高效液相色谱分析方法在食品安全检测中的应用

高效液相色谱分析方法在食 品安全检测中的应用——由青岛“问题西瓜”事件的产生的思考

小组成员：潘子洲、林佳铭、李建聪、 莫如栩、倪铭阳、简丽祥2015年4月21日

新闻原稿近日，山东即墨市、胶州市有市民食用西瓜后出现呕 吐头晕症状，甚至造成一名孕妇胎儿不保。经青岛食 药监部门调查，西瓜来源系海南万宁出产的冰糖黑美 人西瓜，初步判定为“涕灭威”残留超标，该批次 西瓜已销毁。据悉，“涕灭威”为高毒农药，已明令 不得用于蔬果种植。高毒农药具有强渗透性，如果非 法使用，即使西瓜有一层瓜皮保护，也可能农药残留 超标甚至食用后中毒。

涕灭威-概述： 英文名称：Aldicarb;Temek;Carbanolate 化学名称：O-甲基氨基甲酰基-2-甲基-2-甲硫基丙肟 其他名称：铁灭克(Temik);丁醛肟威；神农丹 分子式：C7H14N2O2S 分子量：190.27 结构式：

外观与性状：有硫磺 味的白色结晶 熔点：100℃ 密度：1.195(25/20℃) 蒸汽压：25℃ 溶解性：室温下，水中溶解度为6000ppm(0.6%),几乎 不溶于乙烷，而溶于大多数有机溶剂，如丙酮400g/L,氯仿 350g/L,甲苯100g/L(20℃)

稳定性：不易燃，除遇强碱外，本品稳定，对金属容器、设备无腐蚀性

用途：用作农用杀虫剂 急性毒性：LD501mg/kg(大鼠经口);5mg/kg(小鼠经皮);0.3mg/kg (小鼠经口)大白鼠在200mg/m3 浓度下，5分钟后全部死亡。 危险特性：遇明火、高热可燃。受高热分解，放出有毒的烟气。 侵入途径：吸入、食入、经皮吸收。 健康危害：本品为高毒杀虫剂，其毒性是呋喃丹的10倍，是目前(截至 2013年)最毒的农药品种之一。吸入、摄入或经皮肤吸收后会中毒。1985 年，美国曾有150多人因吃受污染的西瓜而中毒。本品有致突变作用。涕灭威系氨基甲酸酯类农药 ，主要代谢物涕灭威亚砜和涕灭威砜具有很高的水溶 性和毒性 。 目前 ,涕灭威在蔬菜上的残留检测方法多 是采用 气相色谱法 ( GC) , 但由 于缺乏热稳定性 ,在对其进行 GC 测定时 ,可能会造成分解 ,且缺乏灵敏度 高的选择性检测器 。 所以对涕灭威及其代谢物的检测将采用高效液相色谱 -荧 光检测 ,定性定量地分析蔬菜中 涕灭威及其代谢物。高效液相色谱法的具有高压、高速、高效、高灵敏度等优点，对于高沸点，热 稳定性差，相对分子质量大的有机物原则上都可做到很好的分离分析。

高效液相色谱的主要类型：1、液-液分配色谱法及化学键合相色谱

2、液-固色谱法3、离子对色谱法 4、离子交换色谱法 5、离子色谱法 6空间排阻色谱法 液-固色谱法：液-固色谱法适用于分离相对

分子质量中等的油溶性试样， 对具有不同官能团的化合物和异构体有较高的选择性。 流动相为液体，固定相为吸附剂。根据物质的吸附作用的 不同来进行分离。

高效液相色谱的结构示意图

荧光检测器荧光检测器是一种很灵敏个选择性好的检测器。许 多物质，特别是具有对称共轭结构的有机芳环分子 受紫外光激发后，能辐射出比紫外光波长较长的荧 光。荧光检测器的结构及工作原理个荧光光度计和 荧光分光光度计相似。

特点选择性高，只对荧光物质有响应；灵敏度也高，最 低检出限可达10-12ug/ml,适合于多环芳烃及各种 荧光物质的痕量分析。也可用于检测不发荧光但经 化学反应后可发荧光的物质。如在酚类分析中，多 数酚类不发荧光，为此先经处理使其变为荧光物质， 而后进行分析。

应用实例：参考文献：【1】赵平娟 ,邓立刚 ,赵善仓 ,谷晓红 ,李增梅 ,郭长 英，高效液相色谱法检测黄瓜中涕灭威及其代谢物的残留量，第3期， 2007年，104~105页

摘要：建立了 测定黄瓜中涕灭威及其代谢物残留量的高效液相色谱 —荧光检测 方法 。 样品 经乙 腈提取 ,固相萃取柱净化 ,用 流动 相 溶解后 ,柱后 衍生化 ,用 高效液相 色谱 —荧光检测 器在激发波 长 (ex) 为339nm、发射波长 为 445 nm 处测定 。 结果在 0.01 ~ 0.5 mg/ kg 添加水平 ,回 收率为 83.1 %~ 89.6 % ,相对标准偏差为 21.3%~41.9 % ,其检出限为 0.005 mg/ kg 。

黄瓜中涕灭威及其代谢物的残留量的测定——液-固色谱法 固定相：硅胶微粒(全多孔型，5 μ m ) 色谱柱：Atlantis TM dC1 8 不锈 钢 柱 (319 mm×150 mm) 流动相：甲 醇 、水和乙腈 流速：0.5 mL/ min 柱温：30℃ 柱后反应器温度：80℃ 0. 05 mol/ L NaO H 溶 液 流 速 : 0.5m L/ min 邻苯二甲醛衍生试剂流速: 0. 5 mL/ min 检测器：荧光检测器 检测波长： 激发波长: 339 nm ,发射波长: 445 nm 进样量 : 1 0 μL

在上述色谱条件下 ,涕灭威亚砜 、涕灭威砜和涕灭 威的保留时间分别为 3.3 、4.2 、9.7 min

结果与分析2.1、色谱稳定性涕灭威用气相色谱检测存在因气谱分解导致检测结果不稳定 的问题 。 而用高效液相色谱柱后衍生系统 - 荧光检测器检 测时 ,衍生较好 ,待测成分稳定 ,重现性好 。

2.2、高灵敏度

由于荧光检测器具有对荧光物质 的选择性 ,使得样本中涕灭 威出峰无杂质干扰 ,分离度较好 ,提高了方法的灵敏度 ,保证 了 分析样品的准确性 ;同时 ,样品通过固相萃取柱的净化 ,有 效去除了 一些极性高的强荧光物质 ,保护了 检测器和色谱 柱 ,延长了其使用寿命 。

2.3、线性范围及检出限

以配制好的 0.05 、0.5 、1 、5 、1 0 、20 μ g/ mL系列标准溶液 ,分 别进样 1 0 μL,平

行测 定 3 次 。 结果表明 ,在质量浓度为 0.05~20 μ g/ mL时峰面积Y (μ V · s) 与其质 量浓度 ( X ,μ g/ mL) 有良好的线性关 系 ,涕灭威亚砜 、涕灭威砜 、涕灭威的线性回归方程分别为 Y = - 155676.8 + 506528.7 X , r =0.9998 Y = - 84969.2 + 687270.8 X , r = 0.9984 Y = - 222992.5 + 553525.2 X , r = 0.9996 最低检出限为 0.005 mg/ kg 。

2.5、结论(文献)本文介绍了 测定涕灭威及其代谢物的高 效液相色谱 —荧光检测方法 ,该方法样 品 前处理比较简单 ,准确 度 、精密 度 比 较好 。由 于 荧 光的 选择性 ,确保 了方法的准确性 ,同时具有高灵敏度 ,完 全适用于日 常的检测工作 ,可以 应付突 发的涕灭威中毒事件的判定 。

小结随着当代农产业的高速发展，涕灭威农药被 广泛滥用。涕灭威在土壤中微生物的作用容易转 化为涕灭威亚砜及涕灭威砜，这三者的在酸性及 中性的水介质中较为稳定，在碱性条件下易于分 解。在一般的地下水的环境中(pH=7,温度 =15℃),这三者的半衰期分别长达4、0.9和2.5 年，说明涕灭威一旦进入地下水，会形成较为持 久的残留，造成地下水的污染，进而危及人类及 牲畜的生命安全。国外现已经发现许多地区受到 该污染。 所以，该方法将在检测蔬菜、水果等农产品 及地下水中涕灭威及其代谢物的残留量时发挥重 要的作用。

谢谢！如有错漏之处， 请老师、同学们批评指正。

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