shodex糖类色谱柱使用说明书

Shodex

使用说明书

SUGAR 系列 SUGAR

SH 1011，SH 1821SH 1011SH 1821，SC 1011SH 1821SC 1011，SC 1821SC 1011SC 1821，SP 0810SC 1821SP 0810，SC 1211SP 0810SC 1211，SZ 5532 SC 1211SZ 5532 SZ 5532 感谢您购买Shodex系列色谱柱！在使用之前，请仔细阅读说明书，以保证色谱柱的最佳使用状态和使用寿命。

1 介绍

色谱柱的填料为刚性的苯乙烯/DVB基质的强离子交换树脂，专用于糖类的分离。Shodex SUGAR系列色谱柱在糖类的分离和分析上表现出优秀的性能，是应用于食品、生物化学品、天然产物中糖分析的首选。

Shodex SUGAR系列色谱柱的基本分离原理是体积排阻色谱，除此之外，还有分配色谱的原理和离子相互作用，比如配位交换，样品与抗衡离子互相作用，使得在精细结构上不同的各种单糖得以分离。

另外，SH系列的色谱柱由于具有显著的离子排斥作用，可同时分离有机酸和糖。

2 型号和特点

Shodex SUGAR系列色谱柱有7种型号，每种型号在抗衡离子、孔径尺寸、孔结构以及糖的选择性上有所不同。

表一 型号和特点 型号1) 抗衡离子 分离模式 规格排阻限 理论塔板储存溶剂

2) （mm） 数

SH1011 H+ SEC+IE3) 8*300 1,000 ≥15,000 H2O SH1821 H+ SEC+IE 8*300 10,000 ≥15,000 H2O SC1011 Ca2+ SEC+LE48*300 1,000 ≥12,000 H2O

)

SC1821 SP0810 SC1211 SZ5532

Ca2+ SEC+LE 8*300 10,000 ≥10,000 H2O Pb2+ SEC+LE 8*300 1,000 ≥10,000 H2O Ca2+ P5)+LE 6*250 ≥5,000 25%CH3C

N/H2O

Zn2+ P+LE 6*150 ≥5,000 70%CH3C

N/H2O

5）分配机理

以下六种保护柱可用于表一中的色谱柱。

表二 保护柱 型号 抗衡离子 规格（mm）储存溶剂1) SH-G H+ 6*50 H2O SH系列 SC-LG H+ 6*50 H2O SC和SP系列 SP-G Ca2+ 6*50 H2O SP系列 SC-G Ca2+ 4.6*10 25%CH3CN/SC1211

H2O

SZ-G Pb2+ 4.6*10 70%CH3CN/SZ5532

H2O

KS-G2) Ca2+ 6*50 H2O SC和SP系列

3 使用条件和范围

1）标准使用条件

表三 标准使用条件 型号

SH1011 SH1821 SC1011 SC1821 SP0810 SC1211 SZ5532

2）可用范围

表四 可用范围 型号

SH1011 SH1821

流动相 流速（ml/min0.01N H2SO4 0.5~1.0 0.01N H2SO4 0.5~1.0

H2O 0.5~1.0 H2O 0.5~1.0 H2O 0.5~1.0 25%CH3CN/H2O 0.5~1.0 70%CH3CN/H2O 0.5~1.0 流动相 H2O ~0.05N H2SO4 H2O ~0.05N H2SO4

流速（ml/min） 最大1.5 最大1.5

柱温（℃） 50~60 50~60 70~80 70~80 70~80 50~60 50~60

柱压（MPa） 最高95 最高95

最大5.0 最大5.0

SC1011 SC1821 SP0810 SC1211 SZ5532

H2O~20%CH3CN/H2O H2O~20%CH3CN/H2O H2O~20%CH3CN/H2O H2O~45%CH3CN/H2O H2O~95%CH3CN/H2O

最大1.5 最大1.5 最大1.0 最大1.0 最大2.0

最高95 最高95 最高95 最高95 最高80

最大4.0 最大4.0 最大3.0 最大4.0 最大4.0

4 流动相

用作流动相的纯水必须为去离子水，经至少0.45微孔滤膜过滤。

在使用之前，流动相必须充分脱气，防止气泡产生，影响色谱柱的使用。Shodex SUGAR系列色谱柱在使用时都必须加热，所以脱气尤为重要。建议使用Shodex DEGAS系列脱气设备。 SH系列

尽管可以使用去离子水可作为流动相，但碱金属仍有可能在填料上吸附，会改变柱子的色谱行为，建议在流动相中加入少许的硫酸或磷酸以防止金属离子的吸附。 SC系列和SP0810

基本上使用去离子水作为流动相。极性的有机溶剂也可添加在流动相中，可提高色谱柱对糖醇的分离能力，并减少疏水物质的吸附。添加有机溶剂的比例最大不可超过20%。 SC系列

在流动相中加入盐可提高离子化合物的分离能力。可加入的盐为Ca(NO3)2和CaSO4，pH值范围在3~7之间。另外，如果样品中含有大量的重金属，在流动相中加入10~50ppm的Ca-EDTA，以防止损害色谱柱性能。

SC1211和SZ5532所用的流动相基本上为水和有机溶剂的混合溶液，一般有机溶剂用乙腈。分离机理是基于分配色谱。

请参照表四的使用范围选择流动相。

5 流速

正常情况下，建议使用表三中的流速，表四中注明了可使用的流速范围。

一般来说，糖类在液体中的扩散速度远小于其他物质。流速越慢，分离度越高。在低聚物的分离中，更低的流速能获得更令人满意的分离效果。

6 柱加热

如上所述，糖类在溶剂中的扩散速度很慢，因此，通过加热色谱柱在流动相允许的高温条件下分离能获得更好的分离度。一般情况下，建议使用表三所示的温度。如果SC系列和SP0810在使用时没有加热到50℃，糖的端基差向异构体会被分离，特别注意一定要在合适的温度下使用色谱柱。 SH系列色谱柱不适用于高温下分离蔗糖和蜜三糖（棉子糖），因为色谱柱的填料性质类似于这两种糖的分解催化剂。如果不可避免的要在SH系列色谱柱上分离这两种糖，就必须在40℃左右的条件下使用，以防止糖的分解。

当在SP0810和SC系列色谱柱之前使用保护柱时，保护柱也必须加热，否则，可能导致糖的端基差向异构体被分离或产生峰展宽。如果不加热保护柱，建议选择SUGAR KS-G系列。

7 色谱柱联用

如果不能获得满意的分离效果，可使用相同型号或不同型号的几根色谱柱联用来提高分离度。目前仅限于SP0810与SC系列和SUGAR KS系列联用，而且必须按以下顺序连接。 SUGAR KS+SC+SP0810

如果需要使用保护柱，必须使用与第一根柱子匹配的。

参考保护柱与色谱柱的匹配表或其他关于色谱柱联用的技术文件。

8 样品的处理

通常用流动相来溶解样品。将溶液用至少0.45um的微孔滤膜过滤后再注入色谱柱分析。推荐使用Shodex一次性滤膜。

任何含有蛋白质的样品必须在过滤前将蛋白质除去。

含有重金属离子、表面活性剂（乳化剂）或油性物质的样品，可能会在色谱柱上产生吸附，在样品过滤之前可通过H-型阳离子交换树脂将其除去。

可通过OH-型阴离子交换树脂除去样品中的有机酸。SH系列色谱柱是可以分离有机酸的，不需要这步样品处理，但碱性样品必须调为中性才能进样，否则，色谱柱的性能会有损伤。

9 色谱柱的保存

完成分析过程后，将流速降低至0.3~0.5ml/min，关闭柱温箱，保持泵冲洗色谱柱直到温度降至室温。

当温度降至室温后，停泵，拆下色谱柱并用柱旋塞将色谱柱密封好。将封好的色谱柱放置于没有阳光直射，温度波动小的地方保存。

10 色谱柱性能的恢复

由于Shodex这个系列的色谱柱填料时不同的抗衡离子交换树脂，而样品中所含的离子会与其发生吸附作用和离子交换作用，导致抗衡离子的变化，损害色谱柱性能。因此，有必要对色谱柱进行清洗，恢复其性能。

下表中列出了各个型号色谱柱的清洗溶剂和清洗方法，以恢复色谱柱性能。 表五 色谱柱性能的恢复 型号 溶剂 柱温（℃） 操作过程

0.005N H2SO4 50 SH系列 以0.5ml/min流

速冲洗50ml

SC1011 0.1M Ca(NO3)2 50 以0.5ml/min流SC1821 速冲洗50ml SP08101) 0.2M Pb(NO3)2 70~95 注入50ul，重复

3~4次

SC12112) 0.1M Ca(NO3)2 50 以0.5ml/min流

速冲洗30ml

SZ55322) 0.1M Zn(NO3)2 50 以0.5ml/min流

速冲洗30ml

11 色谱柱性能测试

下表列出了色谱柱性能测试的条件。 流动相

SH系列

SC1011 SC1821 SP0810 SC1211 SZ5532

0.01N H2SO4

H2O H2O 25%CH3CN/H2

O

70%CH3CN/H2

O

流速(ml/min) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

温度(℃) 50 80 80 50 50

进样体积(ul)

5 1%丙三醇

5 1%丙三醇 1%丙三醇

1%丙三醇 1%丙三醇

5 10 5

样品

计算公式：

NTP=5.54X（Rt/W）2

其中NTP：理论塔板数，Rt：保留时间，W：半峰宽。

12 Shodex SUGAR SP0810的介绍

由于色谱柱采用了比其他型号的SUGAR系列色谱柱更软的装填料，使用时要特别注意，尤其是在启动泵和停泵的时候，缓慢变化流速，不要使压力骤然变化过大。

在使用之前，请在阅读Shodex SUGAR系列色谱柱说明书的同时熟记以下的介绍。

Ⅰ 色谱柱的安装和拆卸

（1） 安装色谱柱，启动泵：

1）设置流速为0.2~0.3ml/min

2）将色谱柱两端的柱旋塞取下，在连接管路之前，确保流动相事先已充分脱气，管路已用

流动相清洗。

确认有液体从可管路流出，保持连接管路的通畅。

3）确认流速的设置是正确的，启动泵，除去管路中的空气。

4）保持泵运行状态，将色谱柱按标示的正确方向接入系统中。接好之后，确认两端没有溶

剂泄漏。

5）加热色谱柱至70℃.

6）温度达到设定值后，逐步的增加流速直至正常使用值。 （2） 结束一天的分析过程后，第二天继续分析时：

1）降低泵流速至0.2~0.3ml/min，保持泵运行。 2）关掉柱温箱。

3）到温度降到室温时，停泵。 4）让色谱柱连接在色谱系统中。 （3） 重新开始分析：

1）确认泵流速设置在0.2~0.3ml/min 2）打开柱温箱加热色谱柱。 3）加热色谱柱到设定温度。 4）当温度达设置值时启动泵。 5）逐步的增加流速到正常使用值。 （4） 完成分析后，拆下色谱柱：

1）降低流速至0.2~0.3ml/min，保持泵运行。 2）关掉柱温箱。 3）让柱温降到室温。

4）到柱温降到室温时，停泵，拆下色谱柱。

5）将柱旋塞拧紧，密封好色谱柱，保存于温度波动小的地方。

Ⅱ 仔细的使用色谱柱

（1） 有机溶剂可作为流动相，如乙醇和乙腈，最高浓度不要超过20%。

（2） 任何情况下都要避免泵压力或流速的骤然变化，建议使用无脉冲的泵或在泵系统中安装脉

冲阻尼器，以保证流动相无脉动输出。

（3） 在使用时保持柱温在70~95℃范围内，否则端基异构体会分离出来导致峰展宽。 （4） 每根色谱柱的最大工作压力为3.0MPa。推荐使用压力限制装置。

（5） 最大流速可设置为1.0ml/min，但在柱温40℃条件下，最大流速设置为0.5 ml/min。

根据Ⅰ部分的建议设置泵的启动和停止。

（6） 建议使用保护柱，保护柱不仅可以有效避免杂质对色谱柱的伤害，也减缓了脉冲和压力变

化对色谱柱的影响。

保护柱的选择，请参考说明书部分。

警惕：

不要在规定的压力和流速范围外使用色谱柱，否则，色谱柱的性能会被损害，通过清洗步骤也不能恢复其性能。

13 保证说明

1. Showa Denko K.K.保证：Shodex色谱柱在送达用户处时，如果用户按照使用说明书操作，我们确保色谱柱能达到柱子出厂检定证书的水平（附在色谱柱包装盒中）。对于本说明书没有涉及到的特殊目的的用途，Showa Denko K.K.不作任何保证。 2. 如果柱子的规格与说明书有任何不符之处，请用户在收到柱子后的10天内告知Showa Denko K.K.。Showa Denko K.K.有责任为用户进行柱子的更换。对于任何间接的，或由于和仪器连接而引起的附带的或相应的破坏，无论这种破坏是在担保范围以内，还是由于疏忽引起的，均不在退换柱子的保证范围内。 3. 下列情况不予保修

1）如果没有按照操作说明书操作

2）如果由Showa Denko K.K.指定之外的任何个人或公司重装过柱子 3）如果柱子被处理过

4）如果柱子由使用者转售他人，而未预先书面告知Showa Denko K.K.

5）由于如下原因造成柱子性能和出厂检定证书的水平不一致： a) 电脑病毒 b) 使用者所用的样品，试剂，气体或冷却水中有不纯物 c) 和柱子连接使用的设备，仪器或部件断裂或出现故障

d) 一些不可抗拒的自然灾害如：火，地震，洪水等他自然灾害，恐怖袭击，战争，或

放射性污染。

4. 下列情况不在保证范围内：（i）使用shodex色谱柱或色谱柱任何部件用于分析和制备，Showa Denko K.K.不保证结果的可靠性，准确性，有效性和安全性。（i i）根据相关使用条件，无论是否承诺了这种用途，Showa Denko K.K.不保证在shodex色谱柱使用中可能造成的职业危害， 5. Shodex仪器仅用于实验室，不能用于临床诊断。如将该仪器用于实验室以外的领域，Showa

Denko K.K对此不提供任何保证。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/nvd4.html