CLSI EP25-A体外诊断试剂稳定性评估YYT1579-2022 阿伦尼乌斯 加

1 CLSI EP25-A 体外诊断试剂稳定性评估

YYT1579-2018体外诊断试剂稳定性评价

阿伦尼乌斯 Arrhenius Plot 加速热稳定有效期验证

一．试剂盒保存期的实验方案

试剂盒在4℃条件下可以存放多长时间，应该进行实验观察。最客观的方法是在不同的时间，检测试剂的一些性能，直至失效。可是，厂商往往希望在短时间内快速了解保存期。较通用的方法是依据阿仑尼乌斯经验式物理化学的方式。在物理化学中，化学反应的速率随反应温度升高而加快。试剂盒在不同温度中保存，试剂失效的“速率”和存放的温度间也符合物理化学上的反应速率的关系。阿仑尼乌斯经验式归纳了这个物理化学的规律。 阿仑尼乌斯描述温度对反应速率的影响经验式如下：

B RT

Ea k +-=ln 式中： k 为反应速度常数，T 为反应的绝对温度。

因此，若令lnk 为Y ，1/T 为X ，-Ea/R 为常数A ，原公式可以写为：Y=AX+B 。设计实验，进行多个温度下保存产品出现失效的保存时间，该时间（天数或小时数）的倒数即为在该温度下产品变坏的速率。将实验温度换算为绝对温度T ，和保存时间倒数形成各个数据对，在半对数纸上作图，令lnk 为Y ，1/T 为X 。在图上绘制一条最佳的配合线，由该线倒推至T 为277K （4℃）时对应的反应速率的对数值。由该对数值求反对数（指数），再求该值的倒数，即为估计的稳定时间。或者实验成对结果做直线回归处理，从回归线推算估计的稳定时间。

二．试剂盒稳定期的观察实验方案

1．首先要确定试剂盒失效的指标。例如：以存放在4℃下试剂盒对某稳定控制品检测的结果为100%，计算保存在其他温度的试剂盒对同样的控制品检测结果和4℃试剂盒检测结果比较的百分率；如百分率小于90%，说明试剂盒失效。

2．准备数个恒温箱，将温度调节至几个实验需要的温度。例如可以调节为：25℃、32℃、37℃、43℃、50℃等。

3．整个实验使用相同批号的试剂盒和相同批号的控制品（或稳定的样品）。如果是观察试剂盒的稳定期，则将试剂盒存放于不同温度的恒温箱，还应准备更多一些的试剂盒存放在4℃。存放时，温度越高的存放少一些，但是一定要多一些，以备稳定期性能特别好的情况。必须规定：取出实验的试剂盒实验后不再放回去继续观察。因为观察的是没有打开过的试剂盒的稳定期，不是打开后还能用多长。被检测的控制品应始终保证处于最佳状态，规定每次实验使用控制品的方法，如：复溶要求、是否开瓶后只用一次、不能反复冻融等。

反之，若观察的是校准品或控制品的稳定期，则将观察的样品存放在不同温度。用于检测的试剂盒应确保最佳。

4． 实验中应有质量控制，以每天质量控制结果说明检测结果有效。

5． 设计实验。开始实验时，每次实验间隔时间不宜很长，例如每天检测。如果在其他 温度保存的产品变化较快。应该每天检测。如果产品较稳定，可以每2天或每3天，或更长的时间间隔做检测。记录实验原始结果。出现失效的存放时间（天数或小时数）的倒数，为存放在某温度下变性失效的反应速率。

三．数据处理

以示例说明。

对某试剂盒进行了稳定期的观察。在4℃、25℃、32℃、37℃、42℃、50℃进行实验。以4℃试剂盒对控制品检测结果为准，检测结果在4℃试剂盒检测结果的90%或以下的为失效。结果如下：

将X (1/T)和Y [lg (1/d)]的成对结果绘图或进行直线回归处理（在半对数纸上呈直线关系）。

回归统计为：n = 5, a = 15.65587798, b = -5099.17203, r = 0.9974

由回归式，推算4℃的绝对温度277K下，预期稳定的天数：求1/277的[lg(1/d)]为-2.75268531，求反对数：1.7673×10-3，它的倒数为565.8天。

所以，由实验推算，本试剂盒在4℃下可以稳定的时间为565.8天。约18个月。

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