EPS的提取及各成分的测定

一、 胞外聚合物的提取

采用阳离子交换法，离子交换树脂为：陶氏钠型离子交换树脂20~50mesh。 提取缓冲溶液的物质组成：2mmol Na3PO4、4mmolNaH2PO4、9mmolNaCl和1mmolKCl配成1L溶液。 提取步骤：

1、 离子交换树脂在提取缓冲溶液中清洗1h，晾干备用；

2、 取5ml污泥，加入10ml纯水，在4000r/min，4℃条件下离心5min，弃去10ml上清液，加入10ml缓冲液再离心，此过程循环三次(所收集上清液为溶解性EPS)；

3、 最后一次弃去上清液10ml，加入10ml缓冲液，冷冻条件下超声破碎，破碎条件为20W，2min；

4、 称取适量的树脂（约80g/gVSS）置于25ml的烧杯，将破碎液倒入，恒温20℃搅拌2h；

5、 取上清液在10000r/min，4℃条件下离心30min；

6、 再取上一步离心后上清液在同等条件下离心15min，循环3次； 7、 上清液保存在4℃条件下，备用。 二、EPS中多糖的测定(蒽酮比色法)

试剂：0.2%蒽酮(0.2g蒽酮溶于100ml的浓硫酸) 测定步骤： 1、 2、 3、 4、

取EPS样品2ml置于哈希管中； 缓慢注入4ml0.2%蒽酮溶液；

冰浴10min，再在100℃条件下消解10min，最后冰浴10min； 冷却室温后，在625nm处测其吸光度。代入标线计算；

标线的配置用优级纯葡萄糖。 三、EPS中蛋白质的测定(Lowry法) 1、 试剂

试剂一：143mmol/LNaOH和270mmol/LNa2CO3； 试剂二：124mmol/L酒石酸钠； 试剂三：57mmol/LCuSO4；

试剂四：试剂一：二：三=100:1:1配成； 试剂五：福林酚试剂：纯水=1:1。 2、 测定步骤：

① 取EPS样品2ml置于哈希管中 ② 加入2.4ml试剂四，震荡摇匀； ③ 加入0.4ml试剂五，迅速震荡摇匀；

④ 充分静置45min(混合)，在750nm处测定其吸光度，代入标线计算。 标线的配置使用牛血清蛋白。 四、EPS中DNA的测定(二苯胺比色法)

1、二苯胺试剂：1g结晶二苯胺，溶于100ml分析纯冰醋酸中，加60%过氯酸10ml混匀，临用前加入1ml1.6%乙醛溶液。 2、测定步骤：

① 取EPS样品2ml置于哈希管中； ② 加入4ml二苯胺试剂； ③ 60℃水浴1h；

⑤ 冷却后，在595nm处测定吸光度，代入标线计算。 标线的配置使用小牛胸腺DNA。

溶解态EPS是在污泥混合液中以悬浮态存在，沉淀上清液或者低速离心上清液即是；结合型EPS分为LB-EPS和TB-EPS，LB-EPS是通过高速离心提取(文献中是5000r/min)，而TB-EPS需要化学试剂或者其他加热或者超声提取。我们采用的CER法是离心是10000r/min，所以两部分都包括了。

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