特发性血小板减少性紫癜(ITP)动物模型具体方法及步骤

特发性血小板减少性紫癜(ITP)动物模型具体方法及步骤原型物种人

来源注射GP-APS导致特发性紫癜

模式动物品系SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为8w-10w ，体重为30g-35g。

实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期4-6 weeks

建模方法一、分离血小板的方案：

小鼠眶静脉取血，置于抗凝离心管中,静置30min后离心，800rpm离心

10min，上清液即为富含血小板的血浆。吸出上清液置于干净试管中，

3500rpm离心10min，弃去上清液,管底沉淀物为血小板。向试管中滴加50～100μl质量浓度为1％草酸铵溶液，以玻璃棒轻轻搅拌，再加入质量浓度为1％草酸铵溶液2～3ml，静置5min，使红细胞溶解。3500rpm离心10min,弃去上清，加入血小板洗涤液并反复吹打,使成为血小板混悬液，3300rpm离心

10min，弃去上清，加入少量血小板洗涤液并反复吹打使之成为混悬液。该血小板将作为抗原免疫豚鼠后，取豚鼠血清给小鼠注射，制备过敏性紫癜模型。此方法操作简单，可以得到高浓度的血小板，并很好地解决血小板纯度不佳的问题。

二、抗体血清免疫豚鼠：

1.取以上血小板与等量完全弗氏佐剂混合，乳化油包水状，于0周注射豚鼠足掌，背，皮下至少4点；

2.血小板于等量不完全弗氏佐剂混合，乳化油包水状，于1，2，4周注射豚鼠足掌，背，皮下至少4点，每个点100ul；

3.第5周从豚鼠心脏取血，3000r/min 离心10min后取上清，即为豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)；

4.置56度水浴30min 补体灭活，生理盐水稀释后，-20度冰箱储存备用。

三、小鼠紫癜建模方案：

隔日注射豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)建立ITP小鼠模型，0，2，4，6，8，10d按照100ul/20g体重腹腔注射1:4稀释的豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)。

应用疾病模型

一般体征：自第2次注射APS后，各组造模后小鼠出现明显皮下紫癜，以注射部位、四肢、尾部为重。第4d开始逐渐出现精神萎靡、眯眼、扎堆、反应迟钝、行动迟缓，甚至行走不稳，毛色枯槁、散乱竖起，饮食饮水量减少，逐渐消瘦，体质量减轻等症状。观察指标及检测方法：观察实验中小鼠的精神活动状况、出血情况、皮毛光泽、饮食饮水量、大小便、体质量变化及死亡情况；

实验结束后(实验第lld)，眼球取血，全自动血细胞计数分析仪检测外周血象，流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群。剥离胸骨，取胸骨骨髓涂片，瑞氏染色。

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