国产盐酸多西环素原料中有关物质的结构鉴定及杂质谱考察

主旦荭昌握蕉２Ｑ！！堡筮１２鲞筮！期１０６

１６．９２ｍｇ，ＲＳＤ为Ｏ．５％，重复性良好。

２．９精密度实验

取“２．８”项下供试品溶液１份，连续进样６次，按上述色谱条件测定硝酸益康唑和栊牛儿酮的峰面积，结果表明，硝酸益康唑和栊牛儿酮峰面积ＲＳＤ均为０．２％，进样精密度良好。

２．１０溶液的稳定性

取“２．８”项下供试品溶液１份，在Ｏ、２、４、６、８ｈ内，分别进样，按上述色谱条件测定硝酸益康唑和糍牛儿酮的峰面积，结果表明，供试品溶液在室温条件下，８ｈ内稳定，硝酸益康唑和糖牛儿酮峰面积ＲＳＤ分别为０．３％和０．２％。

２．１１样品测定

取供试品适量，按上述方法制备供试品溶液并测定。结果见表３。

３讨论

《中国药典》２００５年版二部采用滴定法测定硝酸益康唑含量，用三氯甲烷溶解供试品，在加水２０ｍＬ与稀硫酸５ｍＬ，以二甲基黄．溶剂蓝１９混合指示液为指示剂，用磺基丁二酸钠二辛酯试液滴定至表３样品检测结果

三氯甲烷层由绿色变为红灰色。实验中存在水相与三氯甲烷层的平衡过程，滴定速度慢，反应时间长，需剧烈振摇，滴定终点不易确定，测定结果波动较大。本法采用ｍ）Ｉ￡法同时检测硝酸益康唑和栊牛儿酮的含量，经方法学验证，该方法灵敏、准确，重复性好，适用于复方莪术油栓中硝酸益康唑和犍牛儿酮的含量测定，能对产品的质量进行有效的控制。

参考文献

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国产盐酸多西环素原料中有关物质的结构鉴定及杂质谱考察

袁耀佐１，张玫１，钱文１，杨志明２，赵恂１（１．江苏省食品药品检验所，南京２１０００８；２．常州制药厂有限公司，常州２１３０１８）

摘要目的：鉴定盐酸多西环素原料中检出的有关物质结构，考察国产原料的杂质谱。方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（ｐＨ值适用范围应大于９）；以醋酸盐缓冲液［０．２５ｍ０１．Ｌ“醋酸铵旬．１ｍ０１．Ｌ“乙二胺四醋酸二钠一三乙胺（１００：１０：１），用冰醋酸或氨水调节ｐＨ值至８．８］一乙腈（８５：１５）为流动相；柱温３５℃；检测波长为２８０啪，流速：１．０ｍＬ?Ｉｌｌｉｎ～；进样体积：２０曲。用土霉素、美他环素、Ｂ．多西环素对照品色谱保留时间定位方法鉴定３个已知杂质，用文献方法分剐制备了４－表多西环素和４．表＿６．表多西环素，再采用色谱保留时间定位方法鉴定其他２个杂质，用制备薄层色谱制备２－乙酰－２－脱碳酰胺多西环素溶液（采用ＬＣ－ＥＳＩ．ＩＴ．ＭＳ２法鉴定其结构）鉴定另外１个主要杂质。结果：典型样品色谱图中检出８个杂质峰，６个主要杂质按色谱出峰顺序分别为土霉素、４．表一６．表多西环素、４一表－多西环素、美他环素、Ｂ－多西环素、２－乙酰－２一脱碳酰腰多西环素；杂质谱考察结果显示，不同来源的国产盐酸多西环素的杂质谱相似，均检出美他环素、Ｂ－多西环素、２－乙酰－２一脱碳酰胺多西环素及另外两未知杂质，但大多未检出土霉素。结论：建立的方法适用于盐酸多西环素原料中杂质谱考察和有关物质检查。

关键词：盐酸多西环素；杂质谱；结构鉴定

中图分类号：Ｒ９２７文献标识码：Ａ文章编号：１００９—３６５６（２０１１）一２—１０６—６

ＣｈａｒａｃｔｅｄｚａＨｏｎｏｆＲｅｌａｔｅｄＳｕｂｓｔａｎｃ皤ａｎｄＳｔＩｌｄｙｏｆｈｎｐｕｒｉ够Ｐｒｏ脚ｅｉｎＤｏｍ鹤ｔｉｃＤｏｘｙｃｙｃ?ｌｉｎｅＨｙｃｌａｔｅ

ＹｈａＩｌＹａｏ—ｚｕ０１，ｚｈａｎｇＭｅｉｌ，Ｑｉａｎｗｅｎｌ，Ｙａｎｇｚｈｉ－ｍｉｎ孑，ｚｈａｏｘｕｎｌ（１．肋呼ｕ饥￡矗蹴如Ｄ嘲ｃｏｎ‘ｍｚ，№彬昭２１０００８；２．ｃ阮ｎ础ｏｕＰｋ丌ｍ钟眦池ｚ凡眦＂ｙ，‰础ｕ２１３０１８）

作者简介：袁耀佐，男，副主任药师。学科及研究方向：抗生素质量研究。联系电话：１３９０５１７２９４３。

ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃ６ｖ鹤：Ｔｏｉｄｅｎｔ矗．ｙｔｌｌｅｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ０ｆｒｅｌａｔｅｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｉｎｂｕｌｋ０ｆＤ０ｘｙｃｙｃｌｉｎｅＨｙｃｌａｔｅａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｔｌｌｅｉｍｐｕ．ｒｉｔｙｐＤｏｍｅｏｆＤｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅＨｙｃｌａｔｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ｃ哪７ｏｕｔｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈｈｉｇｈｐｅ血衄：Ｉｌ锄ｃｅｌｉｑｌｌｉｄｃｈｒｏｍａｔｏ黟唧，ｕｓｉｎｇａｃｏｌｕｍｎｐａｃｋｅｄｗｉｍｏｃｔａｄｅｃｙｓｉｌａＩｌｅｂｏｎｄｅｄｓｉｕｃａｇｅｌ粕ｄａＩＩｌｉｘｔｕｒｅｏｆａｂｕ娲ｒｓｏｌｕｔｉｏｎｗｈｉｃｈｃｏｎｓｉｓｔｏｆ１００、ｒｏｌｕｍｅｓｏｆ０．２５ｍ０１?Ｌ～锄ｌｍｏｎｉｕｍａｃｅ．ｔａｔｅｓ０１ｕｔｉｏｎ，１０ｖｏｌｕｍｅｓ０ｆＯ．１ｍ０１．Ｌ．‘ｅｔｌｌｙｌｄｉ锄ｉｎｅｔｅ咖ｃｅｔｉｃａｃｉｄｄｉｓｏｄｉｕｍｓａｌｔｓｏ舢ｔｉｏｎａｌｌｄ１ｖｏｌ啪ｅｏｆｔｒｉｅｔｌｌｙ锄ｉｎｅａｄｊｕ８ｔｉｎｇｐＨｔｏ

８．８硒ｔｈｄａｃｉａｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（８５：１５）船ｔｌｌｅｍｏｂｎｅｐｈａｓｅ，ｍｉｎｔａｉｎｔｈｅｃｏｌｕＩｌｌＩｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｔ３５℃，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅ．１ｅｎ昏ｈｉｓ２８０ｎｍ，ｎｏｗｍｔｅｉｓｌ

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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅｈｙｃｌａｔｅ；Ｒｅｌａｔｅｄｓｕｂｓｔ锄ｃｅ；ｉｎ卿ｕｒｉｔｙｐｒｏ缉ｅ；Ｃｈ锄ｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ

盐酸多西环素（ＤｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅＨｙｃｌａｔｅ）是以土霉素为原料制得的半合成广谱四环类抗生素【ｌＪ，其含半分子乙醇和半分子结晶水的盐酸盐在临床上有着广泛的应用，盐酸多西环素及其片剂、胶囊剂在ｕＳＰ３１／Ｎ砣６、ＢＰ２００８、Ｐｈ．Ｅｕｒ６．Ｏ、ＪＰＸＶ和《中国药典》２００５年版等中均有收载【２“Ｊ，Ｐｈ．Ｅｕｒ６．０提供了其６个潜在杂质的化学结构，分别命名为杂质Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ，盐酸多西环素及其潜在杂质的化学结构如图１所示”Ｊ。

Ｒ－Ｒ２Ｒ３Ｒ４Ｒ５

多西环素ＮＨ２ＨＮ（ＣＨ３）２ＨＣＨ３

杂质Ａ（Ｂ－多西环素）ＮＨ２ＨＮ（ｃＨ３）２ｃＨ３Ｈ

杂质Ｂ（美他环素）ＮＨ２ＨＮ（ＣＨ３）２心＋Ｒ５＝ｃＨ２

杂质ｃ（４．表多西环索）ＮＨ２Ｎ（ｃＨ３）２ＨＨｃＨ３

杂质Ｄ（４：表＿６一表多ＮＨ２Ｎ（ｃＨ３）２ＨｃＨ３Ｈ

西环素）

杂质Ｅ（土霉素）ＮＨ２ＨＮ（ｃＨ３）２ＯＨｃＨ３

杂质Ｆ（２－乙酰＿２一脱碳ＣＨ３ＨＮ（ｃＨ３）２ＨｃＨ３

酰胺多西环素），

图１多西环素及有关物质的结构式

盐酸多西环素有关物质测定方法报道很多，主要以｝玎）ＬＣ方法为主‘２“３，由于目前文献方法均存在缺陷，笔者在文献方法的启发下，以宽ｐＨ范围的Ｃ，。填料为固定相，对多西环素色谱行为主要影响因素进行了系统地研究，建立了更为简便合理的色谱条件，已被《中国药典》２０１０年版采用（详细的建立过程已另文发表）。新建色谱条件可以使原料中有关物质得到良好分离，适用不同厂家原料中杂质谱（ｉｍｐｕｒｉｔｙｐｒ０．ｆｉｌｅ）考察。

典型样品中检出多个杂质，作者对６个主要杂质进行了结构推定，推定思路根据有无杂质对照的情况而异。对有杂质对照品、或虽然无杂质对照品但有杂质溶液制备方法的５个主要杂质，采用色谱保留时间定位法确定其结构；另一主要杂质结构的鉴定相对复杂，采用了制备薄层色谱制得纯度较高的杂质溶液，用Ｌｃ－ＥｓＩ－ＩＴ—Ｍｓ“法进行结构推定，用其作为杂质对照溶液，再采用色谱色谱保留时间定位法确定其在色谱图中的出峰位置，实验中还应用了光电二极管阵列检测技术（ＰＡＤ）采集对照品和检出杂质的紫外图，用于旁证结构的一致性。现将研究结果报道如下。

１仪器与试药

ｗａｔｅ也６９５．２９９６高效液相色谱仪（ｗａｔｅｒｓ公司，美国），Ａ舀ｌｅｎｔ１１００Ｌｃ／ＭｓＤ７Ｉ．ｒ印液质联用仪（美国Ａ百ｌｅｎｔ公司）。多西环素、ｐ一多西环素（６一ｅｐｉ．ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）、土霉素、美他环素等对照品均来自中国药品生物制品检定所；盐酸多西环素分别由多家企业提供；醋酸铵、ＥＤＴＡ钠盐、磷酸氢二钠、三乙胺、冰醋酸、硫酸四丁基氢氧化铵均为分析纯；乙腈、

叔丁醇均为色谱纯。

２方法与结果

２．１色谱条件

２．１．１新建立的色谱条件色谱柱：美国菲罗门ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉ试Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５恤ｍ）柱，流动相：醋酸盐缓冲液［０．２５ｍｏｌ?Ｌ。１醋酸铵一０．１ｍ０１．Ｌ。１ＥＤＴＡ钠盐．三乙胺（１００：１０：１）用冰醋酸调节ｐＨ值至８．８］．乙腈＝８５：１５；柱温：３５℃；检测波长：２８０啪；流速：１．０ｍＬ?１１１ｉｎ～；进样体积：垒０止。２．１．２ｕＳＰ３１．Ｎ砣６、ＢＰ２００８、Ｐｈ．Ｅｕｒ６．０、ＪＰＸＶ中有关物质测定的色谱条件色谱柱固定相为聚苯乙烯一二乙烯基苯ＰＬＲＰ—Ｓ（４．６ｍｍ×２００Ｈ吼，８斗ｍ，１０００Ａ），流动相：分别取２．７２ｇ磷酸氢二钾，０．７４ｇ氢氧化钠，０．５０ｇ硫酸四丁基氢氧化铵，０．４班Ｄ—ＴＡ至ｌ０００量瓶中，加８５０ｍＬ水，加６０ｇ叔丁醇（借助适量的水），用水稀释至刻度，用１Ｎ氢氧化钠调节ｐＨ至８．Ｏ±０．１；柱温：（６０±１）℃；流速：１ｍＬ?ｍｉｎ～，检测波长２７０ｎｍ，进样体积：２０止。２．１．３质谱条件ＥＳＩ离子源；离子源温度：３５０℃；雾化室压力：２４１．３ＫＰａ；干燥气流速：８Ｌ?１１１ｉｎ～；离子扫描范围：５０～６５０，ｒ以；正离子检测方式。

２．２溶液的制备

２．２．１杂质溶液的制备部分杂质对照品溶液：分别称取ｐ－多西环素（６一ｅｐｉｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）、土霉素、美他环素约１０ｒｎｇ，分别用０．０１ｍ０１．Ｌ‘１的盐酸溶解并稀释制成每１ｍＬ中分别含ｏ．２ｍｇ的溶液，供杂质峰定位用。

４－表多西环素（４一ｅｐｉｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）溶液：称取多西环素对照品适量，用０．Ｏｌｍ０１．Ｌ。１的盐酸溶解并稀释制成Ｏ．４ｍｇ?ｍＬ一的溶液，至水浴中加热６０ｍｉｎ，放冷至室温。

４一表石－表多西环素（４一ｅｐｉ一６一ｅｐｉ—ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）溶液【９１：称取６－表多西环素（届一多西环素）对照品适量，用Ｏ．０１ｍ０１．Ｌ一的盐酸溶解并稀释制成Ｏ．４ｍｇ?ｍＬ。１的溶液，至水浴中加热６０１１１ｉｎ，放冷至室温。

杂质Ｆ（２一乙酰－２一脱碳酰胺多西环素，２一ａｃｅｔｙｌ一２一ｄｅｃａｒｂａｍｏｙｌｄｏｘｙｃｌｉｎｅ）溶液：称取盐酸多西环素（后相邻峰含量约为１％）适量，用０．０１Ｎ盐酸溶解并制成约为１ｇ?ｍＬ‘１的溶液，作为供试品溶液，吸取５此，点于硅胶６０Ｈ薄层板上，以二氯甲烷．甲醇．水（３５：５９：６）为展开剂，展开后，晾干，置３６５ｎｍ波长的紫外灯下观察，多西环素斑点前有一杂质斑点（应为反相色谱条件下的后杂峰斑点），收集分离的后杂峰斑点，用甲醇溶解，过滤后取滤液，备用。２．２．２有关物质测定用供试品及对照品溶液的制

备供试品溶液精密称定约１０ｍｇ盐酸多西环素对照品，置于一个１０ｍＬ量瓶中，加Ｏ．０１ｍｏｌ?Ｌ。１盐酸溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀。

对照溶液（１％）精密吸取有关物质供试品液１ｍＬ置于一个１００ｍＬ量瓶中，加Ｏ．０１ｍｏｌ?Ｌ“盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。

２．３结果

２．３．１多西环素原料中检出杂质的色谱峰定位和结构鉴定按“２．１‘的色谱条件，检查９批原料药中的有关物质，其中图２为检出杂质个数最多样品的色谱图，主要有６个杂质，按出峰顺序以阿拉伯数字依次编号。

图Ｚ中的峰１、峰４和峰５的色谱保留时间和ＰＡＤ扫描紫外图谱分别与土霉素（杂质Ｅ）、美他环素（杂质Ｂ）和Ｂ－多西环素（杂质Ａ或６一表多西环素）一致（图３），表明图２中的峰１、峰４和峰５分别对应为土霉素、美他环素和Ｂ一多西环素。

按ｕｓＰ３２方法制得４一表多西环素溶液并进行色谱分析，色谱图中有１主要杂质（图略），应为４一表多西环素，在新建色谱系统下，该溶液的色谱图（图４）中主要杂质与图２中峰３的色谱保留时间及ＰＡＤ扫描紫外图谱一致，表明峰３为４一表多西环素（杂质Ｃ）。

同样，参照文献归。方法，将Ｂ一多西环素溶液加热制得４一表石一表多西环素溶液并用新建系统进行色谱分析，该溶液的色谱图（图５）中主要杂质与图２中峰２的色谱保留时间及ＰＡＤ扫描紫外图谱一致，确定图２中的峰２为４一表石一表多西环素（杂质Ｄ）的色谱峰。

根据上述结果并结合Ｐｈｒ．Ｅｕ６．０中杂质结构信息，可以推测峰６应为杂质Ｆ，即２一乙酰＿２一脱碳酰胺多西环素（２一ａｃｅｔｙｌ－２一ｄｅｃａｒｂ锄ｏｙｌｄｏｘｙｃｌｉｎｅ）。为了验证推测结果的合理性，作者参考ＰｈＬＥｕ４．０中多西环素鉴别用ＴＬｃ方法¨０｜，以商品化样品为原料，制备了部分杂质Ｆ溶液（３．１中方法），用新建立的色谱条件对其纯度进行分析，色谱如图６所示，其色谱保留时间与图２中色谱峰６的色谱保留时间及ＰＡＤ扫描紫外图谱一致，采用ＬＣ．ＥＳＩ．ＩＰ—ＭＳ“采集其主成分的一级和二级质谱，其准分子离子的［Ｍ＋Ｈ］＋为４４４，与２一乙酰＿２一脱碳酰胺多西环素的分子量（Ｍｗ４４３）吻合，二级质谱碎片离子为ｍ屈４２６、４００、３２０、３１５、３０２（图７），按杂质Ｆ的结构解析，其裂解途径如图８所示，各碎片离子均能得到合理解释，证明制备得到的溶液中主成分即图２中的峰６

为２一乙酰－２一脱碳酰胺多西环素。

表１典型盐酸多西环素样品中检出杂质的结构及色谱信息一览

２４６８１０１２１４１６１８２０

ｆ，ｍｉｎ

图２盐酸多西环素及主要杂质的典型色谱图图５４一表石?表多西环素溶液的色谱分离图

土｛：素

美他不素

多西环索

肛多西环索８

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ｆ，ｍ．Ｄ

图３土霉素、美他环素、Ｂ．多西环素及多西环素对照品的

图６杂质Ｆ制备溶液纯度测定的色谱图色谱图

图４４－表多西环素溶液的色谱分离图

２．３．２不同厂家盐酸多西环素原料中杂质谱的考察收集到３个厂家各３批盐酸多西环素原料，按新建色谱条件进行有关物质分析，结果如表２所示，表中杂质代号的结构对应于表１，采用主成分不加校正因子自身对照外标法计算有关物质的量。

３讨论

３．１本文主要采用色谱保留时间并辅以ＰＡＤ紫外

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Ｊ．

１００２００３００４００５００６００

图７杂质Ｆ的二级质谱图

光谱比对的方法对检出杂质中的６个主要杂质结构进行确证和色谱出峰位置定位，为考察国产盐酸多西环素原料中杂质谱提供了方法依据，并为２０１０年版药典标准修订提供了具体而翔实的数据支持，但采用比对色谱保留时间进行结构确证的方法本身有一定的局限，最好采用柱切换技术结合在线ＬＣ－ＭＳ法或ＬＣ—ＮＭＲ法对杂质结构进行进一步确证，这部分工作有待仪器设备完善后完成。

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【ｍＬ０】＋Ⅲ／ｚ４２６图８杂质Ｆ的二级质谱裂解途径

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表２不同厂家盐酸多西环素杂质谱测定结果一览表

３．２多批不同厂家国产盐酸多西环素中的杂质谱相似：均检出４－表多西环素（杂质ｃ）、美他环素（杂质Ｂ）、ｐ一多西环素（杂质Ａ）、２一乙酰．２一脱碳酰胺多西环素（杂质Ｆ）及其他两个结构未知的杂质，其中杂质Ａ和Ｆ均为主要杂质，根据强力降解实验结果推测，未知杂质１（保留时间约５ｍｉｎ左右）可能为多西环素的降解产物，未知杂质２（保留时间约３０ｍｉｎ左右）可能为多西环素合成过程中的副产物，推测结果有待验证。除一批原料检出合成用原料土霉素外，其余８批均未检出，可见２００５年版药典标准中特别控制土霉素量小于１．０％不尽合理，２０１０年版盐酸多西环素有关物质控制标准中删去了对土霉素的控制要求，增加了单个杂质量和总杂质量的控制要求。

３．３实验中分别制备了已知浓度（约Ｏ．１ｍｇ?ｍＬ。１）多西环素、土霉素、美他环素、Ｂ－多西环素混合溶液，连续进样６次，根据相应峰面积与浓度，计算各杂质相对于多西环素的相对校正因子（ｒｅｌａｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅｆ如ｔｏｒ，ＲＲＦ），结果表明，土霉素ＲＲＦ＝０．９５，美他环素ＲＲＦ＝１．２９，Ｂ－多西环素ＲＲＦ＝０．７７，根据２００５年版附录药品杂质分析指导原则中“不加校正因子的主成分自身对照法要求杂质与主成分之间的校正因子应在Ｏ．９—１．１范围内”的要求，我们认为对美他环素和Ｂ一多西环素的检查以采用加校正因子的主成分自身对照法为好，但考虑到质量标准的延续性，２０１０年版药典中仍采用不加校正因子的主成分自身对照法进行有关物质的计算。参考文献

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反相离子对色谱法测定不同规格益母草中盐酸益母草碱的含量

陈碧莲１，祝明１，黄卫国２，郭增喜１（１．浙江省食品药品检验所，杭州３１００１４；２．浙江中医药大学，杭州３１００５３）

摘要目的：建立了反相离子对色谱法测定益母草中盐酸益母草碱含量的方法。方法：Ａ舀ｌｅｍＳＢ—Ｃ。８柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５¨ｍ）；流动相：乙腈＿０．４％辛烷磺酸钠的０．１％磷酸溶液（２４：７６）；检测波长：２７７ｎｍ；流速：１．０ｍＬ?ＩＩｌｉｎ～。结果：盐酸益母草碱进样量在Ｏ．０２８６６—１．４３３斗ｇ范围内呈良好的线性关系，平均回收率为９８．Ｏ％，ＲｓＤ为０．６％。结论：此方法简便、灵敏度高，重现性好，可用于益母草的质量控制。

关键词：反相离子对色谱；益母草；盐酸益母草碱

中图分类号：Ｒ９２７．２文献标识码：Ａ文章编号：１００９—３６５６（２０１１）一２一１１１—３

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益母草为唇形科植物益母草（Ｌｅｏｎｕｍｓｊ印ｏｎｉ—

ｃｕｓＨｏｕｔｔ．）的新鲜或干燥地上部分，为治疗妇科疾病的常用中药，标准收载于《中国药典》２００５年一部…。益母草的化学成分主要有生物碱类、二萜类、甾醇、黄酮类、有机酸等心Ｊ，其中生物碱以水苏碱（ｓｔａｃｈｙｄｒｉｎｅ）和益母草碱（１ｅｏｎｕｒｉｎｅ）为主，而目前对益母草药材的质量控制一般仅限于测定盐酸水苏碱的含量，但药理研究结果表明益母草碱具有显著的药理活性，具有抑制血小板聚集，防止血栓的形成ｐｏ等药理作用。

本实验建立了反相离子对色谱法测定益母草中盐酸益母草碱含量的方法，并测定了不同规格的益母草药材，实验结果表明该方法简单，准确可靠，可为更有效控制益母草药材的质量提供可靠的方法。

１仪器与试药

１．１仪器

Ａ西ｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪；ＭｅｔｔｌｅｒＡＥ２４０电子天平；ｓＩＧＭＡＮＳⅪ一１５Ｋ高速冷冻离心机（德国ＳｉｇＩＩｌａ公司）。

１．２试药与样品

乙腈为色谱纯；水为重蒸水；其余试剂为分析

基金项目：国家十一五“重大新药创立”专项（编号：２００９ｚＸ０９３０８伽１）。

作者简介：陈碧莲，女，副主任中药师。学科及研究方向：中药分析。联系电话：１３７３５４６６５７２０

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