实验三 凝胶过滤法分离高铁血红蛋白
更新时间:2023-08-27 04:14:01 阅读量: 教育文库 文档下载
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实验三 凝胶过滤法分离高铁血红蛋白
原理凝胶过滤,又称分子筛层析 凝胶过滤,又称分子筛层析 凝胶柱中所装填料为多孔状颗粒, 凝胶柱中所装填料为多孔状颗粒,如葡聚 柱中所装填料为多孔状颗粒 糖凝胶 (Sephadex),可用来分离蛋白质 (Sephadex),可用来分离蛋白质 过量K 过量K3Fe(CN)6 + Hb K3Fe(CN)6 + MetHb
分离原理葡聚糖 凝胶
小分子物质 大分子蛋白质
凝胶过滤法分离蛋白质a: 大球是葡聚糖凝胶颗粒 b: 样品上柱后小分子进入凝胶微孔, 样品上柱后小分子进入凝胶微孔, 大分子不能进入故先洗脱出来 c: 小分子则后洗脱出来
注意事项1. 装柱后要检查柱床是否均匀,若有气 装柱后要检查柱床是否均匀, 泡或分层的界面时, 泡或分层的界面时,需要重新装柱 2. 上样时一定要靠近凝胶柱表面、沿柱 上样时一定要靠近凝胶柱表面、 内壁缓缓滴加, 内壁缓缓滴加,不能冲击凝胶柱表面
防止 干胶 气泡12cm
分层
太少 太短7cm
注意事项3. 洗脱时流速不可太快 4. 尽量保持各管收集的液量一致 5. 洗脱过程中要防止凝胶柱液体流干 洗脱过程中要防止凝胶柱 凝胶柱液体流干 6. 洗脱完成后的凝胶要回收,勿丢弃 洗脱完成后的凝胶要回收,
吸光度
2.500 2.000 1.500 1.000 0.500 0.000 -0.500 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 管号 凝胶过滤法分离高铁血红蛋白洗脱曲线
思考题若洗脱图谱只出现一个峰, 若洗脱图谱只出现一个峰,试分析可能 的原因。 的原因。
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