编辑数据采集方法 3.1 开始编辑完整方法：

从“方法”菜单中选择“编辑完整方法?” 项，如下图所示选中除“数据分析 ”外的三项，点击“确定” ，进入下一画面。 3.2 方法信息：

在“方法注释”中加入方法的信息（如：This is for test!） 。 点击 “确定” ， 进入下一画面。 3.3 进样方式选择

根据自动进样器的类型，选择合适的进样方式。 3.4 泵参数设定：

在“流速”处输入流量，如 1.5ml/min，停止时间：10 min。在“溶剂B”处输入 70.0，(A=100-B) ，也可“插入 ”一行“时间表” ，编辑梯度。在“压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。 3.5 自动进样器参数设定:

选择合适的进样方式， 如图所示，进样体积 1.0ul ，标准进样”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。 “洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在针座旁边中洗针。 3.6 柱温箱参数设定:

在“温度”下面的空白方框内输入所需温度，如：40度。并选中它，点击“更多信息>>” 键，如图所示，选中“与左侧相同”，使柱温箱的温度左右一致。

3.7 DAD检测器参数设定:

检测波长: 254nm，带宽=4nm， 参比波长=360nm，带宽=100nm;

检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽： 一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域 。 参比带宽： 至少要与样品信号的带宽相等， 许多情况下用100nm作为缺省值。峰宽（响应时间） ：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。狭缝-狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。 可以开启光学单元温度控制;可以设定8通道信号等。

3.8 FLD 检测器参数设定:

色谱条件：

响应时间=4s. 停止时间： 4min。

激发波长:200-700nm，步长为 1nm，或零级。 发射波长: 280-900nm， 步长为 1nm，或零级。

PMT:多数应用适当的设定值为 10，若高浓度样品峰被切平头，则减少 PMT 值。

“峰宽”：大多数应用设为 4s，只有快速分析采用小的设定值。 多波长及光谱（激发） 。 多波长及光谱（发射） 。 同时可以输入范围、步长、采集光谱。 点击“确定”进入下一画面。 3.9 运行时选项表

在“ 运行时选项表 ”中，选中“ 数据采集” ，点击“确定” 。 3.10 保存方法

从“方法”菜单，选中“方法另存为?” ，输入一方法名，如“测试” ，点击“确定。 4 单次样品运行

从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，如下图所示，输入操作者名称，如“安装工程师” ；在“数据文件 ”中选择“手动”或“前缀/计数器” 。 点击“确定”，从“系统视图 菜单启动系统。

等仪器准备好，基线平稳，从“运行控制”菜单中选择“运行方法” ，进样。(若无自动样器，则基线平稳后，进样并搬动手动进样阀，启动运行。) 5 面积百分比数据处理 5.1 选择界面

从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。 5.2 调用信号

从“文件”菜单选择“调用信号” ，选中您的数据文件名，如下图所示。点击“ 确定” ，则数据被调出。 5.3 做谱图优化：

从“图形”菜单中选择“信号选项” ，如下图所示。从“范围” 中选择“满

量程” 或“自动量程” 及合适的时间范围或选择“自定义量程” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“ 确定” 。 5.4 积分优化:

从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，如下图所示。选择合适的“斜率灵敏度” ， “峰宽” ， “最小峰面积” ， “最小峰高” 。 从“积分”菜单中选择“积分”选项， 则数据被积分。 如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。 点击左边“√”图标，将积分参数存入方法。 5.5 打印报告:

从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，进入如下图所示画面。 点击“定量结果”框中“计算”右侧的黑三角，选中“面积百分比” ，其它选项不变。 点击“ 确定” 。

从“报告”菜单中选择“打印报告” ，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告” 底部的“打印”钮。 6 关机

关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。

退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机（用 shut down 关） 。 关闭 Agilent 1290 各模块电源开关。 7 定量数据处理

7.1 点击“方法”菜单，选择“调用方法L..”，在方法目录中选择要进行定量

设定的方法，该方法是经过积分和谱图优化过的方法。点击“确定”，则选择的方法被调出。

7.2 从“文件”菜单中选择“调用信号?”选项， 选中标样的数据文件名， 点

击 “确定”，则数据被调出。检查确认积分和谱图优化的参数是否合适。 7.3 从“校正”菜单中选择，“新建校正表”按钮，进入以下画面， 确认选项在

“自动设定”；级别为“1”，点击“确定”。若要信号单独计算，则选择前面的空白框。

7.4 在覆盖现有校准表中对话框中，选择“是（Y）”。若方法中没有旧的校准表，

无此项。

7.5 则所有积过分的峰，其保留时间、峰面积按序显示在校准表中。如图所示，依次输入化合物的名称、含量，校准曲线显示在右下方。可以设定参考峰等。若用内标方法定量，还须选择内标，点击“内标“下的区域，选择那个峰作为内标峰，指定每个色谱峰以那个内标为参比。点击“确定”。

7.6 在删除含量为零的行对话框中选择“是（Y）”。则校准表中未输入含量的峰

从表中删除。

7.7 点击“校准”菜单，选择“校准设置”按钮，进入以下画面，输入单位：如“%”；其它项不变。点击“确定”。 7.8 打印报告:

从“报告”菜单中选择“ 指定报告?”选项。点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变。点击“确定”。----若是用内标法定量，则选“内标法”。

从“报告”菜单中选择“打印报告“，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告“ 底部的“打印”钮。---可以选择打印到文件中，如PDF格式。

7.9 若有多个浓度标样，则依次调出校准数据，调出每一个校准数据后，点击“校

准”菜单，选择“添加级别“，第2级数入”2“，类推。 在校准表中输入每级的组份浓度。

7.10 在方法菜单中，选择“运行时选项表”，确认“数据分析选项”也被选中，

点击“确定”。点击“保存”按钮，存储修改的方法。此方法包含校准表，建立完毕。

Ⅳ 参考依据： Agilent1290超高效液相色谱仪使用操作说明书。 Ⅴ 附 件： 无。

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