核糖核酸酶活力的测定

成绩： 日期：2015年 11月1 日 南京林业大学实验报告

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实验二、核糖核酸酶活力的测定

一．实验目的：

核糖核酸酶包括脱氧核糖核酸酶(DNase)和核糖核酸酶（ RNase)是水解DNA和

RNA磷酸二酯键的核酸内切酶，与植物的生长、分化、衰老、种子成熟和萌发等生理生化过程密切相关。

通过测定这两个酶的活性，可间接获得植物体内核酸含量极代谢情况。推测其所处的生长发育状态和阶段。

二、原理

以植物叶片试验材料，提取粗酶液，进行酶促反应，以反应混合物中0.1ml 酶液在30min内催化形成具有OD值为1的硝酸镧可溶性RNA 碎片的酶量为1个酶活性单位。

三、材料、试剂与仪器设备：

植物材料：绣球

实验试剂：0.01M的HAc（醋酸缓冲液pH4.8）；0.05ml30mM巯基乙醇；1ml酵母RNA；1.5ml冷的硝酸镧-HCl溶液。

实验器具：分光光度计；离心机；研钵；离心管；移液管；试管等；恒温水浴箱。

四、实验步骤

1.酶液的提取

称取0.4g绣球叶片剪碎用3ml0.01M的HAc（醋酸缓冲液pH4.8）分三次加入（1，1，1），研磨提取，在5000rpm下离心10min,取上清液。 2.核酸酶活力测定

取0.1ml 酶液放入离心管中+0.05ml30mM巯基乙醇+1ml酵母RNA+0.35ml HAc（pH4.8）混合均匀，在37水浴保温30min. 3.加硝酸镧-HCl

到时间后，将离心管放入冰浴中放置3~4min ,加入1.5ml冷的硝酸镧-HCl溶液→强烈震荡混合液→至于冷冻离心机中离心 15min (5000rpm/min),测定上清液的体积。 4. 光密度测定

取上清液0.3ml+2.7ml蒸馏水定容至3ml。在260nm下（紫外分光光度计）测定OD值。

活力单位=所测OD260nm×10

五、结果计算

OD=0.115-0.008=0.107 活力单位=0.107*10=1.07

六、注意事项

1.研磨叶片要充分，在离心前要选择合适的离心管一起离心。 2.加入其他溶剂时要注意精确，不然会导致实验有失误。

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