酶标仪

酶标仪是什么？

用来做酶联免疫反应的专用仪器。 本质上是一台光电比色计。

按照用途可以分为光吸收酶标仪和多功能酶标仪。

光吸收酶标仪，只有光吸收模块，所以只能做光吸收实验，核酸蛋白定量，酶学分析，ELISA，细胞分析。

主要型号：F50，SUNRISE。区别，通道数不同。F50为8通道，SUNRISE为12通道，包括一个参比通道。光源不同，F50为LED冷光源，SUNRISE为卤素灯热光源。波长范围不同，F50为400～750，SUNRISE为340～750，并且，可配温控模块。

另外，SUNRISE12个通道，检测更快。有1个参比通道，可以开机可以自动校准波长。可配温控模块，温控还是比较好的。不用配电脑，集成有触控面板，内置Windows ce的系统。

F50体积小巧，检测准确，免费升级，免维护，不用换灯，卤素灯最多2年就需要更换，不用预热，使用方便。

两款都是经典的光吸收酶标仪。相当的皮实，耐用，而且也够准确。

多功能酶标仪

除了光吸收模块，还有温控，气体模块，进样器，荧光模块，发光模块，震荡模块。

所以，波长范围200~1000全波长。还会看到一个参数：OD范围：0～4。 在酶标仪上，测量光吸收量用OD表示样品的吸光度。典型应用，核酸定量，因为核酸在260有特征吸收。蛋白在280有特征吸收，故可以定量蛋白。而，两者的比值，可以反应样品核酸的纯度。 DNA或RNA的浓度 OD260=1.0相当于

? 50 ?g/ml双链DNA(dsDNA)

? 40 ?g/ml单链DNA/RNA ? 20 ?g/ml寡核苷酸(Oligos) ? DNA或RNA的纯度

? DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 ? RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0

蛋白质定量—最常用的两种方法 y Bradford法—考马斯亮蓝染色法 考马斯亮蓝G-250 和蛋白结合

形成蓝色化合物（在595 nm处有最大吸收峰） BCA法 蛋白质的酞胺键

在碱性条件下和Cu2+反应 生成Cu+

与BCA结合

形成紫色复合物（在562 nm处有最大吸收峰）

因为特征吸收波长的原因，F50，SUNRISE不能做核酸和蛋白定量。，所以老师如果做核酸和蛋白的话，需要用多功能酶标仪。另外，参数上写230的吸收，和320的吸收，这是为了去除空白，除了核酸蛋白，其他有机物在230有吸收，而无机物在320处有吸收。所以为了让老师更直观的看到有没有杂质，吸收图谱就很有必要，所以在SPARK10M上，就配置有吸收图谱。这个在NANODROPE上也有，它也有图谱。所以买了这个，就不用热电了。另外酶标仪在测定核酸蛋白的时候，比热电更高效，热点的有几个型号，最低配的一次测一个，最好的不知道，好像是48个，因为也是一排8个往上增加的。但是，不知道为什么，热电的一排间距设计的，刚好和排枪不同，所以，还是要一个样一个样的加。所以也就失去了意义。因为测量体系也就2ul，几秒钟就蒸发了，严重了样品干了，最少也会影

响浓度。而酶标仪，配上NANOQUANT检测板，一次可测16个最多。而且板子培优适配器，就是一个有机玻璃板子。检测板上有四个孔位，刚好和定位板适配，定位板上的孔和排枪适配，所以加样特产方便快捷。

现在在卖的多功能 M200,F200,F500,M1000 以及新的SPARK系列，10M,20M

下面我以10m作为例子，讲一下多功能酶标仪。

说到帝肯酶标仪，不得不说他们做了第一个四光栅光路，光栅是用来去除杂光的，原理类似棱镜的分光。样品前2光栅，后2光栅，组成四光栅。命名为：HSM光吸收高速光栅。这里看一下M1000彩页，里面有4光栅示意图。前面两个弧形的就是光栅。所以，样品前2个，后面两个。顺利得出，化学发光只能有两光栅。因为化学发光用不到激发光路。针对10M，由氙灯发光，用氙灯可以保证有足够的能量，和波长范围。之后通过光栅，之间用光纤传导，导入到样品的上方，检测器在板子下方。它的光吸收模块有两套光路，一个是垂直光路，用于酶标板检测，一个是水平光路，用于比色杯测量。单孔扫描：200~1000，可以1NM步进，全波长扫描5S就可以完成，可以提高实验速度。

针对光栅，波长的准确性，是重要参数。目前TECAN最好的光栅是Infinite系列酶标仪，可以做到0.5nm，之后是spark系列，0.8nm。而其他的，大多在2nm。重要性体现在：对于DNA样品，1nm检测波长的漂移将带来10%的读数误差，2nm带来23%的误差，将导致实验结果的不稳定。

酶标仪现在的光路，只要有两种，一个是滤光片光路，一个是光栅光路，光程是一样的，区别在于把滤光片换成光栅。光栅光路的有点：波长可以任意选择，全波长扫描，而滤光片只可以选择特定的波长。故，滤光片的灵敏度高，但是会需要特定滤光片，比如偏振片，灰度片。位于光源和样品间的光栅或滤光片用于获得激发用的单色光。位于样品和检测器间的光栅或滤光片是为了滤除激发光和杂质的非特异性信号。

荧光：

目前国际上研究分子间相互作用广泛应用的方法： y 荧光偏振 - FP

y 荧光共振能量转移 - FRET y 时间分辨荧光 - TRF y TR-FRET

都用于研究分子间相互作用，用于筛选，比如看研发的新药是否会和靶点结合。

后来，tecan结合了两个光路的有点，创造性的开发出了融合光路，也就是说滤光片和光栅可以根据实验需求自由组合，这样便可以兼顾两者的有点。这里为了便于理解，对比一下伯腾的酶标仪，他只是简单地硬件堆积，只能2选一，要么光栅，要么滤光片，而机器也是那么大，就造成它的滤光片数量特别少，只有2组，所以滤光片光路的可用波长是在有限，限制了设备的应用。另外，说明一下各个光路的典型应用组合：滤光片（F），光栅（M）， M/M：常规荧光染料、探针实验、细胞实验

M/F： 远红外荧光染料，TR-FRET等，激发波长扫描 F/M： 发射波长扫描

F/F： 高通量筛选，如：FP/TR-FRET

这个可以跟老师讲一下，说明我们这个使用实际用处的，不失为了堆参数，也可以显示我们的专业。现在的销售，一定要向专业发展和靠拢，慢慢的称谓老师的实验顾问，帮老师解决问题，这样，老师会觉得你不是为了销售而销售，是为了帮助他。而是也是，我们找他，是过去帮他的，没有我们，他怎么挑选设备，他怎么得到业界的最新的实验方法。他们也喜欢了解前沿信息，而我们就是他们的渠道。所以，针对销售，先做人，后做事。 扯远了。

上面的光路我们提到了垂直光路，和光纤，SPARK系列还针对应用，开发了z轴聚焦。就是光纤头可以上下移动。用来靠近样品，避免测这个空的时候，旁边孔的光进去，造成干扰。

我们看参数的时候，会发现有个顶部、底部，这里说一下，顶部测量用于测量光吸收，荧光，化学发光。底部用于测量细胞，也就是说细胞分析用的是底读功能，因为细胞会沉淀。

参数里面化学发光里面还有辉光和闪光，先说一下化学发光。生物发光现象很多，都是由ATP反应发出的。所以会看到参数里面有ATP字样。用于研究报告基因分析，可以简单地理解为基因表达。这里还涉及两个东西要说明。一个是滤光片。化学发光因为强度的原因，不能太强，所以这时候会用到灰度滤光片，就是滤光片的两端，有设定好的OD吸光值得的滤光片，组成OD1-3的灰度滤光片，用于减弱光的强度。

另一个是进样器。大家先说说什时候酶标仪需要配进样器，为什么。

化学发光分为两种，一种是闪光，一种是辉光。举个极端的例子，一个老师要测量一个样品，而这个发光是闪光，加入试剂立即发光，2秒就没了，老师都还没有来得及吧板子放进去，就没了，还怎么测。这个时候就用上了进样器。 另外就是活细胞实验用，比如钙离子通道实验。 还有一个要说的应用，荧光偏振：FP 荧光偏振(FP)

溶液中的荧光分子在受到偏振光照射时，可吸收并释放出相应的偏振荧光，如果在激发时荧光物质处于静止状态，发射光将保持原有激发光的偏振性，如果其处于运动状态，发射光电偏振偏振平面将不同于原有激发光的偏振特性，这就是荧光偏振现象，荧光分子与其它因子的相互作用，例如相互结合或排斥；其所处环境的性质，例如溶液的粘度、温度等，这些因素都有可能对这个荧光因子受激发后发出的发射光的发射平面产生影响。因此以荧光偏振为基础发展的技术可用来研究生命科学中分子之间的相互作用，如受体配体结合分析，DNA－蛋白质结合分析，SNP分析，酶活性分析。

荧光偏振分析所需的样品量少，灵敏度高，可达亚纳摩尔级范围，重复性好，操作简便，也更为安全可靠，不会在实验过程中生成有害的放射性废物，此外荧光偏振是真正均相的，允许实时检测（动力学检测），对于浓度变化不敏感，是均相检测形式（中间不含洗涤步骤）的最佳解决方案。

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