土壤微生物的分离及鉴定 - 图文

微生物实验报告

——土壤微生物的分离筛选纯化与鉴定

山东大学生命科学学院2011级生物基地

（周一下午*组）

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同组者： 指导老师：

时间：2012年12月9日——2012年12月21日

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摘要

利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，通过对菌落形态的观察、染色鉴定以及一系列的生理生化试验的结果，通过查阅《伯杰氏系统细菌学手册》对照种属特征最终判断所分离纯化的细菌所属的属。 关键词

土壤微生物，分离鉴定，生理生化，酶活测定，《伯杰氏系统细菌学手册》 前言

土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm～30 cm的土层中菌数最多，随土层加深，菌数减少。

通过土壤微生物的分离纯化，得到纯种，再进行相关的实验，如：菌落观察、革兰氏染色、芽孢染色、生理生化试验等，根据实验结果，查阅《伯杰氏系统细菌学手册》确定所分离纯化细菌所属的属。在此过程中熟悉相关操作。 一． 实验目的 1.学会设计实验方案；

2.分离目的菌，掌握几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；

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3.复习巩固显微镜使用方法；

4.复习配制培养基的一般方法和步骤、复习各种灭菌方法和操作步骤；

5.复习、掌握细菌稀释分离、划线分离等技术。复习并掌握平板倾注 法和斜面接种技术，了解培养细菌的培养条件和培养时间。复习平板菌落计数法；

6.复习掌握细菌的简单染色、鞭毛染色、革兰氏染色的基本原理和操作方法，复习霉菌的小室培养法；

7.复习生理生化试验的原理及操作方法，学习测定酶活的实验方法； 8.学会利用《伯杰氏系统细菌学手册》对所分离纯化的细菌定属。 二．实验原理

1.产果胶酶菌株的筛选

配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。

刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。当果胶被果胶分解菌分泌的果胶酶分解后，刚果红-果胶的复合物就将无法形成，从而在培养基中形成以果胶分解菌为中心的透明圈，这样我们就可以通过是否产生透明圈来筛选果胶分解菌。 2.产几丁质菌株的筛选

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配制以几丁质为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用几丁质的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产几丁质酶的菌株。因为几丁质不能溶解于培养基，故在固体培养基平板上表现为浑浊，若菌株能够产生几丁质酶，则在培养基中形成以菌落为中心的透明圈，因此可以通过是否产生透明圈来筛选几丁质酶产生菌株。

为筛选到真菌，采用加入链霉素来抑制细菌生长。 3.菌落形态描述

通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。 4.单染色观察个体形态

单染色即用单纯的种染料进行染色，多数采用美蓝、结晶紫或石碳酸复红等碱性染料。此法仅能显示细胞的外部形态，而不能辨别其内部结构。染色前必须将细胞固定，其目的是杀死细菌，并使它粘附在载玻片上。此外，还可以增加菌体对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。无论用哪种方法都应尽量使细菌维持原有的形态，防止细胞膨胀或收缩。

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5.革兰氏染色法

革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料初染液；媒染剂 ；脱色剂和复染液。碱性染料初染的作用像在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95 ％的酒精。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。 6.芽孢染色

芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子（endospore），通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生部位、芽孢囊是否膨大等特征都是细菌分类的重要指标。与正常细孢或菌体相比，芽

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生成量又与反应液中甘露聚糖酶的活力成正比。因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中甘露聚糖酶的活力。 13.分类鉴定方法

根据菌落形态（包括细菌的运动性），镜检形态（采用显微镜镜检法获取微生物基本信息。如形态、有无芽孢等特征、革兰氏染色结果等）等指标查伯杰氏手册，确定微生物基本范围，暂定菌属。 三．实验材料 1. 土样 7号土样 2.菌种

从土壤中分离得到的产果胶酶的细菌和产几丁质酶的霉菌。 3.培养基

几丁质酶筛选培养基 液体PDA培养基 固体PDA斜面培养基 几丁质酶发酵培养基 果胶酶筛选培养基 液体种子、发酵产酶培养基 固体斜面培养基 固体淀粉培养基

固体油脂培养基 葡萄糖发酵培养基（附德汉式小管） 蛋白胨水培养基 乳糖发酵培养基（附德汉

式小管） 葡萄糖蛋白胨水培养基 牛肉膏蛋白胨半固体培养基 4.溶液和试剂

酵母膏，KH2PO4，K2HPO4，FeSO4 ，MgSO4·H2O， ZnSO4，几丁质，马铃

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薯，蔗糖，琼脂，果胶， MgSO4，葡萄糖，酵母粉，蛋白胨，NaCl，可溶性淀粉，蒸馏水，香油或花生油，1.6%中性红水溶液，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，乳糖，革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏（Lugol）碘液，95%乙醇，番红复染液，乙醇，5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，甘油，甲基红指示剂，乙醚，吲哚试剂，无菌水，刚果红，DNS等。 5.其他器材

平板，试管，玻璃棒，三角瓶，量筒，移液管，移液器，烧杯，载玻片，盖玻片，滴管，漏斗，酒精灯，德汉氏小管，U 型玻棒，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），普通光学显微镜，血球计数板，计数器，接种环，接种针，电子天平，分析天平，试管架，称量纸，标签纸， 吸水纸，擦镜纸，滤纸，加热器，高压蒸汽灭菌锅，恒温箱，，纱布，解剖刀，镊子，载玻片夹子，止水夹，记号笔等。 四．实验步骤 1.土样分离

（1）配制果胶酶筛选培养基250mL,几丁质筛选培养基200mL,0.85％的生理盐水200mL。

（2）取5支试管，每支装入9mL生理盐水，取一只300mL锥形瓶，装入90mL生理盐水，加入少许玻璃珠。将培养基和生理盐水包好、灭菌备用。

（3）将10g土样（7号）溶解到装有90mL0.85％的生理盐水的三角瓶中，摇床30min左右，然后放在30℃恒温培养箱中静置15min。

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2.产果胶酶细菌的筛选及产几丁质酶霉菌的筛选

用一支无菌吸管吸取1ml土壤悬液加入到盛有9ml无菌水的试管中充分混匀，此为10-1稀释液，以此类推制成10-2、10-3两种稀释度的土壤溶液（如下图）；

产果胶酶细菌的筛选

（1） 冷却果胶酶筛选培养基——倒平板（6个）。

（2） 选取10-1和10-3两个稀释度，每稀释度3个平板，每平板加液

0.2ml，刮刀涂布，30℃倒置培养 1-2天。 产几丁质酶霉菌的筛选

（1） 冷却几丁质酶筛选培养基,无菌操作加链霉素0.2mL——倒平

板（6个）。

（2） 选取100和10-2两个稀释度，每稀释度3个平板，每平板加液

0.2ml，刮刀涂布，30℃倒置培养3-4天。

3.菌种的分离与纯化（斜面菌种保存）（液体种子）及菌种能力检测 菌种的分离与纯化

（1）培养后，如菌落周围有透明圈，将平板菌落用刚果红染色，具体方法为：用0.5%的刚果红染色15~20分钟后，倒掉刚果红，用1M

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的NaCl脱色几分钟直至观察到透明圈。出现透明圈则说明此菌具有产果胶酶/几丁质酶的能力。 （2）选取此菌进行菌落描述。

（3）用接种环挑取较大透明圈的单菌落至筛选培养基平板，划线分离单菌落。

划线分离的具体方法是：先在平皿上划定区域，然后将接种针在火焰上进行灭菌操作，取含菌种的培养皿，在火焰上方（注意：不能离火焰太近）打开培养皿盖，先拿接种针在上盖处划线以降温，然后用接种针轻挑所选菌落一到两

下，将平皿盖上放好，再取刚刚冷却了的干净平皿在1区进行划线接种操作。操作完毕后对接种针进行灭菌操作，完成后在火焰上方打开平皿盖，将接种针冷却后从1区引线到2区，再如图所示划线，划完后引线到3区，同上进行划线，划线完毕后盖盖平放；

（4）培养后观察是否为纯菌，若菌落形态一致，则挑取单菌落至斜面培养基中培养至长好。若不纯则分别挑取形态不同的菌落分别在筛选平板划线，刚果红确定透明圈，重复挑取和纯化步骤直至得到纯菌落。

（5）将菌种点种在选择培养基上，记录透明圈直径，以区分菌种的能力。

（6）挑取菌种至固体斜面培养基中培养，将斜面置于4℃冰箱保存。

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菌种能力检测

（1）分别配制果胶酶筛选培养基和几丁质酶筛选培养基，110 度灭菌 20-30 分钟，冷却后倒平板。几丁质酶筛选培养基加入配好的链霉素1ml/L培养基后再倒平板。

（2）在培养皿盖周边用记号笔做好标记，将分离纯化的细菌霉菌分别点种于平板上（注意：点种的量不宜过多，以 3～4个为宜），在30℃培养箱中培养 1～2 天（霉菌2～3天），取培养后的果胶酶筛选培养平皿用 0.5％的刚果红染色 15-20min 后，倒掉刚果红，用 1mol/L 的 NaCl 脱色几分钟至观察到透明圈，霉菌直接观察透明圈，测量并记录透明圈的大小。 4.细菌菌落形态观察 5. 细菌的革兰氏染色 （1）制片

取片擦净，并烘干，取活跃生长期细菌按常规方法（酒精灯旁边 接种细菌）涂片（不宜过厚）、干燥和固定。 （2）初染

滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1.5min后倾去染液，水洗至流出水无色。 （3） 媒染

先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min，倾去碘液，水洗流出水无色。 （4） 脱色

将玻片上残留水用吸水纸吸去，在白色背景下用滴管覆盖95% 乙醇脱色30s，然后立即用水洗去乙醇。

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种1支，2号菌种1支，第4支不接种，作为对照。另取乳糖发酵培养基4支，分别接1号菌种1支、2号菌种1支，2号菌种1支，第4支不接种，作为对照；

（3）将已接种的和作为对照的8支试管均置37℃中培养1～2d； （4）观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡。 吲哚试验

（1）用标签纸在各试管外壁上分别标明培养基的名称和所接种的细菌号；

(2)取4支蛋白胨水培养基试管，分别接1号菌种1支、2号菌种1支，2号菌种1支，第4支不接种，作为对照；

（3）将已接种的和作为对照的4支试管均置37℃中培养1～2d； （4）向蛋白胨水培养基内加入3～4滴乙醚，摇动数次，静置1min，

待乙醚上升后，沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂。在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。

配蛋白质水培养基，所用的蛋白胨最好用含色氨酸高的，如用胰蛋白胨水解酪素得到的蛋白胨中色氨酸含量较高。 甲基红试验

（1）用标签纸在各试管外壁上分别标明培养基的名称和所接种的细菌号；

(2)取4支葡萄糖蛋白胨水培养基试管分别接1号菌种1支、2号菌种1支，2号菌种1支，第4支不接种，作为对照； （3）将已接种的和作为对照的4支试管均置37℃中培养1～2d；

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（2）向葡萄糖蛋白胨水培养基培养物内加入甲基红试剂2滴，培养基变为红色者为阳性，变为黄色者为阴性。 11.细菌及霉菌的液体酶活测定 细菌液体酶活测定

(1)种子培养：选取透明圈最大的菌测定液体酶活。从长好的平板上挑取单菌落接种到液体种子试管培养基中，30℃摇床培养1d左右。 (2)发酵培养：按接种量的5%将种子培养基接到发酵产酶培养基摇瓶中，摇瓶为300ml三角瓶，装液量为50ml，30℃培养，每隔12小时取样测酶活。

(3)酶活的测定 采用DNS法，规定每ml果胶酶液降解果胶底物每分钟产生1 μg还原糖为1个酶活单位。 具体方法如下：

绘制标准曲线：配置0.1 mol/L的葡萄糖溶液，然后将其稀释1倍、2倍、3倍和4倍。取2.0 ml稀释液加入3.0 ml DNS，煮沸5分钟，冷却后加水15 ml，再将其稀释5倍，540 nm下测定吸光度。（标准曲线已有）。

样品吸光度测定：吸取0.2 mL适当的稀释酶液于试管中，加1．8 mL、pH 7.0的磷酸盐缓冲液配制的浓度为1％的果胶底物溶液，50℃水浴反应30 min后，立即加入2 mL的DNS终止反应，沸水浴10 min，冷却后蒸馏水定容到12.5 mL，摇匀。

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对照：吸取0.2 mL稀释酶液于试管中，加2 mL的DNS和1.8 mL、pH 7.0的磷酸盐缓冲液配制的浓度为1％的果胶底物溶液，50℃水浴反应30min，沸水浴10 min，冷却后蒸馏水定容到12.5 mL，摇匀。在540 nm下测定其吸光值。 霉菌的液体酶活测定 （1） 种子培养

选取透明圈最大的菌测定液体酶活。从长好的平板上挑取单菌落接种到液体PDA培养基中，30℃摇床培养1d左右。 （2） 发酵培养

按接种量的5%将种子接到发酵培养基摇瓶中，摇瓶为300ml三角瓶，装液量30ml，30℃培养，（一瓶足够测定）。每隔12小时取样1ml测酶活。 （3） 酶活的测定

采用DNS法，酶活力单位定义为: 在上述反应条件下, 每分钟释放相当于1mol N-乙酰氨基葡萄糖( NAG)NAG 所需酶量为1 个酶活力单位(U). 具体方法如下：

样品吸光度测定：① 吸取0.2 mL酶液于试管中，加1.8 mL、pH 7.0的磷酸盐缓冲液配制的浓度为0.5％的几丁质底物溶液，37℃水浴反应30 min后，立即加入2 mL的DNS终止反应，沸水浴10 min，

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冷却后蒸馏水定容到12.5 mL，摇匀。

对照：吸取0.2 mL稀释酶液于试管中，加2 mL的DNS和1.8 mL、pH 7.0的磷酸盐缓冲液配制的浓度为0.5％的果胶底物溶液，37℃静置30min，沸水浴10 min，冷却后蒸馏水定容到12.5 mL，摇匀。在540 nm下测定其吸光值。

标定时用蒸馏水做空白，若吸光度数值超过1.0，需要稀释后测定结果。

将测定结果减去对照则为酶活数据，吸光度越大，表示酶活越高，根据标准曲线将吸光度换算为酶活单位。

12.查阅《伯杰氏系统细菌学手册》对所分离纯化的细菌定属。 五．实验报告

1. 土壤中细菌菌落数量及特征

菌落特征 菌落 大小 颜色 干湿 边缘 表面 中央 数量 24

1 2 3 4 5 6 7 8 小 小 小 较小 较小 较小 中等 中等 白色 橙色 深黄色 鹅黄 浅灰橙 白色 白色 前灰白 干燥 湿润 湿润 湿润 湿润 干燥 干燥 湿润 边缘干整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 光滑 光滑 光滑 光滑 光滑 光滑 光滑 光滑 凸起 凸起 凸起 微凸起 不凸起 不凸起 不凸起 微凸起 1 6 3 1 1 2 3 3 9 中等 浅灰白 燥，中央湿润 褶皱 较光滑 微凹陷 4 10 11 菌种1 菌种2 菌种3 极小 较小 中等 中等 中等 白色 浅灰黄 浅黄色 黄色 白色 湿润 干燥 湿润 湿润 湿润 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 光滑 光滑 光滑 光滑 光滑 微凸起 微凸起 凹陷 凹陷 凹陷 5 2 2 1 1 注：以上数据为土壤悬液稀释1000倍后0.2ml悬液中的菌含量及种类 2.简单染色

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菌种1 菌种2 菌种3 菌种 菌体形状 3.细菌的革兰氏染色

菌种1 球形 菌种2 杆状 菌种3 球状

菌种1 菌种2 菌种3 菌种 革兰氏染色结果 4.细菌的芽孢染色

菌种1 G+性 菌种2 G+性 菌种3 G+性

菌种1 菌种2 菌种3

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菌种 是否具有芽孢 菌种1 有 菌种2 有 菌种3 有 5.细菌运动性检测——半固体穿刺法

菌种 运动性观察结果 6.霉菌小室培养

菌种1 无运动性 菌种2 无运动性 菌种3 无运动性

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霉菌1 霉菌2

霉菌3 霉菌4

菌种 菌种1 菌种2 端膨大成球形 未记录 菌落特征

菌丝无隔，分支状，部分菌丝上直接生出菌丝梗，顶菌丝有隔，无假根，顶端不形成膨大的球形包囊，成菌种3 扫帚状 菌丝有隔；孢子丝，多次分支形成几轮对称或不对称菌种4 的小梗，小梗顶端有孢子，孢子梗顶端不膨大（无孢28

囊）；无假根 7.淀粉水解试验

菌种 菌种1 菌种2 菌种3 8.油脂水解试验

能否水解淀粉 能 能 能 水解圈直径/cm 0.7 1.4 0.5

菌种 菌种1 29

能否水解油脂 能 菌种2 菌种3 9.糖发酵试验

能 不能 1号

葡萄糖 乳糖

菌种 菌种1 菌种2 菌种3 空白对照 10.IMViC试验

葡萄糖 + - - -

乳糖 - - - - 30

1号

吲哚试验 甲基红试验 菌种 菌种1 菌种2 菌种3 对照 11.液体酶活测定

第1次 实验组 对照组 酶活 实验组 第2次 对照组 酶活 实验组 第3次 对照组 酶活 实验组 第4次 对照组 酶活 第5次 实验组 对照组 31

吲哚试验 + - - - 甲基红试验 - - - - 细菌（菌种1） 0.081 0.245 -0.164 0.089 0.146 -0.057 0.466 0.075 0.039 0.430 0.275 0.155 0.076 0.340 酶活 实验组 第6次 对照组 酶活 -0.264 0.143 0.590 -0.447 12.酶活曲线 细菌酶活曲线

标准曲线 13.细菌定属 细菌1 根据伯杰氏手册，由于细菌普通染色观察为球形或杆形，革兰氏 染色为G+性，有芽孢，半固体穿刺为无运动性，无鞭毛，生理生化试32

验中可以分解淀粉，可以分解油脂，可以分解葡萄糖，不可以分解乳糖，甲基红实验变黄，吲哚实验产生玫瑰吲哚环，菌落特征为中等大小，浅黄色，湿润，边缘整齐，中央略凹陷，表面光滑，判断细菌为葡萄球菌。 细菌2

根据伯杰氏手册，由于细菌普通染色观察为杆形，革兰氏染色为G+性，有芽孢，半固体穿刺为无运动性，无鞭毛，生理生化试验中可以分解淀粉，可以分解油脂， 葡萄糖发酵不产酸不产气，不可以分解乳糖，甲基红实验变黄，吲哚实验不产生玫瑰吲哚环，菌落特征为中等大小，黄色，湿润，边缘整齐，中央略凹陷，表面光滑，判断细菌为芽孢杆菌属。 细菌3

根据伯杰氏手册，由于细菌普通染色观察为球形，革兰氏染色为G+性，有芽孢，半固体穿刺为无运动性，无鞭毛，生理生化试验中可以分解淀粉，可以分解油脂， 葡萄糖发酵不产酸不产气，不可以分解乳糖，甲基红实验变黄，吲哚实验不产生玫瑰吲哚环，菌落特征为中等大小，白色，湿润，边缘整齐，中央略凹陷，表面光滑，判断细菌为链球菌属。 14.霉菌定属 霉菌2

菌丝无隔，分支状，部分菌丝上直接生出菌丝梗，顶端膨大成球形，根据以上特征判断，该霉菌属于毛霉属。

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霉菌3

菌丝有隔，无假根，顶端不形成膨大的球形包囊，成扫帚状，根据以上特征判断，该霉菌属于青霉菌属。 霉菌4

菌丝无隔，形成匍匐菌丝，有假根，菌丝顶端膨大成球形包囊，根据以上特征判断，该霉菌属于根霉属。 六． 实验心得

（1）通过实验我们学习了微生物实验中基本的操作技能，掌握了配置培养基的一般方 法和步骤、从土壤中分离微生物的方法，对无菌操作技术有了一定的了解，同时使组员 的合作更加高效、密切。 （2）在做关于分离实验时，无菌操作特别重要。因操作不当很容易感染，使所做的平板 或斜面失败，故操作前应先对所要使用的物品进行紫外线灭菌， （包括操作前要给自己的手用75%的酒精消毒） ；操作时应严格遵守操作规程，勿将实验操作在无菌工作台外进 行，避免因人为因素而使实验产生误差。

（3）掌握足够的理论知识是我们能够较好的理解和完成实验的一个先决条件。因此，我 们要学习好相关的理论知识，做好实验前的预习工作。

（4）根据不同的微生物生长对不同环境适应能力不同，实验中我们加入一些特定的物质 （如链霉素等） ，抑制那些不适应该环境的的菌种的生长从而筛选出我们所需的菌种。

（5）微生物与我们生活息息相关，在食品行业中至关重要，作为食

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品专业的学生应认真 学习这门学科，并掌握其实验操作。 七．附表：试验中所需培养基配方 几丁质酶筛选培养基

几丁质 酵母膏 KH2PO4 K2HPO4 FeSO4 MgSO4·H2O ZnSO4 pH 2g 3g 0.3g 0.7g 0.01g 0.5g 0.001g 7.0 110℃灭菌20min。灭菌后降温至不烫手加入配好的链霉素1ml/L培养基。

几丁质酶发酵培养基

几丁质 酵母膏 KH2PO4 K2HPO4 FeSO4 MgSO4·H2O ZnSO4 pH 110℃灭菌20min。

5g 3g 0.3g 0.7g 0.01g 0.5g 0.001g 7.0 液体PDA培养基

马铃薯 蔗糖 pH 110℃灭菌20min。

200g 20g ? 固体PDA斜面培养基

马铃薯 蔗糖 琼脂 pH 110℃灭菌20min。

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200g 20g 18g ?

果胶酶筛选培养基

果胶 酵母膏 K2HPO4 MgSO4 FeSO4 琼脂 pH 110℃灭菌20min。

2g 2g 1g 0.5g 0.01g 20g 7.0 液体种子、发酵产酶培养基

果胶 K2HPO4 MgSO4 酵母膏 FeSO4 琼脂 pH 110℃灭菌20min。

5g 1g 0.5g 2g 0.01g 20g 7.0 固体斜面培养基

葡萄糖 酵母粉 蛋白胨 NaCl 琼脂 110℃灭菌20min。 10 g 5 g 5 g 5 g 20 g 淀粉培养基

蛋白胨 NaCI 牛肉膏 可溶性淀粉 蒸馏水 琼脂 121℃灭菌20min。

10g 5g 5g 2g 1000ml 15~20g 油脂培养基

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蛋白胨 牛肉膏 NaCI 香油或花生油 1.6%中性红水溶液 琼脂 蒸馏水 PH 121℃灭菌20min。

10g 5g 5g 10g 1ml 15~20g 1000ml 7.2 蛋白胨水培养基

蛋白胨 NaCI 蒸馏水 PH 121℃灭菌20min。

10g 5g 1000ml 7.6 糖发酵培养基

蛋白胨水培养基 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 PH 另配20%糖溶液（葡萄糖、乳糖）各10ml 121℃灭菌20min。

1000ml 1～2ml 7.6 葡萄糖蛋白胨水培养基

蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 蒸馏水 PH 121℃灭菌20min。

5g 5g 2g 1000ml 7.0～7.2 37

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/odu7.html