实验一 细胞多糖的PAS反应

实验一 细胞多糖的PAS反应

目的：掌握细胞中多糖（如淀粉、细胞壁纤维素等）原位显示的PAS反应原理，熟悉PAS的技术。 一、PAS反应原理

过碘酸（HI04·2H20）作为一种强的氧化剂，能够打开C—C键,将-CHOH-CHOH-、-CHOH-CHO、-CHOH-COOH、-CHOH-CH2NH2等的羟基氧化为醛基。但它不继续氧化新形成的醛基。所以，有充分的醛基与Schiff试剂中的无色碱性品红化合而形成紫红色物质，使细胞中的多糖（如淀粉、细胞壁纤维素等）原位显示出来。 二、器材、试剂及材料 1、器材

显微镜，载/盖玻片、镊子、刀片、吸水纸。 2、试剂

（1）过碘酸酒精溶液

过碘酸（HI04·2H20） 0.4g 95%乙醇 35ml 0.2M醋酸钠（27.2g+1000mlH2O） 5ml 蒸馏水 10ml （2） Schiff试剂

先将100ml蒸馏水煮沸，然后加人0.5g碱性品红，充分搅拌，必要时可再煮5分钟，使之充分溶解。待溶液冷却至50℃时，过滤，向溶液中加10ml 1NHCl。冷却至25℃时。加0.5g偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）盖严，置于暗处，经几天后红色稍裉，溶液呈白或淡黄色。如果仍有红色，可加活性炭0.25g摇l分钟，过滤，装入棕色瓶并外包黑纸，放入冰箱中备用。

（3）亚硫酸（临用时配制）

普通自来水200ml,10%偏重亚硫酸钠10ml,1NHCl 10ml。

(4) 1NHCl

取82.5ml比重为1.19的浓盐酸加蒸馏水至1000ml.

(5)70%乙醇 3、材料

洋葱鳞茎表皮及鳞片肉细胞，橡胶种子胚乳. 三、实验方法

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1、取洋葱鳞茎表皮细胞（或徒手切取鳞片肉细胞、橡胶种子的胚乳的切片）,浸于过碘酸酒精溶液中10分钟左右（对照为70%酒精）。

2、用70%酒精洗1-2分钟。 3、入Schiff试剂中染15分钟。 4、亚硫酸水洗三次。

5、蒸馏水洗1-3次,装片镜检。

结果:多糖部分(如细胞壁、淀粉粒等)呈紫色。

四 、作业

1、比较经过碘酸酒精溶液处理与对照间的细胞多糖部分的显色情况，说出细胞中多糖（如淀粉、细胞壁纤维素等）原位显示的PAS反应原理。并图示葱鳞茎表皮细胞的细胞壁。

2、比较洋葱鳞茎不同部位的多糖含量。 五、注意事项

1、各位同学实验完后应将用过的载玻片和盖玻片放回讲台； 2、废液不能倒入培养皿，应倒入指定的烧杯中； 3、应将青霉素瓶洗干净后放回原处； 4、应节约使用药品。

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