利用超声波从茶粕中提取茶皂素实验方案设计

超声波法提取茶皂素

1.材料与方法 1.1实验材料

茶籽饼粕，无水乙醇，丙酮，浓盐酸

8 0 g /L香草醛溶液：称取香草醛 8 g ，置于小烧杯中，加入适量无水乙醇，用玻璃棒搅拌溶解，把溶液转移至容量瓶中，定容至100mL装瓶备用。

体积分数77％H2S04溶液：量取2 3 mL蒸馏水、7 7ml H2SO4 分别装在不同的烧杯里，然后将浓硫酸沿着烧杯壁缓慢加入水中，同时用玻璃棒不停的搅拌．

9 0％含水丙醇：量取质量为 90 m l的正丙醇,将其加入到 1 0ml蒸馏水中, 搅拌均匀，装瓶备用 1.2实验仪器

40目筛，电子天平，超声波细胞粉碎机，旋转蒸发仪，大功率电动搅拌器，恒温水浴锅, 可见分光光度计 1.3实验方法 1.3.1实验流程

1.3.1．1茶籽饼的预处理

将茶籽饼粕用粉碎机粉碎，过40目筛 1.3.1．2浸提剂的选择

我们选用一定体积的乙醇溶液（根据料液比确定）作为提取茶皂素的

浸提试剂

1.3.1．3超声波粉碎机提取

用电子天平称取100g茶籽饼粕（30份）浸泡于一定体积的乙醇溶液（根据料液比确定）中，搅拌均匀后装入合适的容器（根据料液比确定）中，将容器固定于反应架上，启动超生波细胞粉碎机，并设置不同提取时间、乙醇浓度、料液比、超生波功率以及提取液温度等参数，进行提取，浸提完毕后，进行提取完毕后，用纱布过滤得滤液 1.3.1．3加絮凝剂（Al 2(SO4 )3）除杂

絮凝剂可以将浸提液中鞣质、蛋白质、蜡质等不稳定杂质除去，而对于茶皂素的溶解则不会产生影响。 1.3.1．4抽滤

将上述杂质与茶皂素滤液迅速分离 1.3.1．5减压恒温蒸发浓缩

将滤液用旋转蒸发仪真空浓缩至黏稠状，温度为50℃ 1.3.1．6配置待测溶液

加入20mL水溶解，再加入水饱和的正丁醇溶液于分液漏斗中等体积萃取3次，合并正丁醇萃取液浓缩至干，用70％的乙醇溶液溶解并定容至250mL，摇匀备用。 1.3.2茶皂素测定

1.3.2.1 最大吸收波长的确定

茶皂素标准品溶液与香草醛一硫酸显色[6]，以定容空白液为参比液，在 uV—2800紫外可见分光光度计上扫描，其吸收曲线下图所示。

图1 吸收波长曲线

由图可以看出，在波长为545 nm时吸光度最大，因此茶皂素的测定波长为545 nm. 1.3.2.2 标准溶液的配置

称取0.1 g ( 精确到0.0001 g )茶皂素标准品， 用95％乙醇溶解后置入100 mL容量瓶，并用95％乙醇定容。分别吸取0.9，1.8，2.7，3.6，4.5mL于10 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，则得含茶皂素 0.09、0.18、0.27、0.36、0.45 mg/mL五种不同浓度的标准溶液。 2.3.4.3 标准曲线的制作

在最大吸收波长545 nm 处测定不同浓度的 茶皂素标准液的吸光度，以茶皂素含量为横坐标，吸光度为纵坐标，作标准曲线（如下图），

图2 茶皂素标准工作曲线（香草醛一硫酸显色）

并计算回归方程为：A=0.0008 x+0.0257，相关系数 r = 0.9993，由R20.9987开方而得。

图2-3 茶皂素标准工作曲线（香草醛一硫酸显色） 13.3.4 茶皂素含量的测定

准确称取1g茶皂素粗产品，用95％乙醇完全溶解，定容至100 ml,得1 mg/ml的茶皂素粗产品溶液。吸取供试液5mL，置50 mL容量瓶中，加香草醛一硫酸显色，充分混匀，用95％乙醇定容，以定容空

白液作参比，于545nm处测定吸光度(A)根据茶皂素标准工作曲线，计算出茶皂素含量

2设计正交实验来确定不同因素对茶皂素提取的影响 超声波细胞粉碎机的超声频率为20HZ 2.1超生波提取时间对茶皂素提取率的影响

因素 超声功率超声时间乙醇浓度提取温度料液比 提取率序号 1 2 3 ／W 800 800 800 ／min 5 10 15 ／％ 80 80 80 ／℃ 50 50 50 1:4 1:4 1:4 ／％ 4 5 6 800 800 800 20 25 30 80 80 80 50 50 50 1:4 1:4 1:4 2.2乙醇浓度对茶皂素的影响

因素 超声功率超声时间乙醇浓度提取温度料液比 提取率序号 1 2 3 4 5 ／W 800 800 800 800 800 ／min 20 20 20 20 20 ／％ 40 60 80 90 100 ／℃ 50 50 50 50 50 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4 ／％ 2.3料液比对茶皂素提取率的影响

因素 超声功率超声时间乙醇浓度提取温度料液比 提取率序号 1 2 3 4 5 6 ／W 800 800 800 800 800 800 ／min 20 20 20 20 20 20 ／％ 80 80 80 80 80 80 ／℃ 50 50 50 50 50 50 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6 ／％ 2.4提取溶液温度对茶皂素提取率的影响

因素 超声功率超声时间乙醇浓度提取温度料液比 提取率序号 1 2 3 4 5 6 ／W 800 800 800 800 800 800 ／min 20 20 20 20 20 20 ／％ 80 80 80 80 80 80 ／℃ 30 35 40 45 50 55 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4 ／％ 2.5超声功率对茶皂素提取率的影响

因素 超声功率超声时间乙醇浓度提取温度料液比 提取率序号 1 2 3 4 5 6

4结果与分析

根据以上实验所得数据，计算各个不同条件下茶皂素的提取率，确定影响茶皂素提取的主要因素 ／W 600 700 800 900 1000 1100 ／min 20 20 20 20 20 20 ／％ 80 80 80 80 80 80 ／℃ 50 50 50 50 50 50 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4 ／％

2.4提取溶液温度对茶皂素提取率的影响

因素 超声功率超声时间乙醇浓度提取温度料液比 提取率序号 1 2 3 4 5 6 ／W 800 800 800 800 800 800 ／min 20 20 20 20 20 20 ／％ 80 80 80 80 80 80 ／℃ 30 35 40 45 50 55 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4 ／％ 2.5超声功率对茶皂素提取率的影响

因素 超声功率超声时间乙醇浓度提取温度料液比 提取率序号 1 2 3 4 5 6

4结果与分析

根据以上实验所得数据，计算各个不同条件下茶皂素的提取率，确定影响茶皂素提取的主要因素 ／W 600 700 800 900 1000 1100 ／min 20 20 20 20 20 20 ／％ 80 80 80 80 80 80 ／℃ 50 50 50 50 50 50 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4 ／％

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