水稻的植物组培的Microsoft Word 文档

水稻的植物组培

姓名：侯小龙

班级：生科09104

学号4

指导老师：席在星

水稻的植物组培实验报告

班级：生科09104 学号：4 姓名：侯小龙

实验目的：

1.使学生了解植物组织培养中常用的洗涤技术和灭菌方法；掌握培常用用具（如玻璃器皿、剪刀、镊子等）的洗涤技术和灭菌方法及注意事项，为后续实验做准备。

2.学习培养基配制与灭菌方法。

3.学习和掌握植物外植体表面消毒的常规方法。 4.学习诱导植物器官外植体形成愈伤组织的方法

5.了解愈伤组织继代培养的基本原理，学习愈伤组织继代培养的方法。 6.了解愈伤组织再分化原理，学习愈伤组织生根培养的方法。

实验原理：

离体的植物细胞具有其个体的全套的遗传物质，在一定的条件下可以再次脱分化，再分形成心的植株的能力，这就是植物细胞的全能性。因此只要给定水稻种子适宜的条件，我们可以诱导其胚状体再次分化，形成愈伤组织，一团无色的包庇细胞。这种细胞分裂的能力旺盛，再把这写愈伤组织扩大培养，经原代培元，继代培养，生根培养，最后可以形成一个完整 实验器材：

材料：高压蒸气灭菌锅 实验所需的各种玻璃器皿金属用品及塑料用品 超净工作台 电子天平 冰箱 pH试纸 烧杯 量筒 试剂瓶 三角瓶 洗耳球 刻度吸管 洗瓶 台秤（感量0.2~0.5g） 烧杯（300mL、500mL） 量筒（500Ml、50mL） 三角瓶（50mL）、移液管 玻璃漏斗 玻璃棒 玻璃铅笔 pH值试纸 洗耳球 线绳 包头纸 石棉网 洗瓶 无菌纸 一次性手套 酒精灯 标签纸 记号笔 超净工作台 烧杯 镊子 剪刀 解剖刀 试剂：MS培养基大量元素母液 微量元素母液 铁盐母液 维生素（有机元素）母液 蔗糖 琼脂 2-4,D NAA 甘露醇 KOH 6-BA 酒精 bleach试剂

实验内容：

1. MS培养基的配制

2. 水稻种子的消毒与原代培养 3. 水稻种子的继代培养 4. 水稻的生根培养 实验步骤：

1. MS培养基的配制

本次试验每2人一组，每3组一大组，每大组配制1000ML MS培养基。并进行消毒。 保证下一次实验每一学生有2瓶培养基供接种用。

(1) 首先洗净盛装培养基的容器，烘干或自然晾干；

(2) 按照下面公式，计算需配制培养基的量，然后根据各种母液扩大的倍数，计算从母液中吸取的毫升量。

吸取量(mL)=[需要配制培养基的体积(mL)×需要配制浓度(mg／L)]／母液浓度(mg／L) 如配1000 mL加入2 mg／L 2, 4-D和1 mg／L 6-BA的MS培养基，计算从各种已配制的母液中吸取的毫升量(表1)。

表l 从MS培养基母液配制培养基

母液名称 大量元素 微量元素 铁元素 有机元素 2, 4-D

(3) 用1个100 mL烧杯，分别从各种母液吸取用量，加入蔗糖15g。

(4) 称取琼脂8 g，置于1个1000 mL烧杯中，加蒸馏水100 mL，在电炉上加热溶解。 (5) 将1000 mL的琼脂溶化液和100 mL培养基成分充分混合，定容至500 mL，1N KaOH l将pH值调至6.3，以60mL／瓶分装至250 mL广口瓶中。 (6) 封好瓶，在包头纸上写明培养基代号，扎好线绳。 2．培养基的灭菌

高压蒸汽灭菌法：把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒桶内，将外层锅内加水，水位高度不超过支柱高度。盖好锅盖，上好螺丝。加热后，锅上压力表指针开始移动，当指针移至0.5 kg/cm2时，扭开放气阀门排除冷空气，使压力表指针回复零位，关好放气阀门继续加热。当指针移至1.1~1.2 kg/cm2时，将火调小，保持该压力15~20 min（在122~124℃下保持15~20 min），即可达到消毒目的

2. 植物外植体消毒和接种与原代培养 （1）．外植体的灭菌 首先将水稻种子去壳，用30%氯化汞灭菌15 min，再用无菌水清洗5次，每次清洗时间3分钟 。 （2）．接种前 用75％乙醇棉球溶液檫拭超净工作台台面，将培养基及用具放人工作台，开超净工作台紫外灯照射20 min，然后开送风开关，之后关闭紫外灯，通风10 min后，再开日光灯进行无菌操作。 （3）．接种 将吸足的水稻种子先用无菌水洗涤3次，无菌纸吸干水分。取出培养皿，剪刀和镊子使用前插入75 ％乙醇溶液中，使用镊子时在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷却后，取种子接种于培养基上。以上操作都要将培养瓶（或培养皿）靠近火焰旁。 （4）．将培养容器斜面向上，并使它们位于水平位置，也可将培养容器放在左手中。将塞盖

母液浓度(mg/L) 1000 母液扩大倍数 10 100 100 50 1000mL培养基吸取量(mL) 100 10 10 20 2 用右手拧转松动，以便接种时拔出。用火焰灼烧管口，灼烧时应不断转动试管口(靠手腕的动作，使试管口沾染的少量菌得以烧死)(图1)。

将烧过的接种针(环)触动培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种的外植体，然后轻轻接触外植体，慢慢将接种针(环)抽出试管，打开培养容器盖，将外植体放在培养基上，每瓶放3块。封口，贴标签，注明姓名，标明时间和材料名称。整理好接种室(箱)的台面，搞好清洁卫生。

培养3天后观察瓶中是否有霉菌产生，若有霉菌，应当重新接种，如果没有霉菌，可以继续培养。我的培养基没有长霉菌，所以继续培养，再培养4天后，观察到乳白色的一小团细胞，生长在种子的胚状体附近，即为愈伤组织。如下图所示：

愈伤组织

3. 愈伤组织的继代培养： （1）．按照培养材料的要求，配制继代培养基。

（2）．培养基和接种工具消毒，准备无菌水和无菌纸。 （3）．在酒精灯旁，小心从愈伤组织容器瓶中取出愈伤组织块，放到灭菌的培养皿中，用刀片切成直径约0.5cm大的小块，并接种到继代培养基中，盖盖后写上接种日期、外植体名称和培养基成分。 （4）．在培养室中培养，5天后观察愈伤组生长情况。以后每隔3天观察一次，并拍照记录。

继代的愈伤组织如图所示：

愈伤组织

继代培养过程中，要注意光照的时间长度，以及注意在切除根尖和胚乳时不要切坏愈伤组织，以免加剧愈伤组织的褐化。对于褐化面积较大的愈伤组织，要及时停止培养， 并时时注意培养瓶中的霉菌的生长过程。

4. 生根培养

1．按照培养材料的要求，分别配制诱导伤组织生芽培养基或生根培养基。 2．培养基和接种工具消毒，准备无菌水和无菌纸。

3．在酒精灯旁，小心从愈伤组织容器瓶中，选出愈伤组织3～5块，放置到分化培养基中，盖盖后写上接种日期、外植体名称和培养基成分。 4．在培养室中培养，2周后统计愈伤组分化情况。

时间还没，没有获取实验结果。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/pem5.html