第14章 遗传病诊断

第十四章 遗传病的诊断

遗传疾病的诊断是一项复杂的工作，几乎涉及各个临床学科。它既有与其他疾病相同的诊断方法，也有其特殊的诊断方法。遗传疾病诊断除了一般临床诊断方法外，还需要用一些遗传学特殊方法。主要内容包括病史采集、症状与体征、家系分析、染色体检查、生化检查、基因诊断等。遗传学诊断方法既可对已出现症状的患者进行诊断，也可对症状前和出生前的患者的进行诊断。

本章详细介绍了各种遗传疾病的诊断方法和技术，并对现症患者的诊断技术、症状前的诊断技术、产前诊断技术进行了详细说明；本章还重点介绍了基因诊断学的发展、策略、常用技术、应用、问题和展望等问题。

一、基本纲要

1．了解遗传病诊断的常规临床诊断方法。 2．了解系谱分析方法和注意事项。 3．了解遗传病生化诊断的基本方法。 4．掌握细胞遗传学诊断的基本方法和技术。 5．掌握基因诊断的基本原理和主要方法。

6．掌握现症患者诊断、症状前诊断、产前诊断的基本方法。 7．了解基因诊断技术的应用。

二、习题

（一）选择题（A 型选择题） 1．家系调查的最主要目的是 。

A．了解发病人数 B．了解疾病的遗传方式 C．了解医治效果 D．收集病例 E．便于与病人联系

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2. 细胞遗传学检查主要适用于 的诊断。

A.染色体异常综合征 B.遗传性代谢病 C.分子病 D.单基因病 E.多基因病

3. 遗传病诊断时所采集的完整的系谱应该至少包括 以上的家庭成员。

A.一代 B.二代 C.三代 D.四代 E.五代 4. 不能进行染色体检查的材料有 。

A．外周血 B．排泄物 C．绒毛膜 D．肿瘤 E．皮肤 5.生化检查主要是指针对 的检查。

A．病原体 B．DNA C．RNA D．微量元素 E．蛋白质和酶 6．症状前诊断的最佳方法是 。

A．基因检查 B．生化检查 C．体征检查 D．影像检查 E．家系调查 7. 主要适用于检测或诊断遗传性代谢缺陷疾病。

A.染色体检查 B.染色体分析 C.生化分析 D.基因诊断 E.皮纹分析

8．羊膜穿刺的最佳时间在孕期 周时。

A．2 B．4 C．10 D．16 E．30 9．绒毛取样法的缺点是 。

A．取材困难 B．需孕期时间长 C．流产风险高 D．绒毛不能培养 E．周期长

10．基因诊断与其他诊断比较，最主要的特点在于 。

A．费用低 B．周期短 C．取材方便 D．针对基因结构 E．针对病变细胞

11. 根据已知核苷酸序列人工合成的核酸探针称为

A.基因组探针 B.RNA探针 C.寡核苷酸探针 D.cDNA探针 E.核酸探针

12．当 时，可考虑进行基因连锁检测方法进行基因诊断

A．基因片断缺失 B．基因片断插入 C．基因结构变化未知 D．表达异常 E．点突变

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13. 下列不属于基因诊断技术的是

A.Southern印迹法 B.聚合酶链技术 C. 聚合酶链反应-单链构象多态法 D.基因转移技术 E.斑点杂交法 14．核酸杂交的基本原理是 。

A．变性与复性 B．DNA复制 C．转录 D．翻译 E．RNA剪切 15．PCR特异性主要取决于 。

A．循环次数 B．模板量 C．DNA聚合酶活性 D．引物的特异性 E．操作技术 16．PCR最主要的优点在于 。

A．周期短 B．灵敏度高 C．费用低 D．准确性高 E．操作方便

17．通过PCR-RFLP分析，某常染色体隐性遗传病的分子诊断结果如下：父亲（正常）200bp/100bp；母亲（正常）300bp/400bp；儿子（患者）100bp/400bp；现检测到第二胎结果是100bp/300 bp，现判断这个胎儿是 。

A. 正常 B. 携带者 C.患者 D.需性别确定后才能判断 E.现无法判断 18. 若突变基因是由点突变引起的，最好采取下列方法 。

A.PCR B.PCR-SSCP C.染色体检查 D.FISH E.性染色质检查 19．染色体检查的指征有 。

A．发育障碍 B．智力低下 C．反复流产 D．两性畸形 E．以上都是 20. 性染色质检查可以辅助诊断下列哪种疾病 。

A.Tuner综合征 B.21三体综合征 C.18三体综合征 D.苯丙酮尿症 E.地中海贫血 21. 不能用于染色体检查的材料有 。

A．全血 B．血清 C．活检组织 D．羊水细胞 E．受精卵细胞 22. 有下列指征者应进行产前诊断 。

A．夫妇之一有致畸因素接触史的 B．习惯性流产的孕妇

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C．夫妇之一有染色体畸变的 D．35岁以上高龄的 E．以上都是 23. 携带者不可以通过下列 进行检查

A．群体水平 B．细胞水平 C．生化水平 D．基因水平 E．临床水平 24．下列 检测材料不能检测基因表达异常。

A．cDNA B．线粒体DNA C．RNA D．蛋白质和酶 E．代谢产物 25．不能作为分子遗传标记的有 。

A．单拷贝序列 B．微卫星DNA C．RFLP D．VNTR E．SNP 26．核酸杂交结果判断的依据是 。

A．信号出现时间 B．信号位置和强度 C．信号数量 D．信号种类 E．信噪比 27. Southern印迹杂交技术不可用于 。

A.检测基因缺失和插入 B.RFLP连锁分析 C.基因克隆 D.检测基因倒位 E.基因表达水平的分析 28. Northern印迹杂交不可用于 。

A.定量分析蛋白质 B.分析基因是否突变 C.转录本mRNA的大小的分析 D.分析基因表达水平 E.基因表达的组织特异性的分析 29．基因芯片技术的缺点在于 。

A．大规模 B．微量化 C．高通量 D．自动化 E．费用高 30．对于单个碱基的突变，不能采用 技术检测。

A．DNA测序 B．PCR-ASO C．PCR-SSCP D．PCR E．基因芯片 31．作为遗传标记不符合的条件是 。

A．DNA片断较短 B．能够用于基因连锁分析 C．群体中表现多态 D.孟德尔式遗传 E.不受环境影响 32．苯丙酮尿症的诊断不应考虑进行 。

A．临床诊断 B．血清检查 C．尿液检查 D．染色体检查 E．分子诊断 33．家系分析应注意的事项有 。

A．资料的可信程度 B．资料的完整程度

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C．应尽可能地扩大家系范围 D．观察指标必须相同 E．以上都是 34．遗传疾病病史的采集主要内容是 。

A. 一般病史 B. 家族史 C. 婚姻史 D. 生育史 E. 以上都是 35. 家族史即 。

A. 患者父系所有家庭成员患同一种病的情况 B. 患者母系所有家庭成员患同一种病的情况 C. 患者父系及母系所有家庭成员患病的情况 D. 患者父系及母系所有家庭成员患同一种病的情况 E. 以上都不是

36. 通过家系分析可以判断疾病的 。

A. 发病史 B. 遗传方式 C. 遗传度 D. 种类 E. 严重程度

37. 染色体检查（或称核型分析）是确诊 的主要依据

A. 单基因病 B. 分子病 C. 染色体病 D. 多基因病 E. 线粒体病 38. 下列 不是染色体检查的指征。

A. 智力低下者 B. 继发性闭经 C. 多发性流产 D. 性腺以及外生殖器发育异常者 E. 35岁以上的高龄孕妇 39．染色体检查技术使用最多的是材料是 。

A.羊水 B.活检组织 C.外周血 D. 组织培养物 E.骨髓 40. 生化检查特别适用于下列 疾病的检查。

A. 分子病 B. 先天性代谢缺陷 C. 免疫缺陷 D. 遗传代谢缺陷病 E. 以上都是 41. 不能用于生化检查的材料是 。

A. 血液 B. 活检组织 C. 细胞DNA D. 尿液 E. 阴道分泌物等

42. 适合检测诊断遗传性代谢病和其他蛋白质异常导致的遗传性代谢病的实验室方

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法是 。

A. 性染色质检测 B. 染色体核型分析 C. 生化检测 D. 体征检查 E. 所有方法

43. 通过酶活性检测的遗传代谢缺陷病是 。

A. 白化病 B. 组氨酸血症 C. 苯丙酮尿症 D. 半乳糖血症 E. 以上都是 44. 临床上诊断PKU患儿的首选方法是 。

A. 染色体检查 B. 生化检查 C. 系谱分析 D. 性染色质检查 E. 基因诊断 45. 下列 个体不属于携带者。

A. 携带有隐性致病基因，本人表现正常的个体； B. 携带有显性致病基因，但没有外显的正常个体； C. 携带有致病基因，迟发个体； D. 携带有显性致病基因,病情较轻的个体； E. 染色体平衡易位或倒位的个体。 46. 绒毛取样可以在妊娠早期 周进行。

A．5 B．9 C．16 D．20 E．30 47. 脐带穿刺时间最好在妊娠 周左右进行。

A．6 B．10 C．18 D．20 E．30 48．胎儿镜检查的最佳时间是妊娠 周～20周。

A．8 B．12 C．18 D．24 E．30 49. 从孕妇外周血中获取胎儿细胞的方法是 。

A. 流式细胞仪分离技术 B. 磁式细胞分选技术 C. 细胞培养法 D. 显微操作分选法密度 E. 以上都是

50. 提示父母都是致病基因携带者或有新突变发生。

A. 母亲生育年龄在45岁以上

B. 母亲孕早期患过病毒性疾病或接触过致畸因素

C. 婴儿在分娩时有过窒息或产伤 D.母亲有多发自然流产史

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E. 正常父母生一白化病患儿

51. 对致病基因已知、并且定位基本确定但其结构序列还不清楚的疾病，可以考虑采

取基因诊断的方法是 。

A. mRNA检测 B. 基因连锁分析 C. 基因突变的检测 D. DNA印迹杂交 E. DNA测序

52. 基因诊断除了应用于遗传病外,还可以应用于 。

A. 后天基因突变引起的疾病 B. 病原体检测

C. 个体识别、亲子关系判定 D. 法医物证 E. 以上都是 53. 检测未知点突变可用 。

A. 单链构象多态性分析 B. PCR-ASO探针斑点杂交 C. 逆转录PCR D. 增效PCR E. Southern印迹杂交 54．不属于核酸印迹杂交的方法是 。

A. DNA印迹杂交 B. RNA印迹杂交 C. 点杂交 D. 液相杂交 E. 原位杂交

55. 制备寡核苷酸探针时，突变碱基所对应的位置一般位于探针 。

A.5′端1/3区域 B.3′端1/3区域 C.中部1/3区域 D.全长范围之内 E.全长范围之外 56. 目前在实验室手工测序常用方法是 。

A. 小片段重叠法到加减法 B. 化学降解法 C. 自动测序 D. Sanger双脱氧链终止法 E. 基因芯片技术 57. 基因诊断的基本技术是 。

A.核酸杂交 B.聚合酶链反应 C.DNA测序 D.基因芯片技术 E.以上都是

58. 镰状细胞贫血的基因诊断用 为探针作Southern杂交时，就会出现不同的DNA条带。

A.α珠蛋白基因 B.β珠蛋白基因 C.γ珠蛋白基因 D.δ珠蛋白基因 E.ε珠蛋白基因

59. 是基因突变所致遗传病的最有效诊断方法，诊断过程不依赖对代谢机制

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和代谢产物的了解。

A. 染色质检查 B. 染色体分析 C. 生化分析 D. 基因诊断 E. 皮纹分析

60. 血友病A的基因诊断,由于FⅧ基因组织结构庞大，分子病理学改变复杂，对该基因的产前诊断可以通过 进行。

A. Southern杂交 B. DNA测序 C. RFLP连锁分析 D. 基因芯片技术 E. 原位杂交

61. 应用Southern印迹杂交检测基因缺失时探针所对应的DNA片段纯合缺失，则 。

A. 杂交带消失 B. 杂交带片段长度变小 C. 杂交带信号减弱 D. 杂交带片段长度变大 E. 杂交带信号减弱

62. 以寡核苷酸探针作基因诊断时，若待测基因能与正常探针及突变探针同时结合，则表明该个体为 。

A. 正常个体 B. 患者 C. 杂合体 D. 携带者 E. 无法判断 63. ras基因突变的检测可采用 方法进行。

A. PCR-ASO B. PCR-SSCP C. DNA测序 D. 基因芯片技术 E. 以上都是 64. 目前常用PCR法进行检测p53突变的热点是 。

A. 外显子5～8 B. 外显子9～11 C. 外显子9～10 D. 外显子2～4 E. 外显子10～11 65. 分子诊断技术已经在 方面得到应用。

A. 遗传病诊断 B. 肿瘤诊断 C. DNA分型 D. 病原体检测 E. 以上都是

66. 呈常染色体显性遗传的PD（PARKI）致病基因定位在 。

A.2p13 B.6q25.2-27 C.4q21-q23 D.7p24 E.9p34 67. 少年型PD（PARK2）呈 。

A. 常染色体显性遗传 B. 常染色体隐性遗传 C. X连锁显性遗传 D. X连锁隐性遗传 E. 多基因遗传

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68. PD的易感基因包括 。

A. 多巴胺转运载体 B. 多巴胺受体 C. N-甲基转移酶 D. 异哇胍4-羟化酶 E. 以上都是 69．病史采集中应详细记录的内容包括 。

A．发病原因 B．发病过程 C．发病时间、地点 D．治疗情况 E．以上都是

70．通过症状和体征的了解，有助于提示患者可能的 。

A．发病原因 B．遗传方式 C．疾病类型 D．发病机理 E．遗传度 71．Down综合征的确定必须通过 。

A．病史采集 B．染色体检查 C．症状和体征的了解 D．家系分析 E．基因检查 72. 影响家系分析资料准确度的因素 。

A．个体的文化程度 B．家系成员的分散程度 C．被调查者的年龄 D．记忆和判断能力 E．以上都是

73. 进行家系分析时必须注意的遗传学问题包括 。

A．外显不全、延迟显性 B．新突变基因、易位基因

C．动态突变、基因组印迹 D．主基因和遗传背景、基因和环境综合作用 E．以上都是

74. 不能用生化检查确诊的疾病是 。

A．分子病 B．先天性代谢缺陷 C．免疫缺陷 D．染色体病 E．多基因病

75. 生化检查除了对蛋白质和酶结构或功能活性的检测外，还包括了对 。

A．反应底物的检查 B．中间产物的检查 C．终产物的检查 D．受体与配体的检查 E．以上都是

76. 通过酪氨酸酶活性检测的遗传代谢缺陷病是 。

A．白化病 B．枫糖尿病 C．半乳糖血症 D．戈谢病 E．进行性肌营养不良

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77. 通过精氨酸代琥珀酸裂解酶活性检测的遗传代谢缺陷病是 。

A．组氨酸血症 B．酪氨酸血症Ⅰ C．黑朦性痴呆 D．精氨酸琥珀酸尿症 E．糖原贮积病Ⅰ型

78. 通过苯丙氨酸羟化酶活性检测的遗传代谢缺陷病是 。

A．高苯丙氨酸血症 B．苯丙酮尿症 C．半乳糖血症 D．胱硫醚尿症 E．酪氨酸血症I 79. 糖原贮积病Ⅰ型需要检测的酶是 。

A．肝磷酸化酶 B．支化酶 C．红细胞脱支酶 D．α-1,4-葡萄糖苷酶 E．葡萄糖-6-磷酸酶 80. 苯丙酮尿症的血清检测物是 。

A．赖氨酸 B．苯丙氨酸 C．苯丙酮酸 D．酪氨酸 E．酪氨酸

81. 进行性肌营养不良需要检测的酶是 。

A．氨酰脯氨酸酶 B．支化酶 C．肌酸磷酸激酶 D．肝磷酸化酶 E．β葡萄糖苷酶

82. 尿黑酸尿症患者尿排泄物与三氯化铁反应呈现 。

A.绿色 B.淡绿色 C.深棕色 D.灰绿色 E.蓝色 83. 枫糖尿病的尿液检测物是 。

A．磷酸乙醇胺 B．赖氨酸 C．组氨酸 D．酮衍生物 E．γ-氨基丁酸

84.苯丙酮尿症检测苯丙氨酸羟化酶所使用的材料是 。

A．肾细胞 B．肝细胞 C．成纤维细胞 D．白细胞 E．红细胞 85. 产前诊断的物理诊断可以采用的方法是

A．B超 B．X线 C．胎儿镜 D．电子监护 E．以上都是 86. 怀疑胎儿为无脑儿，且孕妇有先兆流产的倾向，此时可采取 措施进行产前检测。

A. 胎儿镜检查 B. B型超声扫描 C. 绒毛取样

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D. 羊膜穿刺取样 E. 以上都不是 87. 不宜做产前诊断的情况有 。

A．要求仅做胎儿性别的检查 B．妊娠时间过长 C．出现先兆流产 D．有出血倾向者 E．以上都是

88. 当羊水中甲胎蛋白(AFP)浓度过高时，可能意味着胎儿是 。

A．无脑 B．开放性脊柱裂 C．脊髓脊膜膨出 D．死胎 E．以上都有可能 89. 绒毛取样法的优点是 。

A．可以在妊娠早期进行 B．引起流产的风险比较高

C．不宜进行长期培养 D．标本容易被细菌、霉菌污染 E．制备染色体的质量不容易控制

90. 基因诊断中用于分析基因结构的材料是 。

A．蛋白质 B．rRNA C．DNA D．tRNA E．mRNA 91. 第三代遗传标志是指 。

A．RFLP B．STR C．SNP D．VNTR E．Amp-RFLP 92. 下列有关多态性连锁分析说法正确的是 。

A. 能完全确定致病基因是否存在于待测者的体内 B. 只需一个多态位点就可满座要求 C. 仅对单个对象进行的连锁分析 D. 需选用人群中杂合度低的多态性位点

E. 与某种致病突变相关的DNA多态性模式可作为寻找和确定该突变的线索 93. 确定蛋白结构和种类的有效方法是 。

A．mRNA检测 B． 蛋白质检测 C．酶检测 D．DNA的检测 E．产物代谢检测

94. Ⅱ型限制性内切酶区别于其他限制酶的特点是 。

A.严格的识别顺序 B.切割位点在识别顺序之外 C.水解磷酸二酯键 D.切割位点在识别顺序之内 E.具有切割和修饰两种作用 95. 基因芯片技术的缺点是 。

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A．诊断时间短 B．检测费用较高 C．可以检测基因的多态性 D．能检测基因突变 E．多个基因、多个位点的同时检测

96. PCR-RFLP是将聚合酶链反应与RFLP方法结合的一种检测技术。该技术适用由于DNA序列的差异，造成的 。

A．内切酶位点的变化 B．新的酶切位点的产生 C．原酶切位点的消失 D．内切酶位点的移位 E．以上都是 97. 初步检测p53基因突变的方法为 。

A．PCR-RFLP B．PCR-SSCP C．PCR-ASO D．RT-PCR E．Q-PCR 98. 探索在转录和翻译水平上疾病发生的科学称为 。

A．分子细胞学 B．分子诊断学 C．分子病理学 D．分子免疫学 E．分子生理学

99. 胚胎着床前诊断是在囊胚 细胞期进行细胞的染色体核型分析和原位杂交。

A．4个 B．8个 C．16个 D．32个 E．64个 100. 进行产前诊断的指征不包括 。

A. 夫妇任一方有染色体异常 B. 曾生育过染色体病患儿的孕妇 C. 夫妇任一方为单基因病患者 D. 曾生育过单基因病患儿的孕妇 E. 年龄小于35岁的孕妇

101. 未来的基因诊断的主要发展方向是 。

A．胚胎着床前诊断 B．母体外周血中胎儿细胞分析技术 C．对常见病进行分子诊断 D．多发病进行分子诊断 E．以上都是 102. 基因诊断存在的问题主要是 。

A．准确性 B．稳定性 C．复杂性 D．基因歧视 E．以上都是 103. 基因诊断所使用的技术是 。

A．生物学方法 B．分子生物学方法 C．细胞生物学方法 D．生物化学方法 E．免疫学方法 （二）填空题

1.遗传病的诊断方法根据诊断时期的不同可分为 、 和 。

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2．遗传疾病诊断的主要内容包括 、 、 、 、 和 。

3．病史采集的关键是材料的 和 ，应重点记录 、 和 。

4．进行家系分析时必须注意的几个遗传现象是 、 、 、 、 和 。

5.系谱分析既可以区分遗传病与 ，又可区分单基因病与 、单基因病中的显性或 以及常染色体遗传病或 。

6.遗传病的诊断可通过病人主诉、查体、询问病史等对该病做出 ，确诊需进行 。

7．除外周血可以制备染色体外， 、 、 、 和 等都可以作为检查材料。

8.细胞遗传学检查包括 和 ，主要适用于 的诊断。 9．生化检查主要是对蛋白质和酶结构或功能活性的检测。该方法特别适于 、 和 等遗传病的检查。此外生化检查还包括 、 、 和 的检查。

10．生化检查的材料主要有 、 、 、 、 和 等。

11． 携带者的检出方法，大致可分为 、 、 和 。

12.有些遗传病家系中除先证者本人外，找不到其他患者，但从症状体征上提示一种遗传病，应考虑是由于 引起的。

13．产前诊断主要从四个方面进行： 、 、 和 。

14．产前诊断主要取材的方法有： 、 、 和 。 15.基因诊断的基本技术包括 、 、 和 。 16.基因诊断的最基本工具包括 和 。

17.基因诊断不受 和 限制，也不受 的限制。

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18.未来的分子诊断将朝着三个主要方向发展： 、 和 。 19.基因探针是一段带有标记的、与待测基因有关的核酸序列，能专一地与 进行杂交。目前基因探针主要有 、 和 三种。

20.根据杂交的分子和方式不同，分子杂交分为 、 、 、 和 五种主要技术。

21.PCR经常结合其他技术进行基因诊断，这些技术包括： 、 、 、 、 和 。

22.在现有的条件下，产前诊断技术可分为四类，即 、 、 和 。

23.基因诊断的途径有 和 2种。

24.常染色体显性杂合子个体的症状前诊断方法有三种，包括 、 、 。

25.以等位基因特异寡核苷酸探针对点突变疾病做诊断时，若待测标本能与正常探针结合，而不能与突变探针结合则为 ；若能与突变探针结合，而不能与正常探针结合则为 ；若能与两种探针同时结合则为 。

26.植入前诊断的基本技术主要涉及三个方面： 、 、 。

（三）是非判断题

1．家系分析是诊断疾病的重要步骤，从患者入手，尽可能多的调查其亲属的患病情况，这有助于判断疾病的遗传方式。

2．在临床应用上，由于染色体检查的指征容易掌握，因此异常核型的检出率常常比较高。

3.染色体核型分析是确诊染色体的主要方法，它也可以辅助诊断某些肿瘤。 4．生化检查主要是对蛋白质和酶结构或功能活性的检测。该方法特别适用于分子病、先天性代谢缺陷、免疫缺陷等遗传病的检查。

5．产前诊断主要从细胞培养、染色体检查、分子诊断三个方面进行。 6．从孕妇外周血中获取胎儿细胞的方法则是一个十分安全的方法。目前这项技

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术已很成熟，成为产前诊断的主流方法。

7.对Bart’s胎儿水肿综合征的检测，既可用RFLP技术，也可用Southern印迹杂交技术。

8．基因诊断是应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出的或辅助临床诊断的技术。

9．对致病基因已知、并且定位基本确定，其结构序列清楚的疾病，可以考虑采取基因连锁检测方法进行基因诊断。

10．基因芯片可以进行微量化、大规模、并行化、高度自动化地处理感兴趣的生物样品，精细地研究各种状态下分子结构变异，了解组织细胞基因表达情况。

11．单链构象多态性技术原理是当双链DNA变性为两条单链后，各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象，因而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。

12．镰状细胞贫血的基因诊断原理在于它的血红蛋白中的α珠蛋白基因发生了突变，其谷氨酸残基（密码子GAG）变为缬氨酸（密码子GTG）。

13．植入前遗传学诊断是指用分子或细胞遗传学技术对体外受精的胚胎进行遗传学诊断，并将胚胎植入子宫。

（四）名词解释题 1．携带者（carrier）

2．系谱分析(pedigree analysis) 3．产前诊断（prenatal diagnosis） 4．绒毛取样法(chorion sampling) 5．基因诊断（gene diagnosis）

6．聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR） 7．遗传标志（genetic marker） 8．核酸杂交(nuclear hybridization) 9．基因芯片技术(gene chip technique) 10．PCR-RFLP（限制性片段长度多态） 11．基因探针（probe）

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因未知，可选择与疾病连锁的多态性连锁分析（Amp-FLP连锁分析，SSCP连锁分析，RFLP位点单体型连锁分析）；若基因已知但异常不明，可选择与标记座位连锁的多态性连锁分析（SSCP连锁分析，Amp-FLP连锁分析，RFLP连锁分析）。

应注意正确选择诊断方案和正确的诊断方法。在诊断过程中具体要注意的问题包括：基因的多效性、不规则显性、遗传异质性、新发生的突变、遗传印迹、动态突变等遗传学问题。

14．基因诊断和传统的诊断方法的主要差异在于直接从基因型推断表型，即越过基因产物直接检查基因的结构而做出产前或发病前的早期诊断。此外基因诊断还具有不受取材的细胞类型和发病年龄的限制，也不受基因表达的时空限制。例如苯丙氨酸羟化酶基因（PAH）就不在羊水和绒毛细胞中表达所以用一般的方法就无法在产前检测。而用基因诊断方法就可以准确无误地检测该基因的缺陷从而做出产前诊断。

15．染色体检查适应证可归纳为下列几个方面：①智能低下、生长迟缓或伴有其他先天畸形者；②夫妇中有染色体异常，如平衡结构重排、嵌合体等；③家族中已发现染色体异常或先天畸形个体；④多发性流产的妇女及其丈夫；⑤原发闭经和男女不育症者；⑥34岁以上的高龄孕妇；⑦有两性内外生殖器畸形者。⑧身材高大，性情粗暴的男性；⑨恶性血液病患者；⑩长期接受X线、电离辐射的人员。

16．酶和蛋白质的定性和定量分析可反映基因结构的改变，是诊断单基因病的主要方法之一，由于主要采用生化手段故称之为生物化学检查。生化检查主要是对蛋白质和酶结构或功能活性的检测。此外还包括了反应底物、中间产物、终产物和受体与配体的检查。该方法特别适用于分子病、先天性代谢缺陷、免疫缺陷等遗传病的检查。生化检查可用于先天性代谢病的产前诊断和新生儿代谢病的筛查。产前诊断中常采集绒毛、羊水、脐带血和皮肤等进行分析。新生儿的筛查最常用的标本是血和尿。生化检查可以分为两个方面：

(1)酶和蛋白质的分析：利用血液和特定的组织，细胞对酶的活性和蛋白质的含量进行检测。主要方法有：电泳技术，酶活性检测，层析技术，免疫技术，氨基酸顺序分析技术等。临床上经常应用的生物化学检测方法是检测酶的缺陷和代谢中间产物。

(2)代谢产物的检测：利用血液，尿液和羊水对代谢产物进行质和量的检测。主

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要方法有：血液滤纸片法，显色反应等。血和尿液由于易采集，加之在方法学上的不断改进，一直受到检测者的采用，目前已能制成滤纸片和利用显色反应进行检测。苯丙酮尿症、枫糖尿症、同型胱氨酸尿症等氨基酸类代谢病可通过枯草杆菌抑制试验及大肠杆菌代谢物抑制实验等简便的相关生化手段检测待检者的血液滤纸片；一些遗传代谢病患者尿排泄物与三氯化铁显色反应，例如：苯丙酮尿症患者的尿呈绿色，酪氨酸血症患者的尿呈绿色并迅速退色，枫糖尿症患者的尿呈灰绿色，组氨酸血症患者的尿呈 淡绿色，尿黑酸尿症患者的尿则呈深棕色。

17．例如镰形细胞性贫血的基因诊断：已知突变基因是编码β珠蛋白链的第6位密码子由GAG变为GTG，从而使缬氨酸取代了甘氨酸，因此可用如下方法进行诊断。

(1)RFLP诊断：利用限制内切酶MstⅡ(其识别序列与切点为CCTNAGG)消化待测的DNA，正常的β珠蛋白基因（βA）和突变的β珠蛋白基因（βS），其第5～7位密码子序列分别为βA：CCTGAGGAG；βS：CCTGTGGAG，可见βS在第6位密码子由原来的A变成T，从而使MstⅡ不能识别，因而比βA少了一个识别位点。如用β珠蛋白的基因作为探针MstⅡ酶切经Southern 杂交后，βA 出现1.15 kb和0.2kb两个杂交片段，而βS只出现1.35kb一个片段，这样就可根据MstⅡ切点的有无而产生的不同长度的限制性片段来直接对HbS进行基因诊断。

(2)ASO探针诊断：由于突变部位和性质已完全明了，也可以合成寡核苷酸探针，用32p标化来进行诊断。此时需要合成两种探针，一种与正常βa基因序列完全一致，能与之稳定地杂交；另一种与突变基因序列一致，能与βs基因稳定杂交，但不能与正常的βa基因杂交。根据杂交结果，就可以把发生了突变的βs基因检测出来。如用ASO探针在斑点杂交中鉴定基因组DNA标本中的点突变的等位基因，以诊断镰状细胞贫血的β-珠蛋白基因中第6密码子的一单个碱基的替换（A→T），导致GAG（谷氨酸）→GTG（缬氨酸）。

(3)PCR-ASO诊断:PCR技术问世以来，ASO诊断又有新的改进，即先PCR扩增长约110bp的基因片段，然后再与ASO探针杂交。这样可减少目的基因DNA用量，并降低与基因组DNA杂交时的非特异性信号。

18．植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis,PGD）。PGD是指用分子或细胞遗传学技术对体外受精的胚胎进行遗传学诊断，确定正常后再将胚胎植入

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子宫。植入前诊断的基本技术主要涉及三个方面：①胚胎组织微活检：目前多采用在6～8个细胞期，通过显微操作技术取出1～2个细胞进行染色体或基因的检查。②PCR技术：单细胞PCR技术的发展，使GSD能用于临床，该技术主要用于单基因遗传病的诊断。采用引物延伸预扩增（primer extension preamplification,PEP）技术，以随机引物对单个细胞基因组进行全基因扩增，使单个细胞的多位点分析成为可能。另外，荧光PCR也是常用的技术。③FISH技术：该技术利用荧光标记的特定探针与固定在玻片上的卵裂球细胞核进行杂交，在显微镜下鉴定染色体是否存在单体、三体等异常。

19．根据家系中各成员的β-珠蛋白基因等位片段的RFLP表现分析，这个胎儿是患者。其父、母、儿子及胎儿的RFLP位点分别如下：父有长度为6.0 kb和3.0 kb的两条等位片段，母有7.6K b和6.0 Kb两条等位片段，这样即可确定出父的6.0kb等位片段和母的6.0kb等位片段分别均与致病基因相连锁，而父的3.0kb和母的7.6kb等位片段则与正常基因连锁。儿子的等位片段长度为7.6kb和6.0kb，分别来自母亲的7.6kb和父亲的6.0kb(与致病基因相连锁)。说明正常儿子是携带者，而胎儿的等位片段的长度均为6.0kb，是6.0kb的纯合体。分别来自于父的6.0kb等位片段(与致病基因相连锁)和母的6.0kb片段(与致病基因相连锁)，故而确定胎儿是β地中海贫血患者。

（霍满鹏 慕明涛）

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