水稻的植物组培的Microsoft Word 文档
更新时间:2023-12-14 22:35:01 阅读量: 教育文库 文档下载
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水稻的植物组培
姓名:侯小龙
班级:生科09104
学号4
指导老师:席在星
水稻的植物组培实验报告
班级:生科09104 学号:4 姓名:侯小龙
实验目的:
1.使学生了解植物组织培养中常用的洗涤技术和灭菌方法;掌握培常用用具(如玻璃器皿、剪刀、镊子等)的洗涤技术和灭菌方法及注意事项,为后续实验做准备。
2.学习培养基配制与灭菌方法。
3.学习和掌握植物外植体表面消毒的常规方法。 4.学习诱导植物器官外植体形成愈伤组织的方法
5.了解愈伤组织继代培养的基本原理,学习愈伤组织继代培养的方法。 6.了解愈伤组织再分化原理,学习愈伤组织生根培养的方法。
实验原理:
离体的植物细胞具有其个体的全套的遗传物质,在一定的条件下可以再次脱分化,再分形成心的植株的能力,这就是植物细胞的全能性。因此只要给定水稻种子适宜的条件,我们可以诱导其胚状体再次分化,形成愈伤组织,一团无色的包庇细胞。这种细胞分裂的能力旺盛,再把这写愈伤组织扩大培养,经原代培元,继代培养,生根培养,最后可以形成一个完整 实验器材:
材料:高压蒸气灭菌锅 实验所需的各种玻璃器皿金属用品及塑料用品 超净工作台 电子天平 冰箱 pH试纸 烧杯 量筒 试剂瓶 三角瓶 洗耳球 刻度吸管 洗瓶 台秤(感量0.2~0.5g) 烧杯(300mL、500mL) 量筒(500Ml、50mL) 三角瓶(50mL)、移液管 玻璃漏斗 玻璃棒 玻璃铅笔 pH值试纸 洗耳球 线绳 包头纸 石棉网 洗瓶 无菌纸 一次性手套 酒精灯 标签纸 记号笔 超净工作台 烧杯 镊子 剪刀 解剖刀 试剂:MS培养基大量元素母液 微量元素母液 铁盐母液 维生素(有机元素)母液 蔗糖 琼脂 2-4,D NAA 甘露醇 KOH 6-BA 酒精 bleach试剂
实验内容:
1. MS培养基的配制
2. 水稻种子的消毒与原代培养 3. 水稻种子的继代培养 4. 水稻的生根培养 实验步骤:
1. MS培养基的配制
本次试验每2人一组,每3组一大组,每大组配制1000ML MS培养基。并进行消毒。 保证下一次实验每一学生有2瓶培养基供接种用。
(1) 首先洗净盛装培养基的容器,烘干或自然晾干;
(2) 按照下面公式,计算需配制培养基的量,然后根据各种母液扩大的倍数,计算从母液中吸取的毫升量。
吸取量(mL)=[需要配制培养基的体积(mL)×需要配制浓度(mg/L)]/母液浓度(mg/L) 如配1000 mL加入2 mg/L 2, 4-D和1 mg/L 6-BA的MS培养基,计算从各种已配制的母液中吸取的毫升量(表1)。
表l 从MS培养基母液配制培养基
母液名称 大量元素 微量元素 铁元素 有机元素 2, 4-D
(3) 用1个100 mL烧杯,分别从各种母液吸取用量,加入蔗糖15g。
(4) 称取琼脂8 g,置于1个1000 mL烧杯中,加蒸馏水100 mL,在电炉上加热溶解。 (5) 将1000 mL的琼脂溶化液和100 mL培养基成分充分混合,定容至500 mL,1N KaOH l将pH值调至6.3,以60mL/瓶分装至250 mL广口瓶中。 (6) 封好瓶,在包头纸上写明培养基代号,扎好线绳。 2.培养基的灭菌
高压蒸汽灭菌法:把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等,放入高压灭菌锅的消毒桶内,将外层锅内加水,水位高度不超过支柱高度。盖好锅盖,上好螺丝。加热后,锅上压力表指针开始移动,当指针移至0.5 kg/cm2时,扭开放气阀门排除冷空气,使压力表指针回复零位,关好放气阀门继续加热。当指针移至1.1~1.2 kg/cm2时,将火调小,保持该压力15~20 min(在122~124℃下保持15~20 min),即可达到消毒目的
2. 植物外植体消毒和接种与原代培养 (1).外植体的灭菌 首先将水稻种子去壳,用30%氯化汞灭菌15 min,再用无菌水清洗5次,每次清洗时间3分钟 。 (2).接种前 用75%乙醇棉球溶液檫拭超净工作台台面,将培养基及用具放人工作台,开超净工作台紫外灯照射20 min,然后开送风开关,之后关闭紫外灯,通风10 min后,再开日光灯进行无菌操作。 (3).接种 将吸足的水稻种子先用无菌水洗涤3次,无菌纸吸干水分。取出培养皿,剪刀和镊子使用前插入75 %乙醇溶液中,使用镊子时在酒精灯火焰上炽烧片刻,冷却后,取种子接种于培养基上。以上操作都要将培养瓶(或培养皿)靠近火焰旁。 (4).将培养容器斜面向上,并使它们位于水平位置,也可将培养容器放在左手中。将塞盖
母液浓度(mg/L) 1000 母液扩大倍数 10 100 100 50 1000mL培养基吸取量(mL) 100 10 10 20 2 用右手拧转松动,以便接种时拔出。用火焰灼烧管口,灼烧时应不断转动试管口(靠手腕的动作,使试管口沾染的少量菌得以烧死)(图1)。
将烧过的接种针(环)触动培养基部分,使其冷却,以免烧死被接种的外植体,然后轻轻接触外植体,慢慢将接种针(环)抽出试管,打开培养容器盖,将外植体放在培养基上,每瓶放3块。封口,贴标签,注明姓名,标明时间和材料名称。整理好接种室(箱)的台面,搞好清洁卫生。
培养3天后观察瓶中是否有霉菌产生,若有霉菌,应当重新接种,如果没有霉菌,可以继续培养。我的培养基没有长霉菌,所以继续培养,再培养4天后,观察到乳白色的一小团细胞,生长在种子的胚状体附近,即为愈伤组织。如下图所示:
愈伤组织
3. 愈伤组织的继代培养: (1).按照培养材料的要求,配制继代培养基。
(2).培养基和接种工具消毒,准备无菌水和无菌纸。 (3).在酒精灯旁,小心从愈伤组织容器瓶中取出愈伤组织块,放到灭菌的培养皿中,用刀片切成直径约0.5cm大的小块,并接种到继代培养基中,盖盖后写上接种日期、外植体名称和培养基成分。 (4).在培养室中培养,5天后观察愈伤组生长情况。以后每隔3天观察一次,并拍照记录。
继代的愈伤组织如图所示:
愈伤组织
继代培养过程中,要注意光照的时间长度,以及注意在切除根尖和胚乳时不要切坏愈伤组织,以免加剧愈伤组织的褐化。对于褐化面积较大的愈伤组织,要及时停止培养, 并时时注意培养瓶中的霉菌的生长过程。
4. 生根培养
1.按照培养材料的要求,分别配制诱导伤组织生芽培养基或生根培养基。 2.培养基和接种工具消毒,准备无菌水和无菌纸。
3.在酒精灯旁,小心从愈伤组织容器瓶中,选出愈伤组织3~5块,放置到分化培养基中,盖盖后写上接种日期、外植体名称和培养基成分。 4.在培养室中培养,2周后统计愈伤组分化情况。
时间还没,没有获取实验结果。
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