药物分析实验讲义

实验一 葡萄糖的一般杂质检查

一、目的要求

1、熟悉药物中一般杂质限量检查的方法及限量计算方法。 2、熟悉药物中一般杂质检查的目的和意义。 3、掌握氯化物、硫酸盐、铁盐的检查原理。

二、实验原理

(一)葡萄糖的生产工艺

葡萄糖是用淀粉以无机酸水解或在酶催化下经过水解得稀葡萄糖液，再经脱 色、浓缩结晶制得。国内生产方法如下：

1、酸水解法 以无机酸将淀粉水解为葡萄糖。

2、双酶水解法 以生物酶为催化剂将淀粉水解为葡萄糖。

3、酸酶水解法 以盐酸为液化剂，糖化酶为催化剂，将淀粉水解为葡萄糖。

根据葡萄糖生产工艺特点，应进行氯化物、硫酸盐、铁盐等一般杂质检查， 进行蛋白质、可溶性淀粉等特殊杂质检查。 (二)各种杂质检查原理 l、氯化物检查法

氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量

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的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下处理生成的氯化银浑浊相比较，测定供 试品中氯化物的限量。

2、硫酸盐检查法

药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡微粒而显白色浑 浊液，同一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在同样条件下，用同法处理生成的浑浊 比较，判断药物中含硫酸盐的限量。

3、铁盐检查法

三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性硫氰酸铁络离子，与 一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。

进行葡萄糖的铁盐检查时，需在显色前加硝酸3滴，煮沸5min，使Fe2+氧化为Fe3+。由于硝酸中可能含有亚硝酸，亚硝酸也能与硫氰酸根离子反应生成红色的亚硝酰硫氰化物，影响比色，因此加入显色剂之前加热煮沸有助于除去氧化氮，以消除氧化氮生产的亚硝酸干扰。

三、试剂与器材

1、材料 葡萄糖(药用)。 2、试剂

(1)酚酞指示液：取酚酞l g，加乙醇100ml使溶解，即得。

(2)氢氧化钠滴定液(0.02mol／L)：取氢氧化钠4.000g，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。

取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀，精 密量取溶液2 m1，置10ml容量瓶中加水稀释至刻度，即得。

(3)标准氯化钠溶液：称取氯化钠0.165g，置1000ml容量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

(4)稀硝酸：取硝酸105ml加水稀释至1000ml，即得。

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(5)硝酸银试液(0.1 mol／L)：取硝酸银17.5g，加水适量使溶解成1000ml， 摇匀，置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭保存。

(6)标准硫酸钾溶液：称取硫酸钾0.181 g，置1000ml容量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于100μg的SO4)。

(7)稀盐酸：取盐酸234 ml，加水稀释至1000ml，即得。

(8)25％氯化钡溶液：取氯化钡6.10g，加水适量使溶解成10 ml，即得。 (9)标准铁溶液：称取硫酸铁铵[FeNH4(SO4)2212H2O] 0.863g，置1000 ml容量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5 ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 (10)碘试液(0.05 mol／L)：取碘13.0g，加碘化钾36g与水50 ml溶解后， 加盐酸3滴与水适量使成1000 ml，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过，置玻璃塞的棕 色玻瓶中，密闭，在凉处保存。

(11)磺基水杨酸溶液：取磺基水杨酸lg，加水适量使溶解成5ml，即得。 (12)硫氰酸铵溶液：取硫氰酸铵30g，加水适量使溶解成100 ml，即得。 (13)其它：乙醇、石蕊试纸。 3、器材

量筒(100ml 1个、500 ml 2个、1000ml 1个)；

刻度吸管(1ml 1支、5ml 1支、10ml 1支、20ml 1支)； 容量瓶(10ml 1个、100ml 2个、1000 ml 2个)： 移液管(2ml 1支)；

聚乙烯塑料瓶(500ml 2个)； 玻璃塞的棕色玻瓶(1000ml 2个)； 无色广口瓶(1000ml 2个)； 纳氏比色管(50ml 6支)； 烧杯(50ml 6只、100ml 4只)； 试管(50ml 4支)；

垂熔玻璃滤器1个，加热回流装置，电子天平，水浴锅，电炉。

四、实验步骤

l、酸度

取本品2.0g，加水20 ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液(0.02

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mol／L)0.20ml，应显粉红色。 2、乙醇溶液的澄清度

取本品1.0g，加90％乙醇30ml，置水浴上加热回流约10min，溶液应澄清。

3、氯化物

(1)标准氯化钠溶液的制备

精密量氯化钠贮备液10ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀， 即得(每lml相当于10μg的Cl)。 (2)供试溶液的配制

取本品0.60g，加水溶解使成25 ml (溶液如显碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试 纸显中性反应)，再加稀硝酸10ml，溶液如不澄清，应用事先已洗淨Cl-的滤纸 滤过；置50 ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。 (3)对照溶液的配制

取标准氯化钠溶液6.0ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，用水稀 释使成约40 ml，摇匀，即得对照溶液。 (4)检查

于供试溶液与对照溶液中分别加硝酸银试液(0.1 mol／L)1.0ml，用水稀释使 成50 ml，摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察， 比较所产生的浑浊，样品管不得比对照管更浓(0.01％)。 4、硫酸盐

(1)标准硫酸钾溶液的制备

称取硫酸钾0.181g，置1000ml容量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度， 摇匀，即得(每lml相当于100μg的SO4)。 (2)供试溶液的配制

取本品2.0g，加水溶解使成约40ml(如溶液显碱性，可滴加盐酸使遇石蕊试 纸显中性反应)；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2 ml， 摇匀，即得供试溶液。 (3)对照溶液的配制

取标准硫酸钾溶液2.0ml，置50 ml纳氏比色管中，加水使成约40 ml，加稀 盐酸2 ml，摇匀，即得对照溶液。 (4)检查

于供试溶液与对照溶液中分别加入25％氯化钡溶液5m1，加水稀释至50ml，

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充分摇匀，放置10min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较所产生 的浑浊，样品管不得比对照管更浓不得更浓(0.01％)。

5、铁盐

(1)标准铁溶液的制备

精密量取硫酸铁铵贮备液10ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇 匀，即得(每1ml相当于10μg的Fe)。 (2) 检查

取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5 min，放冷，加 水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液(30→100)3ml，摇匀，如显色，与标准铁溶 液2.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深(0.001％)。 6、亚硫酸盐与可溶性淀粉

取本品1.0g，加水10ml溶解后，加碘试液(0.05mol／L)l滴，应即显黄色。 7、蛋白质

取本品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液(1→5)3ml，不得发生沉淀。

五、数据记录及处理

样品名称 来源 批号 数据记录

检查项目 现象及数据 结果 酸度

乙醇溶液的澄清度 氯化物

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硫酸盐 铁盐

亚硫酸盐与可溶性淀粉 蛋白质

结论：

六、杂质限量计算

葡萄糖中的杂质氯化物、硫酸盐、铁盐的检查方法采用对照法，其计算公式为：

因一定量的供试品(S)中所含杂质的量是通过一定量标准溶液进行比较，杂 质最大允许量=标准溶液体积(V)3标准溶液浓度(C)，所以杂质限量(L)可表示 为：

l、氯化物的检查

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2、硫酸盐的检查

3、铁盐的检查

七、注意事项

1、纳氏比色管的选择与洗涤

比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，因此在选用比色管时，必须 注意使样品与标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上的刻 度均匀，如有差别，不得大于2mm。纳氏比色管用后应立即冲洗，比色管洗涤时避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁划出条痕影响比色或比浊。 2、平行操作原则

进行比色、比浊检查时，样品溶液与对照溶液的实验条件应尽可能一致，严 格按照操作步骤平行操作，按规定顺序加入试剂。比色、比浊前可利用手腕转动 360°的旋摇使比色管内试剂充分混匀。比色方法一般是将两管同置于白色背景 上，从侧面观察；比浊方法是将两管同置于黑色或白色背景上，自上而下地观察。 3、实验中应准确选用量具，杂质检查中允许的误差为±10％，量筒的绝对 误差为1ml，刻度吸管的绝对误差为0.01～0.1 ml，在实验中，应根据样品、标 准液的取用量正确选用量器。例如，取标准液2ml应选择刻度吸管或移液管吸取 标准液。取样品2g，允许的误差为0.2g，可选用称量精度为0.1g的普通天平。 4、进行铁盐检查时，采用硝酸将Fe2+氧化为Fe3+，标准液应与样品液同法 操作。样品液加硝酸煮沸时，应注意防止暴沸，必要时补充适量水。

八、思考题

l、比色、比浊操作中应注意什么原则?

2、进行葡萄糖的铁盐检查时，在加入显色剂之前应如何操作?为什么?

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实验二 固体药物制剂的常规检查

一、目的要求

l、熟悉固体药物制剂中片剂和胶囊剂的常规检查项目。 2、掌握片剂的常规检查操作方法。 3、掌握胶囊剂的常规检查操作方法。 4、掌握干燥失重测定的操作技能。

二、实验原理

(一)片剂的常规检查 l、重量差异检查

片剂的重量差异指按规定称量方法测定每片的重量与平均片重之间的差异 程度。

《中国药典》(2010年版)规定片剂重量差异不得超过下表限度的规定。

片剂的重量差异限度要求 平均片重或标示片重 重量差异限度 0.30g以下 0.30g及0.30g以上 2、崩解时限检查

或破碎的囊壳外，应通过筛网。

测定时使固体制剂在液体介质中，随着崩解仪器吊篮的上下移动，发生崩解 成碎粒、溶化或软化的现象，以供试品通过筛网或软化的时间来控制。

(二) 胶囊剂的常规检查 l、装量差异检查

胶囊剂的装量差异指按规定称量方法测定每粒胶囊的内容物的装量与平均装量之间的差异程度。

《中国药典》(2010年版)规定胶囊剂装量差异不得超过下表限度的规定。

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±7.5％ ±5％ 崩解指固体制剂在检查时限内全部崩解溶散或成碎粒，除不溶性包衣材料

胶囊剂的装量差异限度要求 平均装量 0.30g以下 0.30g及0.30g以上 2、崩解时限检查

同片剂

(三)干燥失重测定法

重量差异限度 ±10％ ±7.5％ 干燥失重是指药物在规定条件下，经干燥后所减失的重量，根据所减失的重量和取样量计算供试品干燥失重的百分率。干燥失重检查法主要控制药物中的水分，也包括其他挥发性物质如乙醇等。

三、试剂与器材

l、材料

维生素B1片(规格 10mg)，对乙酰氨基酚片(规格 0.5g) ，诺氟沙星胶囊(规格 0.1g)。

2、器材

烧杯(1000ml 2只)

电子天平，崩解时限测定仪，电热恒温干燥箱，温度计(2根)，研钵，扁形称量瓶(8只)，培养皿(4个)，干燥器(1只)。

四、实验步骤

(一)性状

观察维生素B1片的性状,本品为白色片。 观察对乙酰氨基酚片的性状,本品为白色片。

观察诺氟沙星胶囊的性状,本品内容物为白色至淡黄色颗粒和粉末。 (二)片剂的常规检查 l、重量差异检查

分别取维生素B1片20片、对乙酰氨基酚片20片，精密称定总重量，求得

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平均片重后，再分别精密称定每片的重量，每片重量与平均片重相比较，按表中的规定，超出重量差异限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度l倍。

2、崩解时限检查

将吊篮通过上端的不锈钢轴悬挂于金属支架上，浸入1000ml烧杯中，烧杯内盛有温度为(37±1)℃的水，调节吊篮位置使其下降时筛网距烧杯底部25mm，调节水位高度使吊篮上升时筛网在水面下15 mm处，并使升降的金属支架上下移动距离为55 mm±2 mm，往返频率为每分钟30-32次。

取维生素B1片6片、对乙酰氨基酚片6片，分别置上述吊篮的玻璃管中，启动崩解仪进行检查，各片均应在15min内全部崩解。如有l片不能完全崩解，应另取6片复试，均应符合规定。

(三)胶囊剂的常规检查 l、装量差异检查

取诺氟沙星胶囊20粒，分别精密称定重量后，倾出内容物（不得损失囊壳），再分别精密称定囊壳重量，求得每粒内容物的装量与平均装量。每粒的装量与平均装量相比较，按表中的规定，超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度l倍。

2、崩解时限检查

取诺氟沙星胶囊6粒，按片剂的装置与方法（如胶囊漂浮于液面，可加档板）检查。硬胶囊应在30min内全部崩解。如有l粒不能完全崩解，应另取6粒复试，均应符合规定。

(四)干燥失重

取已检查过重量差异的对乙酰氨基酚片8片，研细后取粉末约1.0g，置105℃干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定。并将供试品平铺于瓶底，将称量瓶放入洁净的培养皿中，瓶盖取下，置称量瓶旁，放入恒温干燥箱内，调节温度至105℃(2℃)，干燥2-4小时。取出后迅速盖好瓶盖，置干燥器内放冷至室温，迅速精密称重。计算减失重量。

五、数据记录及处理

样品名称： 来源： 批号： 维生素B1片

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对乙酰氨基酚片 诺氟沙星胶囊

现象 结论

(一)性状

维生素B1片 对乙酰氨基酚片 诺氟沙星胶囊 (二)片剂的常规检查

1、维生素B1片的重量差异检查 20片维生素B1片的总重

平均片重 0.3g 重量差异上限 重量差异下限

维生素B1片的每片重量 判断 结论

2、对乙酰氨基酚片的重量差异检查 20片对乙酰氨基酚片的总重 平均片重 0.3g 重量差异上限 重量差异下限

对乙酰氨基酚片的每片重量 判断 结论

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(三)胶囊剂的常规检查 诺氟沙星胶囊的装量差异检查 20粒诺氟沙星胶囊的总重 平均粒重 0.3g 装量差异上限 装量差异下限

诺氟沙星胶囊的每粒重量 判断 结论

(四) 干燥失重 干燥前称量瓶+粉末重 需干燥的药粉重 干燥开始时间 干燥结束时间 干燥后称量瓶+粉末重 干燥后药粉重 干燥失重计算公式

六、注意事项

l、片剂的重量差异限度和胶囊剂装量差异限度的判断，首先应确定片剂（或胶囊剂）的平均片重（或平均装量）是0.3g以上还是以下，再根据要求计算出片重（或装量）的允许上限和下限，把精密称定的20片(或20粒)的重量与这个上、下限比较，作出判断。

2、干燥失重试验时，供试品颗粒较大或结块，应研细后干燥；称量时应尽量缩短称量时间，防止供试品吸收空气中的水分，特别是空气中湿度较大时，更

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须注意。

七、思考题

1、平均重量在0.3g以上和0.3g以下的胶囊剂，装量差异限度分别为多少? 2、《中国药典》(2010年版)规定，凡检查含量均匀度的制剂，不再作哪一项检查?凡规定检查溶出度、释放度或融变时限的制剂，不再作哪一项检查?

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实验三 葡萄糖注射液的质量检查

一、目的要求

l、掌握葡萄糖注射液的鉴别原理及方法。 2、葡萄糖注射液中特殊杂质检查原理及方法。

3、熟练使用旋光仪，掌握旋光法测定葡萄糖含量的操作并能进行有关计算。

二、实验原理

(一)鉴别

葡萄糖分子中含有羰基，具还原性，能还原碱性酒石酸铜试液(斐林试液) 生成氧化亚铜红色沉淀。

CCHHOOHHOH+2OHCOONaCHOCHOCOOKCuHHOCOOHCCCCOHHOHOHCOONa

CHO CH CHOH-HH+2CHO+Cu2(OH)2↓COOK（黄色）CHO CHOH2葡萄糖

CH2OHFehling试剂葡萄糖酸Cu2(OH)2△Cu2O↓+H2O（红色）(二)葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的检查

采用紫外分光光度法检查5-羟甲基糠醛的含量。利用5-羟甲基糠醛在284nm波长处有最大吸收。本品每100ml中含1.0g葡萄糖的水溶液在284nm波长处的 吸收度不得大于0.32。

(三)含量测定

葡萄糖采用旋光法测定其含量。根据测得供试品的旋光度与2.0852相乘，

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计算出葡萄糖在供试品中的百分比浓度和标示量的百分比。

三、试剂与器材

1、材料

葡萄糖注射液(规格20m1:10g)。 2、试剂

(1)碱性酒石酸铜试液：

①取硫酸铜结晶6.93g，加水使溶解成100m1。

②取酒石酸钾钠结晶34.6g与氢氧化钠10g，加水使溶解成100m1。 用时将两液等量混合，即得。

(2)氨试液：取浓氨溶液400ml，加水使成1000m1，即得。 3、器材

刻度吸管(2ml 2支)；

容量瓶(100ml 2个，或100ml 1个、50ml 1个)； 移液管(20ml 1支，或10 ml 1支)； 试管(25ml 2支)； 试剂瓶(250ml 4个)；

水浴，紫外一可见分光光度仪，旋光仪。

四、实验步骤

(一)性状

观察葡萄糖注射液的性状，本品为无色或几乎无色的澄明液体；味甜。 (二)鉴别

取本品，缓缓滴入微温的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。

(三)5-羟甲基糠醛的检查 l、测定液的配制： ① lOOml容量瓶：

精密量取本品适量(约相当于葡萄糖1.0g，即精密量取本品2ml)置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

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