c-met蛋白在大肠癌组织中的表达和与肿瘤肝转移的关系
更新时间:2023-09-04 13:40:01 阅读量: 教育文库 文档下载
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中南大学
硕士学位论文
c-met蛋白在大肠癌组织中的表达及与肿瘤肝转移的关系
姓名:周卫
申请学位级别:硕士
专业:外科学
指导教师:吴君辉
20040401
摘要
目的:探讨c.met蛋白在癌旁正常大肠粘膜,大肠腺瘤,大肠癌组织中的表达及与大肠癌发生、发展、肝转移的关系。
方法:用免疫组化SABC法检测10例癌旁正常大肠粘膜,10例大肠腺瘤,31例术前未发现肝转移而行手术切除的大肠癌组织,13例有同时J陛肝转移而行手术切除的原发灶,转移灶组织中c.met蛋白表达水平,分析其与大肠癌病理分化程度,淋巴结转移及肝转移的关系,并比较同时性肝转移中原发灶与转移灶表达水平的差异。
结果:(1)c-met蛋自在正常大肠粘膜,大肠腺瘤中表达明显低于大肠癌(P<0.05)。
(2)在大肠癌中,c.met蛋白在各病理分化程度的大肠癌组织中表达无明显差异(P>0.05)。
(3)有淋巴结转移的大肠癌组织中,c.met蛋白表达明显高于无淋巴结转移者(P<O.05)。
(4)有肝转移(包括同时性肝转移和异时性肝转移)的大肠癌组织中,c-met蛋白表达明显高于无肝转移者(P<0.05)。
(5)有同时性肝转移的大肠癌,其转移灶c.met蛋白表达高于原发灶(P<0.05)。
结论:(1)c-met在大肠癌发生、发展、转移中起重要作用。
(2)c.met蛋白对大肠癌肝转移有一定的预测作用。
关键词:c-met蛋白,大肠癌,肝转移,免疫组化
Abstract
Objective:ToinvestigatetheexpressionofC-metproteinin
surroundingnormalcolorectaltissue,colorectaladenoma,colorectalcancer,andthecorrelationwithgeneration,developmentandlivermetastasisofcolorectalcancer.
Methods:11leexpressionofC-metproteindetectedbySABCimmunohistochemicalmethodin10normalcolorectalmucosa,10colorectaladenoma,31colorectaltissuewithnopreoperationlivermetastasis,13livermetastasistissueandcorrespondingprimarycancertissueofsynchronichepaticmetastasiswereanalyzedtodemonstratethecorrelationwiththehistologicalgrade,Dukesstages,lymphnodemetastasisandlivermetastasis.
Results:(1)mexpressionlevelofc-metproteininnormalcolorectalmucosaandcolorectaladenomaweresignificantlylowerthanthatincolorectalcancer0<0.05).
(2)Theexpressionlevelofc-metproteinhad110correlationwithhistologicalgradeincolorectalcancerO>o.05).
0)Theexpressionofc-metproteinincolorectalcancerwithlymphnodemetastasiswassignificantlyhigherthanthatwithnolymphnodemetastasis(p<O.05).
(4)Theexpressionofc.metincolorectalcancerwithlivermetastasisincludingsynchronichepaticmetastasisandheteroehronic
hepaticmetastasisweresignificantlyhigherthanthatwithnolivermetastasis(p<0.05).
∞Theexpressionof‘C.metinlivermetastasistissuewassignificantlyhigherthanthatinthecorrespondingprimarytumor(p<0.05).
Conclusion:(1)c-metproteinplaysagreatroleinthecourseof
colorectalcancel'.
generation,developmentandmetastasisof
(2)Thehighexpressionofc-metproteinincolorectal
cancertissuemaybeconsideredasallindicatorforhepaticmetastasisofcolorectalcancer.
1I
Keywords:c—metproteincolorectalcancerlivermetastasisimmunohistochemistry
原创性声明
本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所做得贡献均已在论文中作了明确说明。
同丑日期:生臣旦-作者签名:
关于学位论文使用授权说明
本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其他手段保存学位论文;学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。
作者签名:坠导师签名:
HGF
SF
ECM
PAS.P
PTK
M[APKAP~1CAMTyr
缩略词
hepatocytegrowthfactor
scatterfactor
extracelularmatriX
plasminogenactivator
streptavidin-peroxidase
proteintyrosinekinase
mitogen-activatedproteinkinase
activeprotein一1
ceUadhesionmolecules
tyrosineresidue
V
肝细胞生长因子
离散因子
细胞外基质
纤溶酶原激活因子
链霉素抗生物素一过氧化物酶法
酪氨酸蛋白激酶
丝裂原活化蛋白激酶
活化蛋白一1
细胞粘附分子
酪氨酸残基
硕士学位论文第一章前言
第一章前言
大肠癌包括结肠和直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,每年全世界约有50万人发病,在西方国家大肠癌死亡率仅次于肺癌和乳腺癌,居恶性肿瘤死亡率第3位。近年来我国大肠癌发病率呈升高趋势,尤其是在经济发展较快的城市和地区。据上海市统计,1990年大肠癌的发病率己由原来恶性肿瘤的第四位上升为次于肺癌和胃癌之后的第三位。临床就诊的大肠癌病人,大致分为两大类,约1/3病人在就诊时肿瘤已至晚期不能切除,这类病人预后很差,平均生存期约7个月。另外2/3的病人能切除原发肿瘤,即使能行“根治性切除”,约50%的病人在手术后5年内发生肝转移。研究表明,许多大肠癌较早发生肝转移,但有些大肠癌并不发生肝转移,可能是一些分子机制决定了大肠癌是否发生肝转移。研究大肠癌发生、发展过程中的分子机制及其与临床病理的联系,寻找预测大肠癌肝转移的指标对提高大肠癌的预后预测和采取更有效的治疗方法都有重要意义。
许多肿瘤发病过程中都存在原癌基因的激活和抑癌基因的失活。c-met蛋白是一种由c-met原癌基因编码的蛋白产物,为肝细胞生长因子受体,具有酪氨酸激酶活性,与多种癌基因产物和调节蛋白相关,参与细胞信息传导、细胞骨架重排的调控,是细胞增殖、分化和运动的重要因素。人们对c-met基因及蛋白与肿瘤的关系作了大量的研究工作,多数研究表明,许多肿瘤病人在其肿瘤的发生和转移过程中均有c-met过度表达和基因扩增,表明c-met与多种癌的发生和转移密切相关。本研究旨在通过癌旁正常大肠粘膜,大肠腺瘤,大肠癌原发灶组织及肝转移灶组织c-met蛋白表达水平的检测,探讨它与大肠癌发生,发展,肝转移的关系,了解c-met蛋白检测对大肠癌肝转移有无预测作用。
坝士学化论文
第二章材料和方法
1.实验对象
1.1标本的准备
1.1.13l例术前未发现肝转移而行手术切除的各期大肠癌标本,取自中南大学湘雅三医院普外科2000年1月至2001年6月手术切除,病理诊断明确的石蜡标本,所有3l例大肠癌患者均行2年以上随访,结果5例出现异时性肝转移。
13例大肠癌同时性肝转移并行原发灶和转移灶切除的肿瘤组织取自湖南省肿瘤医院外科2002年1月至2003年1月所切除,病理诊断明确的石蜡标本。所有病例术前均未行放疗及化疗。所有44例大肠癌患者中:男性28例,女性16例;年龄最小的34岁,最大的76岁,平均年龄56岁;高分化组18例,中分化组16例,低分化组lO例。出现淋巴结转移32例,出现肝转移13例。临床分期Dukes‘A期5例,Dukes’B期7例,Dukes’C期19例,Dukes7D期13例。1.1.210例癌旁正常粘膜取自中南大学湘雅三医院普外科2003年手术切除的大肠标本,距癌组织5cm以上,病理证实无癌变。
1.1.310例大肠腺瘤取自2002年至2003年中南大学湘雅三医院普外科手术切除及消化内科内镜下电切标本,并经病理证实。
表l大肠癌病人临床资料表
1.2实验设计分组
1.2.1分为癌旁正常粘膜组,10例;大肠腺瘤组,10例;大肠癌组44例,其中无肝转移组26例;肝转移组18例,.包括同时性肝转移13例,异时性肝转移5例。
1.2.2石蜡包埋的标本行4um厚切片,每例连续作3张切片。一张行HE染色,
以观察细胞分化程度等病理特征。一张作阴性对照。另一张行c-met蛋白免疫组织化学染色。病理特征和免疫组化的结果由两位病理科医师独立单盲阅片。
2、主要试剂仪器
2.1c—met一抗:兔抗人单克隆抗体,浓缩型:
2.2SABC试剂盒:包括正常山羊血清封闭液,生物素标记的第二抗体,链霉亲合素一过氧化物酶复合物。均为即用型。
颀j:学位论史
(试剂1、2均购自武汉博士德生物工程有限公司)
2.3DAB显色剂:
2.4无水乙醇;
2.53%双氧水;
2.6柠檬酸盐缓冲液,浓度为0.OlM,PH6.O;
2.7磷酸盐缓冲液(PBS)浓度0.01M,PH7.4;
2.8苏木素,中性树胶,二甲苯;
2.9控温恒温箱,光学显微镜。
3、免疫组织化学实验步骤:
免疫组化检测采用链霉素抗生物素一过氧化物酶(streptavidin-peroxidase,S—P)法。3.1石蜡切片常规二甲苯脱蜡,梯度乙醇复水化,蒸馏水冲洗3次,每次3—5分钟。
3.2每张切片加一滴过氧化酶阻断溶液,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物的活性。PBS冲洗三次,每次3分钟。
3.3根据预试验结果,采用高温高压修复,喷汽后维持5分钟,自然冷却。3.4每张切片加一滴正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余的液体,不洗。3.5滴加适当稀释的一抗(1:100)4。C过夜。
3.6恢复室温后,PBS冲洗3次,每次3分钟
3.7滴加生物素化山羊抗兔IgG,37。C20分钟。PBS冲洗3次,每次3分钟。3.8滴加试剂SABC,37。C20分钟。PBS冲洗4次,每次5分钟。
3.9DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取lml蒸馏水,加试剂盒中A,B,c试剂各1滴,混匀后加至切片。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5—30分钟之间。也可自配显色剂显色。蒸馏水洗涤。
3.10苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
HE染色:常规HE染色,由病理医师确诊。以PBS置换一抗,作为阴性对照。以已知c—met蛋白表达阳性的肝脏组织作为阳性对照。
4、结果判断:
在10x40倍显微镜下观察记数,每张切片随机选择5个视野,每个视野记数200个细胞。阳性染色均表现胞膜或胞浆为黄色或褐色。阳性表达级别采用双评分半定量法,细胞比率计分:0分:无阳性细胞;1分:有阳性细胞,但百分率<33%:2分:阳性细胞百分率为33%--66%;3分:阳性细胞百分率>66%。显色度计分:细胞无显色0分,浅黄色1分,棕黄色2分,棕褐色3分。将两分相加,0分为“~”,1—2分为“+”,3—4分为“++”。5—6分为“+++”。
5、统计学分析
碳士学位论文第二章材料峙方法
在统计分析c-met蛋白与大肠癌临床病理参数的关系时,以阳性表达“+”以上为阳性。采用SPSSIO.0统计软件行x2检验,取显著性检验水准a=O.05。
在进行大肠癌肝转移原发灶与肝转移灶比较时,根据阳性表达级别,进行等级资料统计,取显著性检验水准a=0.05,用SPSSIO.0统计软件,两者之间的差别采用成组设计两样本比较秩和检验Wilcoxon校正法。
4
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