酿酒酵母表达系统-半乳糖诱导外源蛋白表达实验

酿酒酵母表达系统-半乳糖诱导外源蛋白表达实验

培养基：

SC尿嘧啶缺陷培养基（2%GLucose） SC诱导培养基（2%半乳糖）

贮存液：

20%葡萄糖（W/V） 20%半乳糖（W/V） 贮存液过滤除菌，4℃保存。

SC培养基高温高压灭菌，待培养基温度降低至60℃以下后，加入相应体积的葡萄糖或者半乳糖，混匀，4℃保存备用。

实验流程：

1.将转化pYES2的INVSC单克隆接种到15ml SC（2%葡萄糖）选择培养基中。 2. 30℃震荡过夜培养。

3.测定过夜培养菌液的OD600，计算配制50ml OD600=0.4的菌液所需的过夜培养的菌液体积V。

eg：例如过夜培养菌液OD600=3，则V=（0.4OD/ml）（50ml）/（3OD/ml)=6.67ml。 4.取V体积过夜培养的菌液于50ml离心管中，4℃，1500g，离心5min，收集菌体。

5.用1-2ml SC诱导培养基（SC+2%半乳糖）充分重悬菌体，将诱导培养基补充至50ml，，将菌液全部转移至无菌250ml三角瓶中，30℃震荡培养。 6.分别于接种诱导培养基2,4,6,8h后，取5ml菌液测定OD600。 7.4℃，1500g，离心5min，收集菌体。 8.去上清，用500ul无菌水重悬菌体。

9.将细菌悬液转移至1.5ml无菌离心管中，以离心机最大转速离心30s。 10.去上清，稀释后荧光显微镜下观察。

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