SOP文件-IMMUNOLOGY-I800-HbsAg-0001

操作规程 SOP -I800-HbsAg-0001, Version -001

项目名称和编号

乙肝表面抗原（HBsAg） 1. 检验申请

单独检验项目申请：乙肝表面抗原（HBsAg）;组合项目申请：乙肝三系定量。临床医生根据需要提出检验申请。 2. 标本采集与处理

2.1 标本采集

2.1.1 常规静脉采血2ml，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管上统一且唯一的标识符。 2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标

本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5 下列标本为不合格标本

2.1.5.1 标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其它如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2 标本保存

2.2.1 接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。

2.2.2 标本保存时间：室温（15℃～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2℃～8℃）稳定

14d。超过14d需-20°C保存。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过2d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3 已完成测试的标本保存完整的识别号，置4℃～8℃冰箱内保存7d。 2.3 标本采集的注意事项

2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h不饮酒和12h以上禁食空

腹状态。

2.3.2 注意有无应用影响测试项目的药物。

2.3.3 可以使用人血清或血浆（EDTA钾、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1、CP2D、CPD、草酸钙 肝素钠、肝素锂）。液体抗凝剂具有稀释作用，可能引起患者样本浓度下降。

3. 方法原理

Architect i800SR HBsAg是采用化学发光微粒子免疫分析（Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay, CMIA）技术，双抗体夹心两步法对待测样品中的乙肝表面抗原进行定量检测。

一般在反应的第一阶段，标本与包被了Anti-HBs的微粒以一定比例混合，标本中HBsAg与微粒上包被的Anti-HBs进行一定时间的反应。第一反应终了后，利用磁场分离,吸去未反应的被检物质与其它的不要成份。第二阶段，加入吖啶酯标志的Anti-HBs，形成双抗体夹心复合物，第二阶段终了后，为了将未反应的第二抗体除去，再一次进行冲洗。反应的第三阶段，加入基质液(预激发液H2O2，激发液NaOH), CMIA光路系统通过预先确定好的时间读取化学发光发射的量（RLUs），样本中HBsAg的含量与Architect i800SR光学系统检测到的RLUs值呈正比。 4. 试剂及其它用品

4.1 试剂：诊断试剂盒。

4.2 试剂盒保存:未开瓶的试剂储存在2-8℃冰箱内可稳定至有效期。开盖后避免污染。 4.3 试剂盒准备：即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分：

4.4.1 ARCHITECT HBsAg试剂盒

4.4.2 磁性微粒试剂瓶：鼠单克隆乙肝表面抗体（IgG,IgM）包被的磁性微粒子 4.4.3 标记物试剂瓶：吖啶酯标记的山羊单克隆乙肝表面抗体（IgG） 4.4.4 HBsAg手工稀释液（需另行配置）

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4.4.5 激发液（需另行配置） 4.4.6 预激发液（需另行配置） 4.4.7 清洗缓冲液（需另行配置）

5. 校准品与校准模式

5.1 校准品：

名称:美国雅培i2000SR HBsAg校准品 校准范围：0-1000mIU/mL

5.2 每次更换批次时都应进行校准。按照您的实验室所建立的质控要求，使用至少两个水平的质控品进行校准曲线验证。如果质控结果不在可接受范围值内，则需要进行重新校准。 6. 质控品与室内质控规则

6.1 质控品名称：康彻思坦HBsAg质控品。

6.2 每隔24小时运行一个质控水平（阳性临界值）。

6.3 如果质控结果不在实验室所规定的可接受范围值内，则患者值可疑。需使用新鲜质控品重

复质控。

6.4 如果质控结果仍不在可接受标准范围内，则需重新校准。每次更换试剂批次后，都要检查

质控结果和可接受标准。

7. 适用仪器

适用ARCHITECT i800 SR。 8. 标本检测步骤

8.1 按照要求准备标本，离心分离血清后，放入i800标本位进行检测（具体操作详见相关仪器

操作手册） 8.2 样品稀释操作

HBsAg值超过250.0000IU/mL的样品，都会标记为“>250.0000”，可以使用自动稀释步骤和人工稀释步骤进行稀释。

8.2.1 如果使用自动稀释步骤，系统会执行1：5的样品稀释，并自动计算稀释样品的浓

度和报告结果。

8.2.2 人工稀释按照如下方式进行：

8.2.3 对HBsAg的建议稀释比例为1：500。建议不要超过1:999这一比例。

8.2.4 操作人员必须在患者或质控品订购屏幕中输入稀释因数。稀释前，系统会使用该

稀释因数自动计算样品浓度。此为报告结果。

8.2.5 如果操作人员没有输入稀释液因数，则所报告的结果即为该稀释样品的结果。该

结果（使用稀释因数前的）应该大于0.05μIU/mL。

9. 计算和判断

根据Cal1和Cal2 ARCHITECT i800SR自动计算器计算出结果。 10. 检验结果的报告及范围

10.1 结果的报告

10.1.1 结果经审核后，确认无误后发出报告。

10.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签

名，并有与申请医学信息。

10.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

10.2 报告范围：超过线性范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：

系根据标本稀释后重复测定的结果。

11. 操作性能

11.1 线性

HBsAg 的线性最高可达250IU/ml

11.2 精密度

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使用5个值不等的检测样本，每天在3个测定点用3个不同批号试剂重复测定4次，连续测定5天。每天在测定前和测定结束后重复测定ARCHITECT 阳性质控。见表（一）

见表（一）Architect HBsAg精密度

质控品 数量 平均值 批内运行 批间运行 总体

(IU/ml) 标准差%变异系数 标准差%变异系数 标准差%变异系数

1 180 0.23 0.011 4.6 0.016 6.7 0.018 7.7 2 180 4.69 0.191 4.1 0.290 6.2 0.339 7.2 3 180 23.76 1.205 5.1 2.179 9.2 2.268 9.5 4 180 96.61 4.617 4.8 7.587 7.9 8.913 9.2 5 180 182.07 9.448 5.2 14.352 7.9 21.705 11.9 阳性质控1 180 0.23 0.018 7.8 0.020 8.8 0.022 9.7 阳性质控2 180 177.36 11.889 6.7 12.969 7.3 16.126 9.1

11.3 特异性和灵敏度

11.3.1 特异性

共5043份血清和血浆样本，来自于乙肝低流行性的全血献血志愿者，于3个临床测定点测定。初次和重复测定阳性率分别为0.46%（23/5043）和

0.16%(8/5043)。8个重复测定阳性的样本中有一个经过特异的乙肝表面抗体中和试验确认了乙型肝炎病毒的存在。500个来自于医院病人的样本，有3个样本是重复反应阳性，并经中和试验确认都为阳性。50个匹配的血清和血浆样本，无重复测定阳性，其中只有匹配的血浆样本参与了特异性的计算。333份样本来自于与乙肝感染无关处于其他疾病状态的人群，这些样本包含着潜在的干扰物质，7个样本重复测定阳性，其中6个样本确认为阳性。见表（二）。

表（二）Architect HBsAg在下述样本中的反应性

分类 数量 初次测定阳性 重测定阳性 确认试验阳性

(％总数) (％总数) (％重测定阳

性)

志愿者 血清 2537 7 (0.28%) 4 (0.16%) 1 (25.00%) 血浆 2506 16（0.64%) 4 (0.16%) 0 (0.00%) 志愿者总计 5043 23 (0.46%) 8 (0.16%) 1 (12.50%) 病人标本 500 3 (0.60%) 3 (0.60%) 匹配的血浆/血 清对 50 0 (0.00%) 0 (0.00%) 处于其他疾病 状态，含潜在 干扰物的血清330 8（2.40%) 7 (2.10%)

标本

11.3.2 灵敏度

Architect HBsAg 灵敏度≤0.05 IU/ml

3 (100%) 0 (0.00%)

6 (85.71%)

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注：雅培实验室使用HBsAg ad/ay 参考品，通过线性递减的方法得到Architect HBsAg 灵敏度为0.15到0.29 ng/ml。共503份血清和血浆样本，分别来自于343个已知乙型肝炎病毒感染的人群，10个急性乙型肝炎病毒感染者，50个慢性乙型肝炎病毒感染者，100个乙型肝炎感染高危人群。在这503个样本中，408（81.11%)个样本重复测定阳性并经特异性抗体中和试验确认为阳性。见表（三）。

表（三）Architect HBsAg在HBV感染和高危人群中的反应性

分类 数量 重测定阳性 确诊试验阳性(％重

(％总数) 测定阳性)

预选的HBsAg阳性

标本 343 343 (100.00%) 343 (100.00%) 急性HBV感染 10 10 (100.00%) 10 (100.00%) 慢性HBV感染 50 50 (100.00%) 50 (100.00%) HBV感染高危人群 100 5（ 5.00%) 5 (100.00%)

总计 503 408 (81.11%) 408 (100.00%)

根据对6429份血清/血浆样本的结果（表二、三），Architect HBsAg的特异性为99.87%（6,001/6,009），在95%的可信区间为99.74至99.94。

12. 参考范围

<0.05 IU/ml 阴性 13. 临床意义

乙肝表面抗原（HBsAg）阳性，表示乙肝表面抗原（HBsAg）有反应性，结合其他乙肝指标综合判断。

14. 有关引用文件

15.1 免疫检验室内质控标准操作程序。 15.2 检验结果审核程序。 15.3 标本送检和接收程序。

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