2022年大连海洋大学903分子生物学Ⅱ(同等学力加试)复试实战预测

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2018年大连海洋大学903分子生物学Ⅱ（同等学力加试）复试实战预测五套卷（一） (2)

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第 2 页，共 26 页 2018年大连海洋大学903分子生物学Ⅱ（同等学力加试）复试实战预测五套卷（一） 特别说明：

1-本资料为2018复试学员内部使用，终极模拟预测押题，实战检测复试复习效果。

2-资料仅供复试复习参考，与目标学校及研究生院官方无关，如有侵权、请联系我们立即处理。 ————————————————————————————————————————

一、名词解释

1． 核酸分子杂交（hybridization ）

【答案】核酸分子杂交是指应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA （或RNA ）片段，按碱基互 补关系形成杂交双链分子的一项实验技术，杂交双链可以在DNA 与DNA 链之间，也可在RNA 与DNA 链之间 形成。

2． 分子伴侣（molecular chaperone ）

【答案】分子伴侣是指一类序列上没有相关性但有共同功能的保守性蛋白质，它们在细胞内能帮助其他多肽进行正确的折叠、组装、运转和降解，如热休克蛋白。

3． 顺式作用元件

【答案】顺式作用元件是指与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别并结合的特异DNA 序列，包括启动子、上游启动子元件、增强子、沉默子等。

4． 蛋白质组（proteome ）

【答案】蛋白质组是指一种生物或一个细胞、组织所表达的全套蛋ft 质（protein ）,即包括一种细胞乃至一种生 物所表达的全部蛋白质。

5． Gene Family

【答案】基因家族。基因家族是指一组功能相似且核苷酸序列具有同源性的基因，可能由某一共同祖先基因（ancestral gene ）经重复和突变产生。基因家族的成员可以串联排列在一起，形成基因族（gene cluster ）或串联重复基因（tandemly repeated genes ），如rRNA 、tRNA 和组蛋白的基因；有些基因家族的成员也可位于不 同的染色体上，如珠蛋白基因；有些成员不产生功能产物，这种基因称为假基因（Pseudogene ）。

二、简答题

6． 简述原核生物与真核生物mRNA 的主要差别。

【答案】（1）真核生物5’一端有帽子结构，大部分成熟的mRNA 还同时具有3’一多聚A 尾巴，原核一般没有;

（2）原核的mRNA 可以编码几个多肤，真核只能编码一个，原核生物以多顺反子的形式存在，真核以单顺反子形式存在;

（3）原核生物以AUG 作为起始密码，有时以GUG ，UUG 作为起始密码，真核几乎永远以AUG 作为起始密码;

（4）原核生物mRNA 半衰期短，真核生物的mRNA 半衰期长。

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第 3 页，共 26 页 7． 简述全基因组鸟枪测序（whole genome shotgun sequencing ）的基本步骤。

【答案】全基因组鸟枪测序法是在获得一定的遗传及物理图谱信息的基础上，将基因组DNA 分解成2kb 左右的数百万个DNA 小片段进行随机测序，辅以一定数量的10kb 的克隆和BAC 克隆的末端测序，利用超级计算机进行整合及序列组装。该方法是一种广泛使用的DNA 测序的方法，比传统的测序法快速，但精确度较差。其具体步骤为：

（4）建立高度随机、插入片段大小为2kb 左右的基因组文库。克隆数要达到一定数量，即经末端测序的克 隆片段的碱基总数应达到基因组5倍以上；

（5）高效、大规模的末端测序。对文库中每一个克隆，进行两端测序；

（6）序列集合。利用新的计算机软件，完善序列集合规则，最大限度地排除错误的连锁匹配；

（7）填补缺口。有两种待填补的缺口，一是没有相应模板DNA 的物理缺口，二是有模板DNA 但未测序的序列缺口。可以同时建立插入片段为15?20kb 的文库以备缺口填补。 8． 试述RNA 生物合成的一般步骤及真核mRNA 的成熟加工过程。

【答案】（1） RNA 合成步骤：

①模板的识别。RNA 聚合酶结合到启动子序列上，结合部位DNA 双链局部解旋，形成转录泡；

②转录起始。合成RNA 链的最初2~9个核苷酸；

③转录延伸。RNA 聚合酶沿着DNA 分子链向前移动，解链区也随之移动，新生RNA 链不断增长并与模板 链在解链区形成RNΑ-DNA 杂合分子，其后DNA 恢复双螺旋；

④转录终止。RNA 聚合酶在Nus 因子等帮助下识别终止信号，释放聚合酶等转录相关蛋白。

（2）真核mRNA 成熟加工过程：

①新生mRNA 前体分子5端加上甲基化鸟苷酸帽，通常在转录完成前进行；

②RNA 聚合酶转录至终止信号处即有特异核酸内切酶将新合成的RNA 链切下，在3'端加上一段polyA 尾；

③mRNA 的剪接，切除内含子并将外显子拼接；

④mRNA 内部还可发生甲基化，某些特殊情况下可保证mRNA 被重新编辑。

9． 基因、外显子和开放阅读框的区别。

【答案】（1）基因是产生一条多肤链或功能RNA 分子所必需的全部核苷酸序列。

（2）外显子是基因及其转录初级产物上可表达的序列，或转录初级产物上通过拼接作用而保留于成熟的RNA 中的核苷酸序列或基因中与成熟RNA 相对应的DNA 序列。

（3）开放阅读框是基因序列的一部分，包含一段可以编码蛋白的碱基序列，不能被终止子打断，也就是被翻译的区域。

10．简述真核生物RNA 聚合酶II 梭基端结构域的功能。

【答案】（1）转录起始时，CTD 的Ser ,Thr 的轻基非磷酸化，易与DNA 结合;

（2）转录延伸时，CTD 的Ser ,Thr 的轻基磷酸化，松弛与DNA 的结合;

（3）CTD 的磷酸化有利于5'的带帽反应的发生，CTD 的长度以及表达量也会对带帽和加尾

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第 4 页，共 26 页 产生影响;

（4）CTD 的变化不仅影响剪接因子在核内的分布，而且还对mRNA 选择性剪接产生一定的影响。

11．什么是弱化作用？

【答案】弱化作用是一种转录翻译调控机制，核糖体沿着mRNA 分子的移动的速率决定转录是进行还是终止。如在操纵子中存在

（1） 低色氨酸浓度：

少，翻译通过两个相邻trp 密码子的速度慢，当4区被转录完成时，核糖体 才进行到1区（或停留在两个相邻的Trp 密码子处），这时的前导区结构是2-3配

对，不形成3-4配对的终止结 构，所以转录可继续进行，直到将印操纵子中的结构基因全部转录。

（2）高色氨酸浓度：核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在4区被转录之前，核糖体就到达2区， 这样使2-3不能配对，3-4区可以自由配对形成茎-环状终止子结构，转录停止

，

合成终止。

三、论述题

12．说说Gateway 大规模克隆技术原理及基本操作流程。

【答案】（1）基本原理

利用X 噬菌体进行位点特异性DNA 片段重组，实现不需要传统酶切连接过程，将基因快速克隆和载体间平行转移。

（2）基本操作流程

Gateway 大规模克隆技术包括TOPO 反应和LR 反应两步。

①TOPO 反应

将目的基因PCR 产物连入Entry 载体，载体上的CCCTT 被拓扑异构酶所识别，切开后通过与切口处的磷酸 基团形成共价键，将该酶偶联在载体上。加入PCR 产物后，载体上

粘性末端攻击PCR 产物的互补性末端并与接头序列CACC 退火，使PCR 产物以正确方向连入Entry 载体。

②LR 反应

将目的片段从Entry 载体中重组进表达载体。Entry 载体上基因两端具有

和attL2位点，目的载体上含有

和attR2位点，在重组蛋白的作用下发生定向重组，形成新的位点

和attB2,使得目的基因转移到表达载体中。

13．基因克隆中蓝白斑筛选的两个分子生物学原理是什么？ 【答案】蓝白斑筛选是根据载体的遗传特征筛选的一种方法。

现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA 的短区段，其中有

半乳糖苷酶基因（）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息，称为，编码的多肽称为多肽，该多肽没有半乳糖苷酶活性。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS ）,它并不破坏读码框，是外源DNA 的选择性插入位点。适用于蓝白斑筛 选的基因工程菌为p 半乳糖苷酶缺陷型菌株。这类宿主菌的染色体基因组中编码P-半乳糖苷酶的基因突变（M15 突变，缺失氨基酸残基11?41）。宿主和

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第 5 页，共 26 页 质粒编码的半乳糖苷酶片段虽都没有酶活性，但质粒转化后它们同时存在时，可形成具有酶学活性

的蛋白质。这样，lacZ 基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段

的质粒之间实现了互补， 称为α-互补。由α-互补而产生的细菌在诱导剂IPTG 的作用下，

在生色底物半乳糖苷）存在时产生蓝色茵落，因而易于识别。然而，当

外源DNA 插入到质粒的多克隆位点后，破坏了

多肽的形成，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选》

14．比较分析原核和真核细胞在蛋白质合成起始中的异同。

【答案】原核生物与真核生物起始基本步骤基本相同，都包括核糖体的解离，小亚基起始复合物的形成和肽链起始复合物的形成。

不同点：

（1）密码和起始氨酰tRNA 不同：原核生物的起始密码有AUG 、GUG 和UUG ，起始氨酰tRNA 为而真核生物的起始密码为AUG ，起始氨酰tRNA 为Met-tRNAMet 。

（2）原核生物mRNA 上有能与16SrRNA 配对的SD 序列，而真核生物没有这样的序列。 （3）起始识别机制不同：原核生物是由小亚基与mRNA 的SD 序列结合，起始因子帮助mRNA 的起始密码落在小亚基的P 位点；真核生物在起始因子的帮助下，核糖体小亚基沿

端帽子结构扫描到RBS ，与起始密码识别并结合。

（4）起始复合物的形成过程不同：原核生物中mRNA 先与核糖体30S 小亚基结合，然后起始fMet-tNA 与小亚基结合；而在真核生物中，小亚基先与

结合后，再与mRNA 结合。 （5）原核生物起始因子有3个，而真核生物中有十几个。

（6）原核生物起始过程中不需要消耗A TP 解开mRNA 二级结构，而真核生物需要消耗A TP 。

15．真核生物基因组中有哪些类型的DNA 重复序列？简要说明基因组重复序列可能的生物学意义以及基因 组重复序列在分子标记研究中的应用。

【答案】相对于原核生物，真核生物基因组显得比较复杂，除了单拷贝序列外，还包括其他简单重复序列、中度和高度重复序列等等，这些不同的序列在真核生物中起着不同的作用，各自担当不同的角色。

（1）短片段的重复序列，按排列方式不同可分为三种类型：

①正向重复，又叫顺重复，这种重复序列的方向是相同的，如转座子的两端的宿主序列以及端粒结构等；

②反向重复，重复序列的方向相反，呈两侧对称，常存在于插入序列和转座子两端的结构元件中；

③回文序列（palindromic sequence ），是一种旋转对称，回文序列常存在于各种蛋白质结合位点。

（2）长片段的重复序列，可分为轻度重复、中度重复和高度重复三种。

①轻度重复序列，是指在基因组中含2?10拷贝的序列，如酵母tRNA 基因。

假基因（pseudogene ）,是基因家族中因突变而失去功能的基因，不能产生具有生物活性的蛋

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