中国药科大学药物分析缩印

08级药物分析缩印

药物分析：研究化学结构明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制方法，也研究中药制剂和生物制品及其制剂有代表性的质量控制方法.

《中国药典》(Ch.P)九版： 1953,63,77,85,90,95,00,05,10 美国药典USP；美国国家处方集NF；英国药典BP；欧洲药典Ph.Eur；国际药典Ph.Int

药品非临床研究质量管理规定GLP；药品生产质量管理规范GMP；药品经营质量管理规范GSP；药品临床试验质量管理规范GCP 药典：记载药品质量标准的法典；国家监督、管理药品的技术标准；法律约束力

标准品：用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位(或μg)计，以国际标准品进行标定. 对照品：除另有规定外，均按干燥品或无水物质进行计算后使用

1→10：固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml加溶剂使成10ml溶液 按干燥品(或无水物或无溶剂)计算，除另有规定外，应取未经干燥(未去水或未去溶剂)的供试品进行试验，并将计算中的取用量按检查项下测得的干燥失重扣除. 空白试验：不加供试品或以等量溶剂替代供试液情况下按同法测得的结果

恒重：连续两次干燥或炽灼后的重量差异小于0.3mg 药品检验的基本程序:取样(科学、真实、代表)→检验(依据质量标准)→记录(真实、完整、简明、具体)→报告(结论明确)

鉴别试验的内涵：1.根据药物分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物化学方法来判断药物真伪.2.中国药典和世界各国药典所收载的药品项下的鉴别实验方法均为用来证实贮藏在标有标签容器中的药物是否为所标示的药物而不是对未知物进行定性分析.3.方法应为专属，每个品种一般2~3次

熔点：1.固体融化成液体的温度；2.熔融同时分解的温度；3.自初溶至全溶的一段温度. 药物纯度↓→融程↑，熔点↓

比旋度：一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1ml中含旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度.

吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位.

的依据，

.光谱法，生物学法.①化学法：要求.包括显色、沉淀、荧光、气体生成、试剂褪色、熔点测定.②光谱法：紫外光谱(测定λmax或同时测定λmin；规定一定浓度供试液在λmax处的A；规定λ和E；规定λ1/λ2；经化学处理后测定产物的吸收光谱特征)；红外光谱(专属性强，应用广)③色谱：1.薄层色谱TLC：定性参数为RP值；不同类药物不能互相干扰；应确证TLC的专属性. 2.HPLC：要求供试品和对照品色谱峰保留时间一致.④射线粉末衍射法⑤生物学法：微生物或动).

1生产过程引入；2贮藏过程中受外界条件影.毒性分：有毒杂质；信号杂质-无毒，含量多少可以反映药物的纯度.理化性质分：有机杂质；无机杂质；残留溶剂

杂质种类：1一般杂质(自然界中分布广，多种药物生产和贮藏过程中容易引入的杂质)2特殊杂质(特定药物的生产、贮藏过程中引)

ppm为单位.①：通常不需要测定准确含量，只检查杂质是否超过限量；②杂志限量(%)=杂质最大允许量/供试品量*100%=标液浓度*标液体积/供试品量*100%③灵敏度法：在供试品溶液加入一定量试剂，在一定条件下不得有正反应出现；比较法：取一定量供试品依法检查，测定特定待检杂志参数与规定限量比较④在药典检查项下除纯度检查外还有：有效性试验(针对某些药物的药效需进行的特定项目检查)均匀性试验(检查制剂中药物与辅料混合是否均匀)安全试验(指某些药物需进行异常毒性、热原、降压物质和无菌等项目的原则：比浊方法(同置于黑色背景下自上而下观若供试品有色须经处理后方可检查.检查内容：.

1.原理：药物中微量氯化物在硝酸酸性条件下与AgCl胶体威力而显白色浑浊，与一定量标准NaCl溶液在相同条件下反应产生的AgCl浑浊程度比较不得更深.2.加稀酸排除硝酸银盐干扰.方法：样品溶解/标准氯化钠溶液(10μg Cl/ml)，50mL纳氏比色管，+稀HNO310mL +水至40mL +AgNO3试液1.0mL +水至50mL ,暗处放置5min，比较.(氯化物浓度以50mL中含50～80μg的 Cl为宜.)去除颜色干扰：内消色法(倍量法)；外消色法：如KMnO4中氧化物的检查，可先和乙醇适量还原后再依法检查.注意事项：(1)比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察供试品溶液如带颜色，可采用内消法解决. 1.重金属指试验条件下能与硫代乙酰胺或硫.第一法：硫代乙酰胺法:适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物.

CH3CSNH2 + H2O→CH3CONH2 + H2S Pb2+ + H2S (pH3.5)→PbS↓ + 2H+ 原理：硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判定供试品中重金属是否符合限量规定.方法：样品按规定法制成供试液25mL/标准铅溶液(10μg Pb/ml)+醋酸盐缓冲液(pH3.5)2mL，加水至25mL， 25mL纳氏比色管，+硫代乙酰胺试液2mL，摇匀，放置，比较.注意事项：供试品若有色，在加硫代乙酰胺试液前在对照溶液管中滴加少量稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与供试品溶液管的颜色一致，然后再加硫代乙酰胺试液比色.第二法:炽灼后的硫代乙酰胺法：适用于含苯环、杂环及难溶于水、稀酸、乙醇的有机药物；比第一法多了药物前处理步骤.第三法：硫化钠法 适用于溶于碱性水溶液而难.

古蔡氏法：A.原理：金属锌与药物中微量砷盐反应生成挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色砷斑，与一定量标准砷溶液所产生的砷斑比较不得更深.B.应将待反应砷盐还原为二价砷以利反应进行.C.氯化亚锡与碘化钾均作为还原剂促进三价砷生成.注意事项：供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等在酸性溶液中生成HS2或SO2，应先加硝酸使氧化成硫酸盐；供试品为铁盐，消耗还原剂，先加酸性氯化亚锡试液使高铁离子还原为低铁离子；环状结构的有机药物要先进行有机破坏(碱和酸)；含锑药物，锑化氢干扰砷盐的检出(SbH3 + HgBr2→SbH2(HgBr) + HBr)，改用白田道夫(Betterdorff)法.标准砷斑的制备:精密标准砷溶液(1μgAs/mL)2mL，置锥形瓶中，+盐酸5mL与水21mL，+碘化钾试液5mL、酸性氯化亚锡试液5滴，室温放置10min，+锌粒2g，立即安装导气管，将锥形瓶置25～40℃水浴中，反应45min，取出溴化汞试纸，即得.样品砷斑的制备:如标准的制备，按各品种项下规定方法制成供试品溶液.硫化氢能与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，导气管中用醋酸铅棉花吸收硫化氢，又使砷化氢以适宜的速度通过.二乙基二硫代氨甲酸银法(Ag-DDC法)：原理：金属锌与酸作用产生新生态氢，与药物中微量砷盐反应生成挥发性的砷化氢，还原二乙基二硫代氨甲酸银产生红色胶态银，同时在相同条件下使一定量标准砷溶液显色，用目视闭塞法或在510nm处侧吸光度进行比较.As浓度2小时内稳定. 0.3mg下即恒重，干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1小时后进行.1、常压恒温干燥法：适用于对热稳定的药物，如：乌苯美司，卡巴胆碱，尼莫地平.需在105℃下干燥至恒重.2.(恒温)减压干燥法：适用于熔点低或受热易分解的供试品，(恒温)减压干燥器.3.干燥剂干燥法：适用于受热分解或生化的药物，常用硅胶、硫酸和五氧化二磷等.4.热分析法(较准确)：在程序控制温度下测量物质的物理化学性质与温度关系的一类技术.5.差热分析(DTA)：在程序控制温度下测量试样与参比物之间温度差ΛT与温度关系的一种技术.6.差示扫描量热法(DSC)：在程序控制温度下测量传输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间)关系的一种技术.7.热重分析法(TGA)：应用热天平在程序控制温度的条件下测量物质的质量随温度变化，纪录变从而准确测量变化和变化速度.

分类：1有机溶媒毒性大，且具有致癌作用并对2有机溶媒对人有一定毒性，应限量使用；3有机溶媒对人健康危险性小，推荐使用；4对人或环境无足够数据证明有危害，应根据生产工艺特点制定相应限度，使其满足各种相应质量要求.；2、常用火焰离子化检测器FID，含卤素的采用ECD检测器.3.中国药典测定方法：1.系统适用性试验：填充柱法n>1000，毛细管柱>5000；R>1.5；内标法连续进样5次，A待测/A内的RSD≤5%；外标法连续进样5次，A待测的RSD≤10%；法一、毛细管柱顶空进样等温法(品种少，极性差异小的溶剂)；法二：毛细管柱顶空进样程序升温法(溶剂品种多，极性差异大)；法三：溶).

物.①直接测定法：凡金属离子不直接与碳原子相连的含金属的有机药物或C-M键结合不牢的有机金属药物，在水溶液中客店里，因而不许有机破坏可直接测定.配位滴定法和氧化还原滴定法②经水①湿法：适用于含氮有机物分析的前处理.主要方法：凯氏定氮法(样品分解→铵盐分解→氨的固定→反滴定)；硫酸-硝酸法；硫酸高氯酸法；硝酸-高锰酸钾法②干法：适用于不易湿法破坏完全的有机物及不能用硫酸破坏的有(500~1000℃.分解效果好于湿法)；氧瓶燃烧法. .容量分析直至反应完全，然后根据滴定液浓度和被消耗的体积按化学计量关系计算出被测药物的含量.所用仪器简单，操作简便快速，方法耐用性高，测定结果准确(相对误差<0.2%)，但专属性差，只适用与含量较高试样的分析.滴定度：1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量.实际消耗体积*滴定度/称取量*100%=含量(%)光谱分析法(UV为例)：Lambert-Bill定律：A=Ecl；本法灵敏度高，准确度高，操作简单应用广泛.对照品比较法和吸收系数法HPLC：系统适用性试验：①色谱柱理论塔板数反映分离效率②分离度R应>1.5③重复性：连续5次进样，RSD≤2.0%④拖尾因子T在 注：与药物分析方法验证的不同点)特异内源性物质和相应的代谢物及同时服用的其他药物不得干扰样品的测定.标准曲线和线性范围：必须至少6个浓度建立标准曲线，不许外延.建立标准曲线时应随行空白生物样品，但标准曲线不包括零点.精密度与准确度：RSD<15%，准确度在85%—115%.定量下限：是标准曲线的最低浓度点，要求至少能满足测定3—5个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的1/10—1/20时的药物浓度.样品的稳定性：根据具体情况，对含药生物样品在室温、冰冻和冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察，以确定生物样品的存放条件和时间.提取回收率：一般低于100％，须稳定.应考察高、中、低三个浓度的提取回收率，其结果应一致、精密和可重现.质控样品：将已知量的待测药物加入到生物介质中配制的样品，用于质量控.1准确度：用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，以回收率表示.1.原料药回收率=测得量/加入量*100%，测定3~6次，西药在98~102%，中药在95~105%.2.制剂的回收率=(测得量-本底量)/加入量*100%.2精密度：规定的测试条件下同一个均匀供试品经多次取样测定所得结果之间的接近程度.表示方法：偏差d，标准差SD，相对标准差RSD，至少对6次结果进行评价.验证内容：重复性(较短时间间隔内相同操作条件下由同一分析人员测定所得结果的精密度，需对9个测定结果进行评价)；中间精密度(同一实验室，由于实验室内部条件的改变，所测得结果的精密度)；重现性(不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度)3专属性：在其他成分(如杂质，降解产物，辅料等)可能存在的条件下，采用的方法能准确测量出被测物的特性.4检测限(LOD)：试样中被测物能被检测出的最低浓度或量{反应方法是否具备足够灵敏度，无须准确定量，只要指出高于或低于规定的浓度或量即可}.一般以信噪比S/N=3时的相应浓度确定LOD值.5定量限(LOQ)：样品中被测物能被定量测定的最低量.以S/N=10时的相应浓度确定.6线性：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质的浓度或量有直接呈正比关系的程度.7范围：能达到一定精密度，准确度和线性，测试方法适用的高低浓度或量的区间.8耐用性： 测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度.(1)定量分析法：RSD≤0.2%，回收率99.7~100.3%.(2)UV法：RSD≤1%，回收率98~102%，线性，A在0.2~0.7之间， 需5份浓度数据r ＞0.999，截距接近于0. (3)HPLC，r ＞0.999，b≈0，回收率98~102%. (1:1~3)的有机溶剂(乙腈、)②加入中性盐(1:2)(饱和硫酸铵，硫酸钠，Mg2+，磷酸根，枸橼酸盐等)③加入强酸(1:0.6)(10%三氯醋酸，65%高氯酸，5%偏磷酸)，可用煮沸分解或加碱中和沉淀法去除.④(枯草菌溶霉素)

故优先使用.蛋白质分离，纯化与浓缩：①液液萃取法(LLE)选择性高，乙醚，三氯甲烷.要求选用溶剂a对被测组分溶解度大，沸点低，易于挥发浓缩；b与水不相混溶c无毒，化学稳定，不易乳化.②液固萃取法(LSE)a较少引入杂质，b消除了LLE中的乳化现象，c萃取率高d在组后洗脱中多采用水为溶剂系统，大大增强了安全性e处理样品速度快，并可在室温下操.性质：酮式—烯醇式互变.①弱酸性，可用于该类药物的分离，鉴别，检查和含量测定②与金属离子反应：专属性不强，用于鉴别和含量测定.A与银盐反应：在碱性溶液中，最初生成白色沉淀，振摇后可溶解，之后生成白色沉淀，不再溶解.B与铜盐反应：在吡啶溶液中生成烯醇式异构体，并与铜形成稳定的配合物，巴比妥类呈紫色，含硫巴比妥呈绿色.C与汞盐呈白色沉淀.D与钴盐反应：无水条件下与钴盐在碱性溶液中生成紫堇色配合物.E与香草醛反应：丙二酰脲中的氨与香草醛在弄硫酸存在下缩合，生成棕红色产物.③显微结晶：巴比妥为长方形结晶，苯巴比妥在开始结晶时呈现球形，后变为花瓣形.用于应一、丙二酰脲类鉴别试验：银盐反应，铜盐反应.三、利用特殊取代基或元素的鉴别试验.1、利用不饱和取代基的鉴别试验：a\与碘试液反应：棕黄色应在5min内消失.b\与高锰酸钾反应：生成棕色的二氧化锰.2、利用芳环取代基德鉴别试验：a\硝化反应，生成黄色硝基化合物.b\与硫酸—亚硝酸钠反应，生成橙黄色产物并随即变为橙红色c与甲醛—硫酸反应，生成玫瑰红色产物.3、硫元素反应：在NaOH中与铅离子反应生成白色沉淀，加.四、IR法.

.①酸度检查，甲基橙不得显红色.②UV法、HPLC、银量法：以硝酸银为滴定液，以沉淀反应为基础的滴定分析.①此法操作简便，专属性强，巴比妥类药物的分解产物或其他一些可能存在的杂质不与硝酸银反应.②采用甲醇及3%无水碳酸钠溶剂系统，采用Ag-玻璃电极系统电位法指示终点.③每毫升硝酸银滴定液相当于22.63mg异戊巴比妥.溴量法：①凡在5取代位基团中含有不饱和双键的巴比妥药物，其双键可以与溴定量发生加成反应.②采用过量定量溴反应，再用KI滴定生育溴生成碘，再用硫代硫酸钠滴定，③操作简便，专属性强，针对结构中双键特征，可与其他巴比妥类药物区别.酸碱滴定法：①在水—乙醇混合溶剂中滴定，采用电位法指示终点.②在胶束水溶液中滴定，优于①法，采用指示剂或电位法指示终点.③非水溶液滴定法，指示剂为麝香草酚蓝，或用玻璃—甘汞电极电位法.UV法——直接测定的UV法.巴比妥类药物在酸性介质中几乎无电离，无明显的紫外吸收，但在碱性介质.

典型药物：苯甲酸类，水杨酸类，其·2吸电子基团使酸性↑·3水杨酸类羧基可氮化-偶合反应水解反应，UV，色谱(羟基)·1水杨酸及其盐类+FeCl3 中性/弱酸性→紫色配合物·2苯甲酸的中性或碱性溶液+FeCl3→赭色↓·3丙磺舒(本技术类)--少量NaOH→钠盐--FeCl3→米黄色沉淀.重氮化偶合反应：两步反应：1酸性条件与亚硝酸钠重氮化成重氮盐2碱性β萘酚 偶合→橙红色猩红色沉淀.用于鉴别芳伯胺(贝诺酯).水解反应：(酯基)·1阿司匹林+Na2CO3 加热→ 稀硫酸→白色水杨酸↓+醋酸↑(臭气)·2酚磺乙胺+NaOH △→二乙胺↑(臭气，湿润红色石蕊试纸变蓝).紫外分光光度法：取决于分子结构中的共轭体系IR：专属性强，但不适合混合物、药物制剂的鉴别.含量测定:1、酸碱滴定法(阿司匹林)(乙醇在使用前用NaOH调至中性)·1直接滴定法：原料药分析(采用中性乙醇防止阿司匹林水解)·2水解后剩余滴定法:过量NaOH水解→剩余NaOH→回滴定·3两步滴定法：制剂分析→中和→水解(精密加NaOH并加热)→测定→计算.特点：简单，但专属性差，易受阿司匹林的降解产物水杨酸及醋酸的干扰，故不适用于水杨酸含量较高的样品测定.2、双相滴定法(苯甲酸钠)间氨基酚易溶于乙醚，而对氨基酚水杨酸钠不溶于乙醚的特性，用乙醚提取分离杂质后，乙醚提取液中加入适量水和指示剂后，用盐酸滴定液滴定，以消耗一定量盐酸滴定液来控制限量.该法为双相滴定法，所生成的盐酸盐在乙醚中不溶，而转于水相中.目的：利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，在水相中加入与水不相混溶的有机溶剂，将滴定过程中产生的 苯甲酸不断萃取入有机溶液中，降低苯甲酸在水相中的量，使滴定反应完全，终点易于判断.

特殊杂质检查—阿司匹林·1溶液澄清度：0.5g样品用10ml加热至45°C的Na2CO3溶解，溶液应澄清·2水杨酸(生产中乙酰化不完全/贮藏中水解产生)原理：水杨酸+高铁盐 弱酸性条件下→紫堇

1自身对照法·2HPLC法 芳伯胺基未被取代，而在芳环对位有取芳伯胺基被酰化，并在芳环对位有取代1、重氮化-偶合反应Ar-NH2 --Hcl、/NaNO2萘酚→橙黄-猩红色沉淀.·1直接法(苯佐卡因、盐酸普鲁卡因)·2间接法(对乙酰氨基酚)红色.2、三氯化铁反应：具酚羟基的芳胺类药物+FeCl3→蓝紫色配合物3、与重金属离子的反应：·1盐酸利多卡因的鉴别(具有芳酰胺结构):硫酸铜/碳酸钠试液→蓝紫色配合物→显黄色(溶于氯仿)///氯化钴/酸性溶液→亮绿色细小钴盐沉淀↓·2. 盐酸普鲁卡因胺的鉴别(具有芳酰胺结构):浓过氧化氢/加热至沸→羟肟酸 三氯化铁→羟肟酸铁变紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色.·3. 与汞离子反应：芳酰胺类，如盐酸利多卡因 ，硝酸汞/硝酸→煮沸变黄色；对氨基苯甲酸酯类，如苯佐卡因：硝酸汞/硝酸→煮沸变红色或橙黄色.4、水解产物反应：·1. 盐酸普鲁卡因(的鉴别)＋10％氢氧化钠溶液→白色↓(普鲁卡因)加热变为油状物；继续加热→ 蒸气(二乙氨基乙醇)↑能使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色；加热至油状物消失→放冷、加盐酸酸化→白色↓(对氨基苯甲酸)能溶于过量的盐酸.·2苯佐卡因(鉴别)＋氢氧化钠试液5ml 煮沸→乙醇，加入碘试液/加热→ 黄色↓并发生碘仿臭气.5、制备衍生物测熔点：·1. 盐酸利多卡因/盐酸布比卡因 三硝基苯酚→ (滤过，用水洗涤沉淀后105℃干燥)三硝基苯酚利多卡因(mp. 228~232℃)/ (80℃干燥)三硝基苯酚布比卡因(mp. 194℃).·2. 盐酸丁卡因 25％硫氰酸铵溶液/580℃干燥后得丁卡因硫氰酸盐( mp. 131℃(普鲁卡因，苯佐卡因 )~·1利用重氮化反应，采用永停滴定法指示反应终点·2主要条件A.加入适量溴化钾加快反应速度B.加入适量盐酸加快反应速度C.反应温度越高反应越快，但温度高时重氮盐分解加快，HNO2也会挥发D.滴定速度不宜太快，滴定管尖端插入液面下滴定.二、非水滴定法(丁卡因、利多卡因、布比卡因)滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰·3分光1. 芳伯氨基：重氮化－偶合2.水解特性：因分子结构中有酯键，故易水解.水解反应的速度快慢受光、热或碱性条件的影响.3.弱碱性：有叔胺氮原子，生物碱沉淀剂反应，非水溶剂滴定.4. 溶解性：游离碱，油状液体或低熔点固体难溶于水，易溶于有机溶剂；盐酸盐白色结晶粉末，具一点的熔点，易溶于水

1水解后显芳伯胺性特性，可发生重氮化-2水解产物易酯化，原料药易水解·3具有酚羟基特性，与FeCl3发生显色反应·4弱碱性，能与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，可用非水碱量法测定含量·5游离碱易溶于有机溶剂，其盐可溶于水·6与金属离子发生络合显色反应，酰胺基上的H可在水溶液中与铜离子或钴离子配位，形成有色1有关物质：中间体、副产物及分.·2对氨基酚检查：对氨

主要性质1弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮－弱碱2酚羟基特性：邻苯二酚(或苯酚)结构，与金属离子络合呈色；在空气中或.·3光学活性：手性碳原子，1 FeCl3反应(酚羟基)2甲醛--红色 盐酸异丙肾上腺素-暗紫色 3氧化反应：临酚羟基→[O]→醌类结；a肾上腺素→H2O2→血红色→放置→棕色；b盐酸异丙肾上腺素→I2 H+→淡红色、c4、UV、1非水滴定法(注意条件：加冰醋酸，加醋溴量法

310nm处酮体有最大吸收，而药物在该处无主要化学性质及其鉴别反应：1弱碱性：遇碱<尼可刹米>；2还原性：<异烟肼>酰胺基具较强还原性：异烟肼加入氨制AgNO3Ag↓+NH3↑；3缩合反应：<异烟肼>与芳醛形成腙：异烟肼+芳醛(水，加热)异烟腙(黄色结晶)；4吡啶环开环反应<异烟肼,尼可刹米>：a、适用于吡啶环β或γ被羧基衍生物取代且α，α`位无取代基的吡啶类；b、戊烯二醛反应：吡啶类药物戊烯二醛颜色：1，苯胺=>黄~黄棕色.2联苯胺=>粉红~红色，Ch.p中仅尼可刹米；c、二硝基氯苯反应.无水条件：吡啶→紫红色.可鉴别尼可刹米与异烟肼，但需要处理即将酰肼氧化成羟基或将酰胺水解后鉴别.有关物质检查：1、异烟肼中游离肼的检查：1’薄层色谱法：Ch.P法：喷乙醇制对一二甲氨基苯甲醛试液，限量0.02%;;BP法：①254nm紫外灯(自身对照法测其他啡肼杂质)，限量0.2%②再喷对二甲氨基苯甲醛试液，限量0.05%.2’比浊法：样品中加水杨醛的乙醇溶液，观察浑浊.3’差示分光光度法《专属性强，准确，灵敏，最低检测限1ug/ml》.原理：i，肼加水杨酸→黄色，λmax=465nm；异烟肼加对氨基苯甲醛在λ=465nm处已吸收.ii，加入3%丙酮，产物为无色的二甲基酮连氮(肼).iii，以加丙酮与不加丙酮吸收差值计算△A465nm，并以TLC中“高低浓.

主要理化性质：1’紫外吸收光谱特征：硫氮3个吸收峰，205nm，254nm，300nm，最强峰在254nm附近.2’红外吸收光谱特征：由于R,R’不同，具有不同的IR光谱，明显指纹差异.3’与金属离子配合显色：二价硫可与钯离子形成有色配位化合物，而氧化的砜与亚砜无此反应，专属性强.4’氧化显色：二价硫易被氧化.樱红->红色(鉴别).鉴别试验：①Uv，IR；②显色反应：与钯离子8-8P216)

主要化学性质:①具弱碱性，故可用非二苯甲酮衍生物.化学鉴别方法：①沉淀反应：可与生物碱沉淀剂作用生成橙红色沉淀 氯氮卓；②水解后呈芳伯胺反应，即呈氮化-偶合反应

；③硫酸荧光反应：本类药物溶于硫酸之后，在356nm下显不同色荧光：地西泮黄绿、氯氮卓黄色.

喹啉类：主要性质：碱性，旋光性，荧光特性；鉴别试验：绿奎宁反应；有关物质检查：其他金鸡纳碱检查.托烷类药物的分析：主要化学性质：水解性，碱性，旋光性；有关物检查：1’酸度检查23，其他生物碱检查(本品水溶液加入氨试验不得：1、弱碱性药物含量测定多采2、酸根影响：1·影响程度：高氯酸>氢溴酸>硫酸>盐酸>HSO4->硝酸>磷酸>有机酸.若滴定过程中被置换出的HA酸性强，则反应不能进行到底2·解决方法：1,如测定杂环类药物氢卤酸盐时，加入定量醋酸汞醋酸溶液，以生成在醋酸中难以解离的卤化汞以消除氢卤酸对滴定的干扰；2.硫酸盐滴定时，用较大量醋酐做溶剂，以提高终点灵敏度，但反滴定至其为硫酸氢盐为止；3.指示剂.影响因素：1·水相最佳PH选择，必须使得药物为阳离子，染料为阴离子；2· 酸性染料及其浓度：常用溴麝香草酚蓝，溴甲酚绿，甲基橙；i要求能与药物定量结合，离子对极易溶于有机相，而染料不溶或溶解度极小；ii避免因浓度过高而发生乳化.3·有机溶剂的选择:氯仿，二氯甲烷.4·水分的影响：应严防水分混入有机相中，多加入脱水剂去水.5·酸性染料中的有色杂质，尽量减少以减少干扰.分光光度法：①直接分光光度法：i吸收系数法；ii对照法(可消除仪器溶剂的误差，准确性高).②萃取—双波长分光光度法.③萃取后分光光度法.④二阶导数分光光度法.⑤钯离子比色法(吩噻.

.HPLC法 ①方向HPLC：需要注意提高柱效和峰对称性，可采用端基封闭技术；②离子对HPLC:主要针对盐样品(阳离子)分析碱性物质时常用烷基磺酸盐阴).

性质：1·溶解性：VA与氯仿 乙醚 环己烷或石.2·不稳定性：易被紫外光裂解(尤存在金属离子时).3·紫外吸收特性：325-328nm范围内有最大吸收.4·与三氯化锑显色：VA在氯仿中与三氯化锑产生蓝色并转变为紫红色.鉴别试验：1、三氯化锑反应(Carr-Price反应)：取VA油溶液1d 加氯仿10ml振摇使溶解 取2d 加氯仿2ml 与25%三氯化锑的氯仿溶

液0.5ml(即显蓝色渐变为紫红色).法2：反应需在无水无醇条件下进行 尤氯仿中不可有醇类杂质.2、 UV法：a，加无水乙醇-盐酸(100:1)溶解 在紫外分光光度计300-400nm范围内扫描 326nm吸收处有单一吸收峰.b，加无水乙醇-盐酸(100:1)溶解 并置水浴加热30秒 迅速冷却 处 有三个尖锐吸收峰 在332nm紫外分光光度法(三点校正法)第一法：a(环己烷)，换算因子= 1IU=00344ugVA醋酸酯；b，1gVA醋酸酯相当于2907000IU→换算因子=1900；c，换算因子：单位数值所相当的效价.A值的选择(Ai/Az)：规定值： 300nmA0~~0.555 、316nmA1~~0.907、328nmA2~~1.000 、340nmA3~~0.811、360nmA4~~0..299、A325(校正)=3.52*(2A328-A316-A340).第二法：皂化法：适用于VA醇(异丙醇)，换算因子=1830，A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334

判断法：若λmax在323-327内 且小于等于0.73 则 :a 若(A325(校正)-A325)/ A325在正负3%以内 则用A325 ；b若上式超过正负3% 则用A325(校正)；若λmax不在323-327内 或大于0.73 .

性质：硫色素反应→可产生荧光；紫外吸收特(9→1000) 在246nm处测A，406-436；与生物碱沉淀剂反应：两个苯环可与硅钨酸生物碱试剂产生恒定沉淀.鉴别试验→硫色素反应：取本品约5mg 加NAOH试液2.5ml溶解后 加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml 强力振摇2分钟 放置分层 上层呈强烈蓝色沉淀 加酸 荧光即消失 再加碱至呈碱性 荧光重现.含量测定：1、非水滴定法：指示液为喹哪啶红-亚甲蓝混合指示液；以醋酸汞消除氢卤酸干扰；与高氯酸反应；VB1滴定度为 T=16.86mg/ml；2、紫外分光光度法；3、硫色素荧光法：在激发波长=365nm下，呈蓝色荧光(检测波长)=435nm；方法：对照品+NAOH+铁氰化钾+异丁醇(S)对照品+NAOH +异丁醇(d)；供试品+NAOH+铁氰化钾+异丁醇(A)供试品+NAOH+异丁醇(b)；专属性强 不收氧化破坏产物干扰.4、硅钨酸重量法→采用垂熔漏斗过滤.测定 准确度高灵敏度低.

性质：1、维生素C一般表现为一元酸；2、还CuO (红)、VC+AgNO3→银镜、VC+2，6-二氯酚靛酚→酚亚胺(褪色)；3、水溶性：酸性稳定 强碱中内酯环水解生成酮酸盐.鉴别试验：1、与硝酸银，26-二氯酚靛酚反应.2、糖类反应：在三氯醋酸或盐酸存在下生成戊糖，再失水转化为糖醛，加入吡咯，加热至50度产生蓝色.含量测定：1、碘量法：VC制剂进行含量测定时 应先以甲醛 丙酮消除制剂中添加的抗氧剂的影响(亚硫酸氢钠)；滴定溶剂采用新沸冷水 并加稀醋酸减缓VC氧化；以淀粉为指示剂.2、2，6-二氯酚靛酚指示法：以26-二氯酚靛酚标准液滴定至显玫瑰色为终点；滴定液易分解，贮存需经常标结构和性质：侧链为饱和烃链；遇光、空气氧与硝酸反应呈橙红色；三氯化铁反应呈血红色；紫外分光光度法(特征性不强)λmax=284nm，λmin=254nm.含量测定：1硫酸铈滴定液直接滴定；2气相色谱法：FID检测器，内标法(三十二烷)；3高效液相色谱法：甲醇：水(49:1)，C-18 ，).

：1、肾上腺皮质激素2、雄性激素及、雌性激素.鉴别方法：1)与强酸的呈色反应(硫酸)2)制备衍生物测定熔点①缩氨基脲的生成(例：苯丙酸诺龙处理后m.p.182C)②醋的水解(例：丙酸睾酮处理后m.p.150-156C)③肟的生成④醋的生成.官能团反应：①C17-α-醇酮基呈色反应，仅针对皮质激素类(i)选用试剂：碱性酒石酸铜溶液→氧化铜(红色沉淀)；氨制硝酸银试液→银镜反应；四氮唑试液→显色反应(ii)例：醋酸地塞米松加入斐林试液→红色沉淀.②酮基橙色反应：含C3-酮基和C20酮基的甾体激素类药物，羰基试剂：2，4-二硝基苯肼，硫酸苯肼.③甲酮基呈色反应：含甲统酮基及活泼亚甲基.专属反应：黄酮体+亚硝基铁氰化钠→蓝紫色.常用试剂：亚硝基铁氰化钠，间二硝基酚，芳香醛类.④酚羟基呈色反应：含酚羟基的雌激素，与重氮苯磺酸的反应→红色.⑤炔基的沉淀反应：含炔基的药物 遇硝酸银的试液→白色炔银沉淀.特殊杂质检验：1)有关物质的检验：与标识物不同的甾体化合物，来源于原料，中间体及异构体的降解产物.①TLC法：(i)多用自身对照法：经常其他甾体未知.(ii)显色方法：四氮唑盐，硫酸-乙醇.(iii)判定方法：规定杂质斑点数目和颜色深浅.②高效液相色谱法(采用自身对照法)；2)硒的检查：限量：0.005%-0.01% 二氨基苯比色法.含量测定：1)UV法；2)HPLC法；3)比色法：①四氮唑比比色法：适用于皮质激素类药物(i)四氮唑比；(ii)原理：TTC或BT+皮质激素→RT(红色)或双甲腈(暗红色)需在25C下暗处放置40-45min；(iii)影响因素：1、基团影响：反应速度C11酮取代>C11羟取代>C21羟基取代产物2、溶剂与水分的影响：含水量<=5%时几乎无影响，一般采用无醛无水乙醇3、碱的种类：氢氧化四甲醛氨，加入顺序：皮质激素—四氮唑—碱4、空气中氧及光线的影响：①反应对光敏感，应避免溶剂在晴处反应并立即测定吸光度②TTC的甲腈对氧气敏感，应充入氮气密封反应5、湿度和时间的影响：25℃暗处反应40~~45min.②异烟肼比色法：适用于雄性激素，皮质激素和孕激素.(i)原理：C3酮基→异烟腙(黄色)(ii)方法：对照液+供试液(iii)讨论(1)溶剂的选择：无水乙醇或无水甲醇(2)酸的浓度：酸：异烟肼=2:1A最大且酸变大—异烟肼盐下降；(3)水分↑A↓；T↑—反应速度↑；在闭塞容器中反应，光和氧气影响不大.③ 柯柏反应比色法：适用于雌激素(i)与硫酸—乙醇反应显色，515nm处A最大.(ii)改变的KOBER反应：(1)加强红色产生物稳定性，消除反应.(2)灵敏度高，选择性强，非化学计量反应.

.特点：①化学纯度低②活性组分易发生变异具苯环取代基的青霉素(母环共轭)④β-内酰胺类的不稳定性：干燥条件稳定性>>溶液稳定性.鉴别试验：①色谱法②光谱法③呈色反应(i)羟肟酸铁反应(ii)双缩脲反应(iii)茚三酮反应.特殊杂志的检查：①聚合物(为致敏物质，严重可影响用药安全性)(i)方法：分子排阻色谱法，离子交换色谱法，反响高效液相色谱法(ii)来源：内来源：药物自身聚合物—生产贮存过程中，或使用不当产生.外来源：蛋白多肽多糖及其与药物的结合物—发酵中纯化不当.(iii)具体方法：自身对照外标法②有关物质和异构体：(i)有关物质—多为降解产物，中间体，影用药安全性(ii)异构体—低效.无效异构体影响效价.含量. 化学结构：以碱性环己多元醇为苷元，与氨：①溶解度及碱性：水溶解性良好②具有旋光性③强酸，强碱均可使其溶解④链霉素在230nm处有紫外吸收.鉴别试验①茚三酮反应：生成蓝紫色缩合物②N-甲基葡萄糖反应：生成樱红色③麦芽酚反应：紫红色④坂口反应生成橙红色化合物⑤.

1)为两性化合物，临床多用盐酸盐2)具有旋光性 4)稳定性 ：a差向异构化→差向四环素ETC；b酸性降解→脱水四环素ATC ；c碱性降解→异四环素无活性 5)能与金属离子络合显色.鉴别实验1、HPLC 2、TLC 3、a浓硫酸反应；b FeC反应.

比原料药物分析复杂 2)测定项目和要求.贮藏和使用过程中不再产生，则不在制剂中检查 3)杂质限量要求不同 4)分析方法的要求不重量差异：按规定称量方法测得片剂每片 2)含量均匀度 对小剂量口服固体制剂、粉雾剂或注射用无菌粉针剂 每片含量偏离标志量的程度 取10片3)崩解时限：固体制剂在规定介质中，以规定的方法进行检查，崩解溶散并通过筛网所需时间的限度→6片4)溶出度的检查(针对难溶性药物)药物从片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出装量：必须保证注射液注射用量不少于标4)无菌检查5)热原检查6)细菌内毒1)糖类：会干扰氧化还原滴定，会干扰配位滴定法，硬脂酸根离子可干扰非水滴定法：a加掩蔽剂掩蔽Mg2+；b若主药含量大，硬脂酸镁含量小，可不考虑对非水滴定的影响3)抗氧化剂，如亚硫酸钠，焦亚硫酸钠，硫代硫酸钠，Vc等→ a、加入掩蔽剂(羰基试剂)如丙酮甲醛；b、加酸分解c、加入弱氧化剂氧化d、改用其他方法避开氧化还原过程，如用UV；e、萃取后UV测定法4)溶剂油：影响以水为溶剂的分析方法：a有机溶剂稀释法；b萃取法；c柱色谱法5)等渗溶液：一般无影响，出现干扰情况少或者干扰物.

供应，使用检验和药政管理部门共同遵循的法定国家药品标准《中华人民共和国药典》和药(2001)b、ChP收载疗效确切，生产成熟，产品稳定的药品.药品标准收载其他为

08级药物分析缩印

收入Ch-P的药品2)临床研究用药品质量标准：仅在临床试验期间4)企业标准(非法定标准)

安全有效：毒副反应小 疗效肯定2)先TLC，MS，AA；3)针对性：针对不同剂型4)规范性.

名称：1药品名称应科学、明确简短23中文名尽量与英文名对应4无机化学药物，如化学名常用且较简单，应采用化学名；如化学名不常用，可采用通俗名5盐类药物，酸名列前，盐基列后.2)性状：1外观与臭味2理化常数.3)鉴别：a、方法要有一定专属性，灵敏性，便于推广b、化学法与仪器法相结合c、尽可能采用ChP中的收载方法4检查：安全性，有效性，均一性，纯度要求a、一条生产线一个检查方案b、对于杂质检查的基本要求是要研究方法的基本原理专属性灵敏性试验条件和最佳化.对于色谱打，还要研究其分离能力5)含量测定：对药品中有效成分的含量测定a、方法选择原则1对西药原料药，作准确性考虑，故首选容量分析法2对制剂分析，作专属性考虑，故首选HPLC 3对酶类药物应首选酶分析法，抗生素类应首选HPLC法及微生物检测法，放射性药物首选放射性药物检测法4上述方法不适用时采用计算分光光度法5对新药研制，其含量测定应选用原理不同的两种方法进行对照性测定b、含量限度的确定：1根据不同剂型一般原料药大于99.0%、片剂90％~110％、注射剂93％~107 ％；2根据生产的实际水平3根据主药的含量多少，含量大，限度为标示量的95％~105％；含量中等，限度为标示量的93％~107％；含量小，限度为标示量的90％~110％或80％~120 ％；4标准太高，生产上难以达到，标准太低，药品质量无法保证.贮藏：1稳定性试验的目的：A影响因素试验 为贮藏处方加工工艺提供资料；B加速试验 确定药品能在临床研究或试生产期间保证质量；C长期试验 考察药品使用期限.

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/puwi.html