制剂分析 外标法,内标法与混标法

书P83例7（内标法）：本品每1g含樟脑164mg，P86例8（外标法），P86例9本品每1g含黄芪甲苷为0.2mg，供试品制备取样量为1g.（对数方程外标两点法）可参考P231-233，6个验证内容。

小儿热速清口服液中黄芩苷的含量测定(外标一点法)： （1）对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品约10mg，精密称定，置200ml量瓶中，加50%甲醇适量，置热水浴中振摇使溶解，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。（实际浓度为0.0504mg/ml)

（2）供试品溶液的制备：精密量取本品0.5ml，置D101大孔吸附树脂柱（内径约1.5cm，柱高10cm）上，用70ml水，以流量1.5ml/min洗涤，继续用40%乙醇洗脱，弃去7~9ml，收集续洗脱液，置50ml量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得。

（3）标准曲线的绘制：精密吸取浓度为0.0504mg/ml的黄芩苷对照品溶液1.0ml，2.0ml，5.0ml，8.0ml，10.0ml，分别置10ml的量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述对照液10ul注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量X（ug/ml）对峰面积Y进行回归处理，得回归方程Y=25.540x-0.1061（r=1.0000），结果见表1，表明黄芩苷进样量5.04~50.4ug/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，如图。

表1 黄芩苷对照品的线性关系考察

进样量(ug/ml) 峰面积 回归方程 相关系数 5.04 128.7 10.08 257.5

25.20 643.1 Y=25.540x-0.1061 r=1.0000 40.32 1029.6 50.40 1287.3

（4）专属性试验：在与样品测定完全相同的条件下，分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液及阴性对照液各10ul，进样分析，观察色谱图。如图2，阴性无干扰，说明该实验方法的专属性较强。

（5）

A为对照品溶液 B为阴性对照液 C为供试品溶液

（6）精密度试验：精密吸取其浓度为25.20ug/ml的黄芩苷对照品溶液10ul。重复进样6次，测得黄芩苷的峰面积积分值，详见表2。

表2 精密度试验结果

峰面积 均值 RSD 643.1 643.5

642.9 643.1 0.11% 641.7 643.5 644.2

从上表可知进样6次黄芩苷峰面积的均值为643.1，RSD为0.11%（n=6），说明仪器的精密度良好。

(6)重复性试验：取同一批号的样品，分别按照（2）项下方法平行制备6份供试品，按样品含量测定方法测定，各精密吸取10ul进样，测得结果如表3所示。

表3 重复性试验结果

序号 样品中含量（mg/ml) 平均含量（mg/ml) RSD 1 0.3047 2 0.3124

3 0.3015 0.3059 1.4% 4 0.2997 5 0.3097 6 0.3074

结果表明黄芩苷的平均含量为0.3059mg/ml，RSD为1.4%（n=6），表明方法重现性好。

(7)稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在制备后的0、2、4、6、8h进样10ul，测得各次峰面积。结果如表4所示

表4 稳定性实验结果

时间（h） 峰面积 平均值 RSD

0 257.5 2 257.3

4 257.0 257.5 0.15% 6 258.1 8 257.8

结果RSD为0.15%，表明供试品溶液在8h内稳定。

（8）加样回收率试验：精密量取该样品溶液0.25ml，置50ml容量瓶中，共6份，分别精密加入黄芩苷对照品溶液（浓度为0.0504mg/ml）1.5ml，按（2）项下供试品溶液的方法制备，在上述的色谱条件下进样10ul，测得峰面积，计算黄芩苷的回收率及RSD。结果如表5所示。

表5 黄芩苷加样回收率实验结果

取样量 样品中含量 加入量 测得量 回收率 平均回收率 RSD (ml） （ug) （ug） （ug) (%) (%) (%) 0.25 75.12 149.76 98.7 0.25 75.53 148.83 99.5

0.25 74.97 75.6 147.93 96.5 97.8 1.20 0.25 75.76 147.87 95.4 0.25 76.12 150.23 98.0 0.25 75.07 147.83 96.2

黄芩苷的6个加样回收率均在95%~105%范围内，平均回收率为97.8%，RSD为1.20%，表明方法的回收率良好，准确度较高，方法可行。

本品每1g含黄芪甲苷为0.2mg，供试品制备取样量为1g（外标二点法） 对照品：精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含黄芪甲苷0.515 mg

的溶液,作为对照品溶液。 供试品：取样品1g,精密称定，置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理补

重即得。 (1)线性与范围——线性关系考察

精密吸取对照液1.0，2.0, 3.0， 4.0，5.0 mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密吸取10μL进样，测定峰面积积分值。以峰面积积分

值的对数为纵坐标（.Y)，以黄芪甲苷进样量的常用对数为横坐标（X），绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=0.986 0X+ 5.5520,r= 1 ;黄芪甲苷在5.150~25.75μg范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

进样量进样量对数 峰面积对数 回归方程 相关系数 （ug/ml） 5.15 0.71 5.83 10.30 1.12 6.24 Y=0.986x+5.1320 r=1.0000 15.45 1.19 6.31 20.60 1.31 6.42 25.75 1.41 6.52 6.66.56.46.36.26.165.95.85.700.20.40.60.8浓度对数11.21.41.6y = 0.986x + 5.1322R = 1峰面积对数

(2)专属性——专属性试验

在相同条件下，分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液及阴性对照液各10ul，进样分析，色谱图如下，（（A对照品 B阴性 C样品））阴性无干扰，说明该实验方法的专属性较强。

（3）精密度

精密量取对照品溶液10uL，连续进样6次，测得峰面积积分值如下表

序号 峰面积 峰面积的平均对数 RSD/% 1 230.8 2 230.6 3 231.3 2.36 0.23 4 230.3 5 229.6 6 230.2

由上表可知，RSD为0.23%，表明仪器的精密度良好。

（4）重复性试验

取同一批样品6份，平行制备供试品溶液， 按样品含量测定方法测定，各精密吸取10ul进样，结果如下表 编号 含量（mg/g） 平均含量/（mg/g） RSD/% 1 0.0854 2 0.0850 3 0.0831 0.0853 1.30 4 0.0864 5 0.0858 6 0.0849

上表可知，平均含量为0.0853mg/片，RSD为1.30%，表明方法重现性好。 (5）稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别在制备后的0、2、4、6、8h进样10ul，测得各次峰面积，结果如下所示

间隔时间/h 峰面积 峰面积的平均对数 RSD/% 0 219.8 2 216.5 4 220.6 2.34 1.01 6 223.2 8 218.5 结果RSD为1.01%，表明供试品溶液在8h内稳定。

(6)准确度——加样回收率试验

取6份供试品各0.5g，按100%比例加入待测成分纯品

序号 1 2 3 4 5 6 原有量（mg） 0.1001 0.1004 0.0996 0.1000 0.0999 0.0997

加入量(mg)

0.1000

测得量(mg) 0.2002 0.1996 0.2009 0.1998 0.2009 0.1999 加样回收率/% 100.1 99.2 101.3 99.8 101.0 100.2

平均值/%

100.3

RSD/% 0.7

试验结果表明，所建立的方法加样回收率较高，符合含量检测要求。

十滴水软胶囊中樟脑的含量测定（校正因子内标法）

对照品溶液的制备：精密称取樟脑对照品500mg，置25ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀。（实际浓度20.0002mg/ml）

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约0.8g，精密称定，置具塞试管中，用无水乙醇真要提取5次，每次4ml，分取乙醇提取液，转移至25ml量瓶中，精密加入薄荷脑125mg，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

(1) 线性关系考察：

精密吸取浓度为20.0002mg/ml樟脑对照品溶液0.5、1.3、2.5、3.8、5ml，精密加入薄荷脑50mg，分别加无水乙醇稀释至10ml。精密吸取上述对照液1μl，注入气相色谱仪，进1针。以进样浓度X（μg/ml）对平均峰面积Y进行回归处理，的回归方程。结果如下表1所示：

表1 线性关系考察结果（n=5） 进样浓度X线性范围/ 峰面积 标准曲线 相关系数 （μg/ml） μg/ml 1000.01 250.1 2600.026 652.3 5000.05 1257.4 y = 0.2508x + 0.2892 r=1.0000 1000.01~10000.1 7600.076 1904.6 10000.1 2508.7 樟脑标准曲线300025002000y = 0.2508x + 0.2892R = 12峰面积150010005000020004000600080001000012000进样浓度（μg/ml）

由上表可知，指标成分进样量在1000.01~10000.1μg/ml之间，线性关系较好。

(2) 精密度试验：

精密吸取浓度为5.00005mg/ml的对照品溶液1μl，连续进样5次，测得樟脑峰面积积分值。结果如下表2所示：

表2 精密度试验结果（n=5）

序号 峰面积 平均峰面积 RSD/% 1 1257.5 2 1264.9 3 1261.2 1260.1 0.37 4 1263.8 5 1253.1

由上表可知，仪器精密度良好。 (3) 稳定性试验：

精密吸取浓度为5.00005mg/ml的对照品溶液1μl，每隔2h进1针，连续考察8h。结果如下表3所示：

稳定性试验结果（n=5）

间隔时间/h 峰面积 平均峰面积 RSD/%

0 1258.4 2 1256.7 4 1255.5 1255.1 0.20 6 1253.1 8 1251.7

上述实验表明，指标成分在8h内稳定性好。 (4) 专属性试验：

在与样品测定完全相同的条件下，精密吸取1μl阴性对照液（取缺少樟脑的样品，用与供试品溶液相同的方法，制得阴性对照液），连续进3针，与对照品、

供试品色谱图比较（各色谱图标尺刻度相同），发现阴性无干扰。说明十滴水软胶囊中樟脑的专属性较强。 (5) 重复性试验：

取同一批号本品装量差异项下内容物，混匀，取约0.8g，共6份，平行制备成6份供试液，测得样品中樟脑的含量。结果如下表4所示：

表4 重复性试验结果（n=6）

樟脑含量/平均含量/

序号 取样量/g RSD/%

（mg/g） （mg/g）

1 0.8001 164.0059 2 0.8003 165.0293 3 0.7998 161.9971

164.0118 1.10

4 0.8004 165.0322 5 0.7996 161.9876 6 0.8006 166.0189 由上表可知，仪器重复性良好。 (6) 加样回收率试验： 取同一批号样品0.4g，置25ml量瓶中，共6份，分别精密加入樟脑对照品65.6mg，用与上文相同的方法制得供试液，测得样品中樟脑含量。结果如下表5所示：

表5 加样回收率测定结果（n=6）

序取样量原有量加入量测得量加样回收平均值

RSD/%

号 /g /mg /mg /mg 率/% /% 1 0.4003 65.65392 65.0056 129.9995 99.0 2 0.4001 65.62112 65.0061 130.6212 100.0 3 0.4004 65.67032 64.9991 130.6684 100.0

100.9 1.5

4 0.3996 65.53912 65.0053 131.5533 101.6 5 0.3998 65.57192 64.9983 130.6727 101.6 6 0.3999 65.58832 64.9979 130.7752 102.9

试验结果表明，所建立的方法加样回收率较高，符合含量测定要求。

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