降脂颗粒的质量研究

第１１卷第１期２００５年２月

Ｃｈｉｎｅｓｅ

中国实验方剂学杂志

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

Ｖ０１．１１．Ｎｏ．１Ｆｅｂ．，２００５

降脂颗粒的质量研究

孙风利１，杨立新２，崔淑莲２

（１北京市怀柔区第一医院，北京怀柔

１０１４００；２中国中医研究院中药研究所，北京

１００７００）

摘要：目的：建立降脂颗粒质量标准。方法：ＴＬＣ定性，ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ法测定含量。流动相：乙腈．水（３０：７０）；漂移管温度：１０５％；Ｎ：流速；２．７０ｍＬ／ｍｉｎ。结果：黄芪甲苷线性范围在１．０～５．Ｏｂｔｇ之间；平均回收率９９．１９％；ＲＳＤ＝２．２０％。结论：此方法快速、灵敏、准确，重复性好。为建立降脂颗粒质控标准提供了科学依据。

关键词：降脂颗粒；黄芪甲苷；薄层色谱；高效液相色谱法中图分类号：Ｒ２８４．１

文献标识码：Ｂ

文章编号：１００５—９９０３（２００５）０１．０００７—０３

降脂颗粒是由黄芪等十味中药组成，具有健脾利湿，祛瘀化浊的功能，适用于高血脂症的患者，为保证药物的安全性，有效性和可控性，我们对制剂质量进行研究，建立了６味药材（黄芪、绞股兰、决明子、虎杖、丹参和山楂）的薄层鉴别；对君药黄芪中有效成分黄芪甲苷，采用以蒸发光散射为检测器的高效液相色谱法（ＨＰＬＣ．ＥＬＳＤ）进行含量测定。从而圆满完成了本制剂的质量研究。

ＥＬＳＤ是一种新型质量型检测器，其响应值取决于待测物质的质粒数量和大小，与化合物的光学特性无关，因此适用于不具有发色团，不挥发性的成分，如甾萜、皂苷、内酯类等的测定。本文根据黄芪甲苷的结构特点和化学性质，建立了反相高效液相一蒸发光散射法…。实验证明该法具有快速、灵敏、准确、分辩率高的优点，优于药典规定的薄层扫描法。１仪器与试药

ＨＰｌｌ００高效液相色谱仪（美国惠普）；黄芪甲苷、熊果酸、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚对照品，决明子、虎杖、丹参对照药材（由中国药品生物制品检定所提供）。３批降脂颗粒及阴性样品（由中国中医研究院中药研究所剂型室提供）；试剂均为色谱纯及分析纯。２定性鉴别２．１黄芪怛１

取［含量测定］项下的供试品溶液，作

供试品溶液５ｔｔＬ，对照品溶液３／．ｔＬ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿一甲醇．水（１３：７：２）１０℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以１０％硫酸乙醇溶液，在１０５ｏＣ加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的棕褐色斑点。２．２绞股兰旧１

取本品ｌＯｇ，研细，加甲醇３０ｍＬ，加

热回流１ｈ，滤过，滤液蒸干，残渣加１０％氢氧化钠溶液５ｍＬ使溶解，再加水２５ｍＬ转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取２次，每次３０ｍＬ，合并正丁醇液，用水洗涤２次，每次２０ｍＬ，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水１。２ｍＬ使溶解，放冷，通过Ｄ１０１型大孔吸附树脂柱（内径１．５ｃｍ，长１２ｃｍ），以水１００ｍＬ洗脱，弃去水液，再以７０％乙醇５０ｍＬ洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇ｌｍＬ使溶解，作为供试品溶液。另取绞股蓝对照药材２９，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典２０００年版一部附录ⅥＢ）试验，吸取上述两种溶液各３９Ｌ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿．醋酸乙酯．甲醇．水（１５：４０：２２：１０）１０℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以１０％硫酸乙醇溶液，在１０５℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的棕褐色斑点。

２．３

决明子、虎杖

取本品１５９，研细，加甲醇

为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每ｌｍＬ含Ｉｍｇ的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典２０００年版一部附录ⅥＢ）试验，吸取

５０ｍＬ，浸渍１ｈ，滤过，滤液蒸干，残渣加水ｌＯｍＬ使溶解，再加盐酸ｌｍＬ，置水浴中加热３０ｍｉｎ，立即冷却，用乙醚提取２次，每次２０ｍＬ，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿ｌｍＬ使溶解，作为供试品溶液。另取决明

收稿日期：２００４—０７．０７

通讯作者：孙风利，Ｔｅｌ：１３３８１０２２７８９，Ｅｍａｉｌ：ｚｚｙ＠ｃｈｉｎａｃｏｕｒｔ．ｏｒｇ

子、虎杖对照药材各ｌｇ，分别同法制成对照药材溶液。再取大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品，加甲

１

万方数据

第１１卷第１期２００５年２月

Ｃｈｉｎｅｓｅ

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Ｖ０１．１１．Ｎｏ．１Ｆｅｂ．，２００５

醇制成每ｌｍＬ各含ｌｍｇ的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典２０００年版一部附录ⅥＢ）试验，吸取供试品溶液１０／一Ｌ、对照药材溶液各５ｔｔＬ、对照品溶液５ｔｔＬ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以石油醚（３０—６０。Ｅ）．甲酸乙酯．甲酸（１５：５：１）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（３６５ｎｍ）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，１３光下检视，斑点变为红色。２．４丹参Ｈ１

取本品７９，研细，加水５０ｍＬ，浸泡过

夜，加热回流提取３０ｍｉｎ，静置过滤，滤液用１０％盐酸酸化至ｐＨ２，用醋酸乙酯提取３次，每次１０ｍＬ，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇ｌｍＬ使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材１９，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典２０００年版一部

附录ⅥＢ）试验，吸取上述二种溶液各５以，分别点于

同一硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿．丙酮．甲酸（２５：１０：４）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，再喷以５％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。２．５山楂

取本品７９，研细，加醋酸乙酯２５ｍＬ，超

声处理１５ｍｉｎ，滤过，滤液蒸至２ｍＬ，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加甲醇制成每ｌｍＬ含１ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典２０００年版一部附录ⅥＢ）试验，吸取上述两种溶液各．醋酸乙酯（２０：５：８）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以１０％硫酸乙醇溶液，于１１０℃加热５～７ｍｉｎ，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的紫红色斑点。３含量测定３．１色谱条件

色谱柱：ＺＯＲＢＡＸＲＸ—Ｃ。。（４．６ｍｍ×

１５０ｍｍ），５ｔｔｍ；流动相：乙腈．水（３０：７０）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温：３５℃，ＥＬＳＤ参数：漂移管温度：１０５℃，氮气流速：２．７０ｍＬ／ｍｉｎ。取干燥至恒重的黄芪甲苷

对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ｌｍＬ含上述溶液２…４

６

８、ｌＯｔｔＬ注入液相色谱仪，测定峰面

积，以对照品进样量的自然对数为横坐标，对照品峰面积的自然对数为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，黄芪甲苷在１．０１４～５．０７９９范围内线性良好。其

８

万方数据

回归方程为Ｙ＝４．１５５＋１．７４５Ｘ，ｒ＝０．９９９７。

３．３空白试验按处方中药味比例，自配不含黄芪的群药，按其工艺制成空白制剂，再按供试品溶液制备方法制备并测定，结果空白溶液在与黄芪甲苷对照品相同保留时间处未见明显色谱峰，故认为无干扰。见图３。

３．４精密度试验精密吸取同一供试品溶液，在所确定的ＨＰＬＣ．ＥＬＳＤ条件下，进样１０ｋｔＬ，重复进样５次，求得黄芪甲苷峰面积自然对数的相对标准偏差＜０．５０％，表明仪器的精密度良好。

３．５稳定性试验精密吸取同一供试品溶液（批号０３０９０１）１０“Ｌ，分别于配制后在室温放置０、１、２、４、２４、２８ｈ依次进行测定，结果ＲＳＤ为０．８３％，表明供试品溶液在２４ｈ内稳定。

３．６重复性试验取同一批号（０３０９０１）样品５份，按供试品溶液制备方法和测定法进行操作并测定黄芪甲苷的含量，经计算平均含量为每袋１．３４ｍｇ，ＲＳＤ为２．３２％。

３．７加样回收实验

取已知含量同一批号的样品

适量，精密称定，分别精密加入黄芪甲苷对照品２％氢氧化钾甲醇溶液，按供试品溶液的制备方法制备，测定含量，计算回收率，结果平均回收率为９９．１９％，ＲＳＤ为２．２０％，ｎ＝５。结果见表１。３．８供试品、对照品溶液的制备及测定

对照品溶

液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每ｌｍＬ含０．２５ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，研细，取７９，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入２％氢氧化钾甲醇溶液５０ｍＬ，密塞，称定重量，加热回流３ｈ，放置至室温，密塞，再称定重量，用２％氢氧化钾甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液２５ｍＬ，蒸干，残渣加水２５ｍＬ使溶解，并转移至分液漏斗中，用氯仿一正丁醇（２：１）提取４次，每次２５ｍＬ，合并氯仿。正丁醇（２：１）液，用１％磷酸二氢钾水溶液５０ｍＬ洗涤，弃去１％磷酸二氢钾水溶液，氯仿一正丁醇（２：１）液蒸干，残渣加水１～２ｍＬ

使溶解，放冷，通过Ｄ１０１型大孔吸附树脂柱（内径１．５ｃｍ，长１２ｃｍ），以水５０ｍＬ洗脱，弃去水液，再以４０％乙醇３０ｍＬ洗脱，弃去４０％乙醇洗脱液，继用７０％乙醇５０ｍＬ洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至２ｍＬ量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液５、１０、１５ｔｔＬ

４ｔｔＬ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷一氯仿３．２标准曲线的制备

０．５０７ｍｇ的溶液，制成对照品溶液。分别精密吸取

第１１卷第１期２００５年２月

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Ｖ０１．１１．Ｎｏ．１Ｆｅｂ．，２００５

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

与供试品溶液１０／－Ｌ，注入液相色谱仪，测定，将峰面积及浓度均取自然对数后，用回归方程法计算，求出供试品浓度的自然对数，再转换成供试品的含量，结果见表２。图１，２。

表１回收率试验

批号

黄芪甲苷含量（ｒａｇ／袋）

ＲＳＤ（％）

图１黄芪甲苷对照品Ｉ－ＩＰＬＣ图

图２降脂颗粒ＨＰＬＣ图

图３降脂颗粒空白Ｉ－ＩＰＬＣ图

万方数据

４讨论

参考文献［５］确定了以２％氢氧化钾甲醇溶液作为提取溶剂。分别超声处理３０ｍｉｎ；加热回流提取２ｈ；冷浸２４ｈ，处理，制成供试品溶液并测定，结果证明加热回流提取含量最高，故采用加热回流提取。加热回流时间分别考察了１／２、１、２、３、４ｈ。结果证明２ｈ黄芪甲苷已基本提尽，取３ｈ为提取完全。

供试品溶液用２％ＫＯＨ甲醇溶液提取，黄芪中所含皂苷结构很相似，黄芪皂苷属于环黄芪醇苷。环黄芪醇类皂苷在一定强度的碱液中加热可转化为黄芪甲苷，故本品含量应为环黄芪醇类皂苷以黄芪苷计。

黄芪甲苷结构没有发色基团，只有很弱的末端吸收，为含量测定带来困难，直到目前为止均以双波

长薄层扫描为含量测定依据。采用ＥＬＣＤ检测器，黄芪甲苷可以采用高效液相作为分离和分析手段，扩大了ＨＰＬＣ的应用范围，因此该法值得推广。

在含量测定中对漂移观管的温度、氮气流量和流动相的比例等进行调试和实验，确定了最佳的色谱条件。

参考文献：

［１］周春玲，鲁静．高效液相色谱．蒸发光散射检测测定黄

芪中黄芪甲苷的含量［Ｊ］．中国中药杂志，２０００，２５（３）：

１６６．１６８．

［２］国家药典委员会编．中华人民共和国药典［Ｓ］．２０００年

版．一部．北京：化学工业出版社，２０００．６．［３］

山东省卫生厅编．山东中药材标准［Ｍ］．济南：山东友谊出版社，１９９５．１３７．

［４］李静，何丽一，宋万志．丹参中水溶性酚酸类成分的薄

层扫描测定法［Ｊ］．药学学报，１９９３，２８（７）：５４３．５４７．［５］王宝栗．黄芪药材及其制剂中黄芪甲甙的含量测定方

法研究综述［Ｊ］．中国药品标准，２０００，１（３）１４．

９

降脂颗粒的质量研究

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：

孙风利， 杨立新， 崔淑莲

孙风利(北京市怀柔区第一医院,北京,怀柔,101400)， 杨立新,崔淑莲(中国中医研究院中药研究所,北京,100700)

中国实验方剂学杂志

CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL TRADITIONAL MEDICAL FORMULAE2005，11(1)1次

参考文献(5条)

1.周春玲,鲁静.高效液相色谱-蒸发光散射检测测定黄芪中黄芪甲苷的含量[J].中国中药杂志,2000,25(3):166-168.

2.国家药典委员会编.中华人民共和国药典[S].2000年版.一部.北京:化学工业出版社,2000.6.3.山东省卫生厅编.山东中药材标准[M].济南:山东友谊出版社,1995.137.

4.李静,何丽一,宋万志.丹参中水溶性酚酸类成分的薄层扫描测定法[J].药学学报,1993,28(7):543-547.5.王宝琹.黄芪药材及其制剂中黄芪甲甙的含量测定方法研究综述[J].中国药品标准,2000,1(3):4.

引证文献(1条)

1.冯建立 发酵药物洛伐他汀和红霉素分离纯化的研究[学位论文]博士 2007

本文链接：/Periodical_zgsyfjxzz200501004.aspx授权使用：山西医科大学(sxykdx)，授权号：08a3e012-0a57-40e0-b024-9e9900ef09de

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