中药化学实验讲义-2011

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中药化学实验讲义

编著者

李文军林玉萍梁晓原（以姓氏笔画排列）

主审：梁晓原

2008年12月

饶高雄

前言

中药化学是一门运用现代化学的理论和方法来研究中药化学成分的学科，近年来发展迅速，逐步渗透到中药鉴定、中药制剂、中药炮制等学科中，在药物的研制，资源的开发、药品检验、生产过程中有广泛的应用。在课程设置上，中药化学是药学相关专业的专业课程，其基本实验技能的培养是本课程的重要组成部分。为此，我们根据本课程教学大纲的要求，结合多年来教学和科研的体会，广泛听取意见，组织编写了本实验讲义。

本教材供中药学、制药工程、中药资源与开发、中药市场营销、中草药栽培与鉴定、中草药栽培技术等专业的学生使用。这次编写的《中药化学实验讲义》主要是继承了原有讲义的精华内容，新增了部分常用试剂的配制方法，加上与之配套编写的实验报告，对学生理论联系实际起到一定的帮助和促进作用。在编写过程中，我们参考了国内已经正式出版的中药化学提取分离、鉴定等方面的书籍和文献，在此向这些编者致以诚挚的感谢!由于编者水平有限，错误和疏漏之处在所难免，敬请各位老师和同学对本教材提出宝贵意见和建议，以便我们进一步提高和修正。

编者 2008年12月

中药化学实验注意事项?????????????????????????1

实验一盐酸小檗碱的提取、精制及检识?????????????????????3 实验二苦参生物碱的提取、分离及鉴定????????????????????7 实验三大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识??????????????????10 实验四芦丁的提取和鉴定 ?????????????????????????13 实验五葛根中黄酮类化合物的提取、分离及鉴定??????????????? 17 实验六黄夹苷的提取、精制及鉴定????????????????????? 19 实验七薯蓣皂苷元的提取分离和鉴定 ????????????????????22 实验八三七总皂苷的提取和精制 ??????????????????????24 实验九茴香醚的提取分离和检识 ??????????????????????26 实验十薄荷醇的提取分离和鉴定 ?????????????????????? 28 实验十一穿心莲内酯的提取分离和鉴定 ????????????????????30 实验十二中药化学成分的系统预试验 ?????????????????????32 中药化学习题集?????????????????????????????? ?40 附录 ????????????????????????????????????39 参考文献 ??????????????????????????????????48

中药化学实验注意事项

一中药化学实验室规则

每位参加实验的同学必须遵守以下规则：

1、要求按安排好的桌号就坐，不得随意调换座位。

2、实验前必须充分预习，搞清原理和操作。实验开始时先仔细检查安装仪器装置，实验操作要严格按操作规程进行。

3、实验进行过程中，要认真观察注意实验进程是否正常。不得做别的事或擅自离开。 4、使用电器设备时，一定要先弄清电路原理及使用方法，切忌盲目使用。电线及仪器不要放在潮湿处，不要用潮湿的手接触电器。所用电器要正确接地。

5、使用精密仪器要先了解其工作原理、操作方法、注意事项，仔细准备好再使用。 6、使用玻璃仪器动作要轻巧，以防破碎及引起外伤，加热及减压时尤要小心。 7、实验室、实验台(桌)及仪器保持整齐、清洁。公用仪器药品用后及时放回原处。 8、实验室内要保持严肃、安静，不得大声喧哗。严禁抽烟、吃饭吃零食。

9、实验结束要认真整理清洁实验台(桌)及实验用品，打扫卫生。认真检查水，电、门窗，报告带教教师后方可离开．

二实验室安全及防护知识

中药化学实验使用很多易燃、有毒、有腐蚀性的药品试剂和易破损的玻璃仪器。实验操作又常常在加热或减压等情况下进行，需要各种热源、电器或其它仪器，操作不慎易引起火灾、爆炸、中毒、触电、外伤等事故。但只要加强爱护财产，注重安全的责任心。严格遵守操作规程，提高安全意识，及时发现并消除事故隐患。

（一）防火防爆

1、使用和存放易燃有机试剂，要远离火源。

2、在回流，蒸馏易燃有机试剂时，不得直火加热．应选用水浴、油浴或沙浴，加热前要加沸石，防止暴沸。要注意是否漏气，冷凝水是否通畅．注意室内通风情况应良好。

3、蒸馏有机溶剂时，不得在开口容器中加热．亦不能用广口容器接收。极易挥发及有

毒刺激性溶剂尾气应用橡皮管导入水槽。

4、不可将易燃有机溶剂倒入水槽或废物缸内。烘箱内不得烘盛有有机溶剂的器皿。 5、使用电炉长时间加热，要采用隔热措施，防止桌面栲焦。

6、平时准备好灭火用具，万一不慎着火，应沉着冷静积极抢救，立即切断室内所有火源和电源，然后针对着火情况选用适当灭火器材进行处理。

（二）防止中毒和意外伤害

1、使用有毒溶剂药品时操作要严格规范，不能洒落在容器外，勿接触皮肤、口腔，勿吸入有毒气体。

2、产生有毒、刺激性气体的操作要在通风橱中进行。

3、使用处理有毒、危险物时应先观察对其他实验人员的影响，以免伤害别人。 4、有毒物品不得随意放置，严禁乱倒。 5、保持室内通风良好。

取葛根粗粉100g于1000ml圆底烧瓶中，加300ml95%乙醇回流提取2小时，过滤，残渣再用200ml乙醇回流提取一次（1小时），过滤，合并二次醇提液，于水浴上回收乙醇至150ml，转移到烧杯中，加饱和中性醋酸铅溶液至不再有沉淀析出为止，过滤。滤液加饱和碱式醋酸铅至不再有沉淀析出为止，抽滤，沉淀用水洗二次后悬浮于150ml甲醇中，通入H2S气体分解黄酮铅盐沉淀，而转为硫化铅沉淀，抽滤除去硫化铅沉淀，并用甲醇洗2～3次，洗液与滤液合并，中和至pH6.5～7，于水浴上减压回收乙醇至30ml左右，转移到蒸发皿中蒸干，即得总黄酮，称重，计算产率。

（二）葛根总黄酮的分离

1、装柱：将适量中性氧化铝（100～200目）用水饱和的正丁醇混悬后，常规湿法装柱，混悬用溶剂体积V1和装柱后放出溶剂体积V2，计算柱中溶剂保留体积V。

V=V1-V2

这样便于掌握流分的接受，溶剂的更换。

2、加样和洗脱：将葛根总黄酮用水饱和的正丁醇溶解后装入氧化铝柱上，待样品完全被氧化铝柱吸附后加入水饱和正丁醇开始洗脱，等色带到达柱底（用紫外光观察控制），于紫外灯下可看到十种色带，由底至顶分别命名为a～j，其中c没有荧光，其它九个色带均显紫蓝色荧光，分段接收洗脱液，可使葛根总黄酮中各个化合物得以分离。

B流分减压回收溶剂，残渣用50%甲醇重结晶得大豆黄酮，c流分同法处理得大豆黄酮苷，e流分同法处理得葛根素，f流分为葛根素木糖苷。

（三）鉴定

1、纸层析

支持剂：新华层析滤纸，长30cm，宽酌情而定。点样：取少量总黄酮用1ml乙醇溶解即为样品溶液。展开剂：20%KOH乙醇溶液，上行展开。

显色：展开后用铅笔画下前沿，将滤纸在烘箱中烤干后（滤纸放入烘箱前须自然晾干），于紫外灯下观察，划出荧光位置，求出Rf值。

附：据文献记录，大豆黄酮Rf0.04，大豆黄酮苷Rf0.23，葛根素Rf0.50。 2、薄层层析

吸附剂：硅胶G板，于110℃烘半小时。

样品：取少量总黄酮用1ml乙醇溶解即为样品溶液。展开剂：氯仿-甲醇（83:17）

显色剂：三氯化铁-铁氰化钾试剂划出各色点的位置，求出Rf值。

四、思考题

1、葛根中黄酮类化合物结构上有何特点？

2、本实验中，为什么中性醋酸铅不能沉淀葛根中的黄酮类化合物？ 3、为什么中性氧化铝可用于葛根中黄酮类化合物的层析分离？试说明葛根素、葛根苷、大豆黄酮及大豆黄酮苷在氧化铝层析中被洗出先后顺序的理由。

实验六黄夹苷的提取、精制及鉴定

黄夹苷是从夹竹桃科植物黄花夹竹桃（Thevetia peruviana （Pers） K. Schum）的果仁经发酵后提出的亲脂性次生苷的混合物，主要成分为黄夹次苷甲、黄夹次苷乙和单乙酰黄甲次苷乙，商品名为强心灵。

黄夹苷具有强心作用，主要用于因心脏病引起的心力衰竭，阵发性室上性心动过速、阵发性心房纤颤等症的治疗。

黄夹苷中主要化学成分的结构及性质

1、黄夹次苷甲（Peruvoside）：菱形白色结晶(稀甲醇)，mp..161～164℃，[α]D -67.7（甲醇）。在水中的溶解度为1:2500，易溶于氯仿和丙酮，微溶于甲醇和乙醇。

2、黄夹次苷乙（Nerrifolin）：白色结晶(甲醇)，mp.203～207℃，[α]D -52.7（甲醇）。

3、单乙酰黄夹次苷乙（Cerberin）：白色针状结晶(甲醇-水)，mp.215～218℃，[α]D -82.4（甲醇），有毒。可溶于乙醇、氯仿、乙酸及乙醚，几乎不溶于水。

黄夹苷主要为以上三个化合物的混合物，为白色结晶，无嗅，味极苦。易溶于乙醇、甲醇、氯仿、丙酮，微溶干乙醚、水，不溶于苯及石油醚。

OOR1CHOCH3CH32R1HHOCCH3RHHOCH3HOH3OR1OOOCH3

一、实验目的要求

1、学习黄夹苷的提取，精制方法及原理。

2、掌握强心苷的性质，定性鉴别反应，纸层析和薄层层析鉴定。

3、学习通过薄层层析检查酶解前后黄花夹竹桃果仁中所含成分之变化的方法。

二、实验原理

1、在黄花夹竹挑果仁中含有原生苷，同时还含有酶，在适宜的温度和湿度下，利用酶的活性可使原生苷水解为次级苷，然后用乙醇提取。

2、通过纸层析，薄层层析和颜色反应对黄夹苷进行检识和确认。

三、实验方法

（一）黄夹苷的提取和精制

1、原料处理：称取黄花夹竹桃坚果150克，除去硬壳，将所得果仁称重后置乳体中研成粗粉，称重。

2、脱脂：将研细的果仁粉末包在滤纸袋内置于沙氏提取器中，用苯脱脂。脱脂是否完全，可用滴管吸取沙氏提取器上部的萃液，滴在滤纸上若不留油迹，说明已脱脂完全。将脱脂果仁粉末干燥，称重。 3、酶解：将干燥后的脱脂果仁粉末置三角烧瓶中加40℃的水适量以能完全湿润为度（约为果仁粉末的3～5倍量），再加脱脂果仁粉末重量的2.5%的甲苯，加盖，并稍留有空隙，在35～40℃的恒温箱中酶解24小时，观察发酵物的颜色及发酵液pH值的变化，并用薄层层析（TLC）检查酶解前后成分的变化情况。

检查方法：取脱脂粉末少许，加适量甲醇振摇10分钟，得甲醇提取液；另取少许发酵后的粉末加适量氯仿振摇10分钟，得氯仿提取液。将二样品液点于薄层板上进行层析分析。吸附剂：中性氧化铝软板，200～300目，Ⅲ级。展开剂：氯仿—甲醇（97:3）。

显色剂：50％硫酸水液或乙醇液喷后于105℃烤10分钟。

4、提取：于发酵后的粉末中加15倍量（相当于脱脂粉末重）95％乙醇，最于500ml三角烧瓶中，振摇10分钟，减压过滤，残渣再用5倍量乙醇振摇提取，减压过滤，抽于，残渣于布氏漏斗上用适量乙醇洗一次，合并提取液，减压回收乙醇至脱脂粉末的5倍量体积，加脱脂粉末的12.5倍量水放置，待析出沉淀，过滤，干燥，称重，得粗黄夹苷。

5、精制：取上述黄夹苷粗品加40倍量95％乙醇，加热回流10分钟，稍放冷，再加粗品量15％活性炭（脱色）加热回流10分钟，过滤，滤液减压浓缩至粗品5倍量体积，再缓缓加入浓缩液体积3倍量的蒸馏水，放置待析晶完全后，抽滤，结晶以少量乙醚洗净，于70℃干燥，称重，即得黄夹苷精品，计算产率。

（二）黄夹苷的定性鉴别反应

1、3，5—二硝基苯甲酸（Kedde）反应取少量样品于小试管中，加1ml乙醇溶解后加人4％氧氧化钠乙醇溶液2滴，再加2％3，5—二硝基苯甲酸甲醇溶液2滴，观察颜色变化（强心苷溶液应呈紫红色）。 2、碱性苦味酸（Baljet）反应

取少量样品于小试管中，加1ml乙醇溶解后再加2滴碱性苦味酸试剂，放置15分钟，观察现象（强心苷溶液应呈橙红色）。

3、三氯化铁—冰醋酸（Keller—Kiliani）反应

取少量样品置于小试管中，加入0.5％FeCl3的冰醋酸溶液2ml使之溶解，然后沿管壁加人浓硫酸1m1，观察现象（若有α—去氧糖则两液界面呈棕色，渐变为浅兰色，最后冰醋酸层全呈现兰色）。

（三）黄夹苷的色谱鉴定

1、纸层析鉴定

（1）滤纸的处理：取28×4.5cm的层析用滤纸二条，使其均匀地通过盛有甲酰胺-丙酮（3:7）的溶液的平皿，然后置空气中风干15分钟后待用（可先将浸透甲酰胺-丙酮的层析滤纸于干净的普通滤纸中压干）。

（2）点样：取自制黄夹苷精品及黄夹苷标准品5mg溶于氯仿中，用于点样。（3）展开剂：甲酰胺饱和的二甲苯一甲乙酮（1:1）的上层液。

（4）展析操作：将点样后的滤纸条置于层析筒中，以展开剂饱和半小时后，在室温中上

行展开，至溶剂前沿达约20cm时（约3小时），取出纸条在空气中晾干后，置恒温箱中，于120℃烤l小时（除尽滤纸上的甲酰胺）或于电炉上烤至无白烟，然后显色。（5）显色：用Kedde试剂喷雾显色，试剂的组成为： A：2%3，5—二硝基苯甲酸甲醇溶液。 B：5％氢氧化钠乙醇溶液。

显色时分别在纸上喷以两种显色剂，强心苷应呈红色斑点，画下色点位置，计算Rf值。 2、薄层层析鉴定

（1）点样：取自制黄夹苷精品及黄夹苷标准品名5mg，分别溶于1ml甲醇中，用于点样。（2）吸附剂：硅胶G硬板（含10％石膏的硅胶板）。（3）展开剂：氯仿一甲醇（10：1）。

（4）显色：喷50％硫酸水溶液，于105℃烤10分钟。

样品可呈现与标准品Rf值相同的一些斑点，其中主要有三个斑点，Rf值由小到太，顺次为黄甲次苷甲、黄甲次苷乙、单乙酰黄甲次苷乙。以黄夹次苷乙含量最高，在黄夹次苷甲和黄夹次苷乙之间，黄夹次苷乙和单乙酰黄夹次苷乙之间允许各有一个小而弱的强心苷斑点，靠近原点处，有时可出现另一个颜色极浅的斑点，除此之外，不应出现其它斑点。

四、思考题

1、本实验中进行酶解时应注意些什么问题？为什么要加甲苯？ 2、纸层析展后，为什么要于120℃烤1小时？

3、分析纸层析和薄层层析结果，哪个成分的Rf值应大？哪个成分的Rf值应小？为什么？

实验七薯蓣皂苷元的提取分离和鉴定

薯蓣皂苷属27碳甾体皂苷，水解后可得薯蓣皂苷元，薯蓣皂苷元因为是合成甾体激素类药物的主要原料而受到重视。

薯蓣皂苷主要存在于薯蓣科（Dioscoreaceae）植物中，我国薯蓣科植物有80多种，多数分布长江以南省区，其中可作为原料药的有12种3变种，均为薯蓣属根状茎组（Dioscorea，Sect. Stenophora）植物，重要的有盾叶薯蓣（D. zingiberensis）、黄山药（D. panthaica）、穿山龙（D. nipponica）等。本实验采用穿山龙为原料提取薯蓣皂苷元。

穿山龙含多种甾体皂苷，其中薯蓣皂苷含量最高。这些皂苷水解后大多能生成薯蓣皂苷元，暮蓣皂苷元含量约2％。

主要化学成分的结构及性质 1、薯芋皂苷元（Diosgenin）（1）：白色针状结晶(乙醇)，mp.204~207℃。可溶于一般有机溶剂，不溶于水。

2、薯蓣皂苷（Dioscin）（2）：白色针状结晶或粉末状（乙醇），mp.275~ 280℃。可溶于甲醇、乙醇，难溶于乙醚等低极性有机溶剂，不溶于水。

OOR12Hglu2611rharhaRO

一、实验目的要求

1、掌握从穿山龙中提取分离薯蓣皂苷元的原理和方法。 2、学习薯蓣皂苷元的鉴定方法。

二、实验原理

穿山龙中所含甾体皂苷经水解处理，裂解产物主要为薯蓣皂苷元和单糖等，利用薯蓣皂苷元不溶于水，可溶于有机溶剂的性质可将其用有机溶剂提取分离。

三、实验方法

（—）发酵和水解

将切成薄碎片的穿山龙生药50g置于500ml锥形瓶中，加水约l00ml，浸泡12小时后置于40℃恒温水浴中自然发酵48小时。然后加入150ml水和20ml浓硫酸摇匀，小火加热保持微沸水解约2小时。倾出酸液，用10％氢氧化钠溶液将药渣搅匀洗至中性，再用水充

检查挥发油、油脂、萜类、甾体化合物等成分用。

（二）各类成分的检查

1、检查生物碱类

取上述酸性乙醇提取液先用稀氨水调至中性，再于水浴上蒸干，残渣加5%硫酸5ml溶解后，过滤，滤液供以下实验用。

（1）碘化铋钾试验：取滤液1ml，加入碘化铋钾试剂1～2滴，如有桔红色沉淀产生，即表示可能有生物碱。

（2）碘化汞钾试验：取滤液1ml，加入碘化汞钾试剂1～2滴，如有浅黄色或白色沉淀产生，即表示可能有生物碱。

（3）硅钨酸试验：取滤液1ml，加入硅钨酸试剂1～2滴，如有浅黄色或灰白色沉淀产生，即表示可能有生物碱。

2、检查氨基酸、多肽和蛋白质类

（1）加热沉淀试验：取冷水浸液1ml，加热煮沸，如产生浑浊或沉淀，即表示可能有蛋白质。

（2）双缩脲试验：取冷水浸液1ml，加入10%氢氧化钠水溶液2滴，摇匀，再滴加0.5%硫酸铜水溶液1～滴，摇匀，如显红色、红紫色或紫色，即表示可能有多肽、蛋白质。（3）茚三酮试验：取冷水浸液1ml，加入0.2%茚三酮乙醇溶液2～3滴，摇匀，于沸水浴中加热5分钟，冷却后，如显蓝色或蓝紫色，即表示可能有氨基酸、多肽、蛋白质。

（4）吲哚醌试验：取冷水浸液滴于滤纸片上，干燥后，喷洒吲哚醌试剂，于120℃加热5分钟，若斑点显各种颜色，即表示可能有氨基酸。 3、检查还原糖、多糖和苷类

（1）菲林反应：取热水提取液1ml，加入新配制的菲林试剂4～5滴，在沸水浴上加热5分钟，如产生砖红色沉淀，即表示有还原糖或其它还原性物质。若现象不明显，可另取热水提取液4ml，加入10%盐酸1ml于水浴上加热10分钟使其水解，冷却后，若有沉淀应过滤，然后加入5%氢氧化钠水溶液调至中性，再加菲林试剂1ml，于沸水浴上加热5分钟，如产生砖红色沉淀，即表示可能有多糖或苷类。

（2）α-萘酚试验：取热水提取液1ml，加入5%α-萘酚乙醇液2～3滴，摇匀，沿试管壁缓缓加入浓硫酸1ml，如在试液与硫酸的交界面产生紫色或紫红色环，即表示有糖类、多糖或苷类。

（3）多糖的试验：取热水提取液5ml，于水浴上蒸发至1ml，再加95%乙醇5ml，若产生沉淀，过滤，用少量乙醇洗涤沉淀，再将沉淀溶于3ml水中，加入10%盐酸1ml，在水浴上加热10分钟使其水解，冷却后，加5%氢氧化钠水溶液调至中性，然后加入菲林试剂1ml，于沸水浴上加热5分钟，如产生砖红色沉淀，即表示有多糖。 4、检查皂苷类

（1）泡沫试验：取热水提取液1～2ml置于试管中，密塞，激烈振摇2分钟，如产生大量持续性泡沫，且放置10分钟以上，或加热，或加入乙醇泡沫均无明显地减少，即表示可能有皂苷。

（2）醋酐-浓硫酸反应：取热水提取液2ml，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加冰醋酸1ml溶解，再加醋酐1ml，浓硫酸1滴，如反应液颜色由黄→红→紫→蓝→污绿色，即表示可能有甾体皂苷，如反应液颜色由黄→红色不呈污绿色，即表示可能有三萜皂苷。（3）溶血试验：取热水提取液滴于滤纸片上，等干燥后，喷洒红细胞悬浮液，数分钟后，在红色背景中如出现白色或淡黄色斑点，即表示可能有皂苷。

5、检查有机酸类

（1）pH试纸试验：取热水提取液及乙醇提取液，分别用pH试纸检查其pH值，如呈酸

性，即表示可能有游离羧酸或酚性化合物。

（2）溴酚蓝试验：取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒0.1%溴酚蓝的70%乙酸溶液，如在蓝色背景上显黄色斑点，即表示可能有有机酸。若斑点不明显，可再喷洒氨水，然后暴露在盐酸蒸气中，背景逐渐由蓝色变黄色，而有机酸斑点仍显蓝色。溴酚蓝变色范围是：3.0（黄色）～4.6（紫色）。

（3）溴甲酚绿试验：取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒0.04%溴甲酚绿乙醇溶液，如蓝色背景上显黄色斑点，即表示可能有有机酸。溴甲酚绿变色范围是：3.8（黄色）～5.4（蓝色）。

6、检查酚类化合物和鞣质类

（1）三氯化铁试验：取热水提取液及乙醇提取液各1ml，（若提取液为酸性，可直接进行检查，若为碱性应先加醋酸酸化），加1%三氯化铁试剂1～2滴，如反应液呈绿色、蓝绿色、墨绿色、蓝紫色，即表示可能有酚类化合物或鞣质。

（2）三氯化铁—铁氰化钾反应：取热水提取液及乙醇提取液分别滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒三氯化铁—铁氰化钾试剂，如斑点呈蓝色，即表示可能有酚类、鞣质或还原性化合物。

（3）香草醛—盐酸反应：取热水提取液及乙醇提取液分别滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒香草醛—盐酸试剂，如斑点呈不同程度的红色，即表示有间苯二酚和间苯三酚化合物。（4）明胶试验：取热水提取液1ml，加入氯化钠—明胶试剂2～3滴，如有沉淀产生，即表示可能有鞣质。

7、检查甾体及三萜类化合物

（1）醋酐-浓硫酸反应：取乙醇提取液2ml，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加冰醋酸1ml溶解，再加醋酐1ml，然后滴加浓硫酸1滴，如反应液颜色由黄→红→紫→蓝→污绿色，即表示可能有甾体化合物，如反应液颜色仅由黄→红→紫红色，即表示可能有三萜类化合物。

（2）氯仿-浓硫酸反应：取乙醇提取液2ml，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加氯仿1ml溶解，并转移至小试管中，沿管壁加入浓硫酸1ml，如氯仿层显红色或青色，硫酸层于紫外光灯下观察有绿色荧光，即表示可能有甾体化合物。

8、检查黄酮类化合物

（1）盐酸—镁粉反应：取乙醇提取液1ml，加入镁粉少许，再加入浓盐酸2～3滴（必要时水浴加热），如反应液或产生的泡沫显红～紫红色，即表示可能有黄酮类化合物。（2）三氯化铝反应：取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒1%三氯化铝乙醇溶液，如斑点呈黄色，于紫外灯下检视呈明显的黄色或黄绿色荧光，即表示可能有黄酮类化合物。

（3）氨熏试验：取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，置于浓氨水瓶上熏半分钟，如斑点显黄色或黄色加深，当滤纸片离开氨蒸气数分钟后，黄色减弱或消退；另将氨熏后的滤纸置于紫外光灯下检视，斑点呈黄色荧光，即表示可能有黄酮类化合物。

9、检查内酯、香豆素及其苷类

（1）荧光试验：取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，于紫外灯下检视，如斑点呈蓝色荧光，喷洒1％氢氧化钾试剂后斑点有荧光颜色转变为黄绿色，即表示可能有香豆素及其苷类。

（2）重氮化反应：取乙醇提取液1ml，加3％碳酸钠水溶液1ml于沸水浴上加热3分钟，冷却后，加人新配制的重氮化试剂1～2滴，如显红色，即表示可能有香豆素及其苷类。（3）异羟肟酸铁反应：取乙醇提取澈1m1，加7％盐酸羟胺甲醇液3～5滴和10%氢氧化钾甲醇液10滴，于水浴上加热至反应开始（有气泡产生），冷却，再加人5％盐酸使成弱酸

性，加1％三氯化铁水溶液5滴，如反应液有橙红色或紫红色出现，即表示可能有酯类、内酯类、香豆素及其苷类。 10、检查强心苷类

（1）3，5一二硝基苯甲酸反应(Kedde反应)：取乙醇提取液1m1，加3，5一二硝基苯甲酸试剂3～4滴，如反应液呈红色或紫色，即表示可能有强心苷。

（2）碱性苦味酸反应(Baljet反应)：取乙醇提取液1ml，加碱性苦味酸试剂1～2滴，如反应液呈橙色或红色，即表示可能有强心苷。（3）亚硝酰铁氰化钠反应（Legal反应）：取乙醇提取液1ml，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加吡啶1ml溶解，再加0.3%亚硝酰铁氰化钠溶液4～5滴，混匀，再加入氧氧化钠溶液1～2滴，混匀，如反应液呈红色，且颜色又逐渐消退，即表示可能有强心苷。 11、检查蒽醌类

（1）碱液试验(Borntrager反应)：取乙醇提取液lml，加入10％氢氧化钠水溶液1ml，如反应液呈红色，再加30％过氧化氢5滴，加热后，红色不消退，用5％盐酸酸化后，如红色消退，即表示有蒽醌及其苷类。（2）醋酸镁反应：取乙醇提取液1ml，加1％醋酸镁甲醇溶液1～2滴，如反应液呈红色，即表示有蒽醌及其苷类。

（3）硼酸溶液试验：取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒1%硼酸水溶液，如斑点呈橙黄色或红色，且于紫外灯下检视有荧光，即表示有蒽醌及其苷类。 12、检查挥发油、油脂类

（1）油斑试验：取石油醚提取液滴于滤纸片上，如油斑在室温下可挥发不留痕迹，即表示可能有挥发油；如油斑不消失，即表示有油脂类。

（2）磷钼酸试验：取石油醚提取液滴于滤纸片上，喷洒25%磷钼酸乙醇液，115～118℃加热2分钟，如斑点呈蓝色，背景为黄绿色或藏青色，即表示有油脂、三萜及甾醇类。（3）香草醛—硫酸试验：取石油醚提取液滴于滤纸片上，喷洒香草醛—6%硫酸试剂，如斑点呈红、蓝、紫等各种颜色，即表示可能有挥发油、萜类和甾醇类。（三）圆型滤纸层析法

取一张圆型滤纸，在距圆心1.0～1.5cm周围用毛细管点加样品，一张滤纸可同时点6～8个样品，待点样溶剂挥发后，在滤纸圆心处穿入一滤纸芯，然后放在合适的培养皿中，使纸芯与培养皿中的展开剂接触，于圆型滤纸上加盖培养皿盖，进行层析。当溶剂前沿接近培养皿边缘时，取出滤纸，挥干溶剂后显色，根据样品斑点颜色，可确定样品中的成分。

1、检查有机酸类展开剂：95%乙醇样品：① 热水提取液 ② 乙醇提取液

③ 柠檬酸乙醇溶液（对照品）

显色剂：0.1%溴酚蓝试剂，有机酸斑点呈黄色。 2、检查挥发油类展开剂：95%乙醇样品：① 乙醇提取液 ② 石油醚提取液显色剂：先观察滤纸上有无油迹斑点，如有油迹斑点，可将滤纸加温烘烤，若油斑消失，则表示有挥发油存在。

（四）各类成分的层析检查

中药化学成分的预试验除用上述的定性反应外，还可用层析法进行，它不仅可以减少

成分间的相互干扰，展析结果容易判断，还可以根据层析所用的条件加展开剂的组成，层析种类以及色斑的比较值（Rf值），初步判断样品中所含化学成分的极性大小和溶解性能，甚至可以通过和标准样品对照，初步确定样品中含有何种化合物。

用层析法预试各类化学成分的参考层析条件如下： 1、生物碱类：

（1）氧化铝层析（中性、碱性）展开剂：氯仿—甲醇（9:1）苯—乙醇（8:2）显色剂：改良碘化铋钾试剂（2）硅胶G层析

展开剂：环己烷—二乙胺（9:1）

氯仿—丙酮—二乙胺（5:4:1）

二甲苯—正丁醇—甲醇—二乙胺（40:40:6:2）显色剂：改良碘化铋钾试剂 2、氨基酸类（1）纸层析

移动相：正丁醇—醋酸—水（4:1:5）上层显色剂：茚三酮试剂（2）硅胶G层析