医学检验仪器简要攻略 - 图文

南医大仪器检测考试宝典

----何顺桃

桃子出品，必属佳品！

（这是我在师兄的基础上根据老师的划的重点重新编辑的，考试百分之80都在这上，就看这个，我最后考了87.5）

第二节 光电比色法

1、朗伯-比尔定律：当用一束单色光照射到吸收溶液时，其吸光度与液层厚度及溶液浓度成正比。A=kbc C:溶液浓度b:液层厚度 A:吸光度k:吸光系数 2、A=-lgT （T为透射比）

成立条件：待测物为均一的稀溶液、气体等，无溶质、溶剂及悬浊物引起的散射；入射光为单色平行光。

当入射光强度一定时，被吸收的光的强度越大，透过光的强度就越小。光强的减弱仅仅与 有色溶液对光的吸收有关。

透光率: 透过光的强度占入射光的强度的百分比，用T表示.

2、吸收光谱的定义：当依次将各种波长的单色光通过某一有色溶液，测量每一波长下有色溶液对该波长光的吸收程度（吸光度A），然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条曲线，称为该溶液的吸收曲线，亦称为吸收光谱。

3、对于吸收光谱曲线：

? （1）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax

? （2）不同浓度的KMnO4溶液的光吸收曲线形状相似，其最大吸收波长不变； ? 不同物质吸收曲线的形状和最大吸收波长均不相同。

?光吸收曲线与物质特性有关，故据此可作为物质定性分析的依据。

?（3）同一物质不同浓度的溶液，在一定波长处吸光度随溶液的浓度的增加而增大。这个特性可作为物质定量分析的依据。在测定时，只有在λmax 处测定吸光度，其灵敏度最高。? 因此，吸收曲线是吸光光度法中选择测量波长的依据。 4、光电比色计原理：利用光电池或光电管等光电元件作检测器来测量通过有色溶液的透射比和吸光度，进而求出物质含量的方法叫光电比色法，基于这种方法而设计的仪器叫光电比色计。

6光电比色计结构

光源——滤光片——比色皿——检测器——放大——显示

工作原理：从钨丝发出的连续辐射光通过滤光片变成单色光，经透镜会聚在流动比色皿 的中心，透过比色皿的光，再经透镜照射在光电管上，光电管将光信号的强弱转换成电 信号的大小，然后经前置放大、透光度放大、对数放大和浓度调节，可分别得到透光度T、吸光度A和浓度c，三者经A/D转换电路并用三位半数码管显示。

1) 光源：钨丝灯，不足：在点燃时会蒸发出钨分子，使灯丝变细，寿命变短，严重时使灯

壁发黑无法使用；卤素灯：在钨丝灯中加入适量的卤素或卤化物，灯壁多采用石英或者高硅氧玻璃，有更高的发光效率和更长的寿命。两种灯可交流可直流供电。 2) 滤光片：滤光片通过的波长范围越窄、透射比越大，质量就越好。 3) 检验比色皿是否符合要求的方法：先在各比色皿中放入相同的溶液，然后放入仪器进行

测量，在其他条件不变的情况下，读出的透射比误差应该小于0.5%。否则说明误差太大不能使用。

4) 光电检测器：把光信号转换为电信号的装置 （外光电效应-光电管和光电倍增管，光照射在某些金属表面，会有光电子从金属表面逸出， 电子能否逸出物体表面取决于光的频率，与光强无关；在入射光频率不变的情况下，逸出的电子数目与光强成正比。

内光电效应--光电池、光敏电阻、光敏二极管）光深入到物体内部，将物体内部原子中的一部分束缚电子激发成自由电子，但这些电子并不逸出物体，而是留在物体内部从而使物体导电性增强，称为内光电效应。

对检测器的要求：

1.产生的电信号与照射到它上面的光强有恒定的函数关系； 2.波长响应范围大；

3.灵敏度高，响应速度快，产生的电信号易于检测、放大，噪声低。

光电池：光电池产生的光电流与入射光强成正比。

不同材料、不同厂家的光电池，其光谱灵敏范围不一样。 硒光电池的工作范围在380-750nm，包含了整个可见光范围。

缺点：对光响应速度慢，内阻小，不便进行放大；不适用于十分微弱的光的测量。 光电管（真空）：

1) 伏安特性、光照特性、光谱特性（不同光选不同材料的光电管，光电管的光谱灵敏度范

围与阴极所用的材料有关） 2) 光电管具有很高的内阻，产生的电流容易放大，所以光电管比硒光电池更适合于微弱信

号的放大。

3) 光谱灵敏度：即在单位辐射通量下，不同波长的光照射光电管时，产生的饱和光电流与

光波波长之间的关系。

光电倍增管：

光电倍增管的电流是逐级增加的。由于光电倍增管具有放大作用，因此适用做灵敏的弱光探测器。光电管和光电倍增管在使用时，被安装在暗盒内，以便对光和电磁波进行屏蔽。光电倍增管一般用于中、高档仪器。

5）放大电路：放大电路由前置放大电路和对数放大电路组成。经过前置放大器输出信号为透射比T，经对数放大器放大后，A与T之间的关系就变成线性，即可线性显示A

因浓度c正比于吸光度A，所以在工作中，只需要用标准浓度的溶液校对仪器，便可以在 显示装置上直接读取所测样品液的浓度

6）显示装置：放大器送来的模数信号经A/D转换电路并用三位半数码管显示。 8、标准比色皿：国际规定，液层厚度为10mm的比色皿为标准比色皿。（选择） 7、分光光度计结构

光源——单色器（解释）——比色皿——检测器——显示系统

1）光源：氢灯适用波长范围为185~375nm常用于紫外区

2）单色器：是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的装置

组成：入射狭缝——色散元件——准直镜——出射狭缝 作用：

1）入射狭缝：限制杂散光进入；

2）色散元件：将复合光分解为单色光，有棱镜和光栅两种；

光栅是根据光的衍射和干涉原理工作的。λ=（d/n）sinθ（d/n为常数）（n为干涉级数）

3）准直镜：1.从入射狭缝来的光线经准直镜反射，变为平行光投照到色散元件上; 2.将来自色散元件的平行光束聚集在出射狭缝上；

4）出射狭缝：将固定波长范围的光射出单色器，可以限制通带宽度。 分类：

单波长单光束分光光度计：

结构简单，价格便宜。主要适用于定量分析，不适用于作定性分析。另外，结果受电源的波动影响较大

单波长双光束分光光度计：

双光束分光光度计参比信号和试样信号的测量几乎是同时进行的，补偿了光源和检测系统的不稳定性，具有较高的测量精密度和准确度。 双光束分光光度计还能进行波长扫描，并自动记录下各波长下的吸光度，很快就可得到试液的吸收光谱。所以能用于定性分析。

双波长分光光度计（常用于生化分析仪中） 采用双单色器，双波长分光

1、双波长分光光度计工作原理：将从同一光源发出的光分为两束，分别经两个单色器分光后得到两束不同波长（λp ，λs）的单色光，经斩光器使两束光以一定频率交替照射同一样品，测定两个波长下的吸光度差值（ΔA=Aλp --Aλs ），将ΔA 用于计算结果。 根据朗伯- -比尔定律得： 当λp λs相差不太大时，由同一待测溶液产生的光散射吸光度和背景吸光度大致相等，即Ap=As,则有：ΔA= A λp -A λs = (

ελp -ελs)LC

? ? 双波长差吸光度法可以克服溶液浑浊的影响，共存组分吸收谱线吸收叠加的干扰，以及减少比色杯光线不均等优点。

第三节 生化分析技术

1、 生化分析仪最常用分类：连续流动式、离心式、分立式（多采用）、干片式。 2、 结构与工作过程

连续流动式生化分析仪：测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应，均在同一管道中经流动过程完成，又称管道式分析仪。种类：空气分段系统式、试剂分段系统式 优点：价格便宜，无比色杯的吸光性差异。

缺点：第一样本之间的互感率较高。第二，每次测完一批样品后冲洗的时间比较长。

后来由于管道系统结构复杂，不能克服交叉污染，故障率高，操作繁琐，逐步被分立式生化分析仪所替代

向流经管道的液体注入分隔各样品的空气 蠕动泵 由玻璃螺旋管组成

仪器特点：反应器就是转盘。又称为“同步分析”。 优点：能克服交叉感染，速度相比连续流动式快。

缺点：加样、比色、自动化程度比较低。而且它是按项目检测而不是按样品，使用起来不灵活。

干片式分析仪

测定血清中血糖、尿素、蛋白质、胆固醇等的干试剂片。 当加上定量的血清后，在干片的前面产生颜色反应，用反射光度计检测即可进行定量。

1. 样品盘：通过样品盘的转动来控制不同样品的进样。

2. 吸样机构：由样品吸量管、样品探针（带有液面检测器（静电电容方式））和针头清洗槽等组成，用于从样品杯中吸取一定量的样品，然后注入反应杯内。

为防止交叉感染，将脱气水吸到样品探针的前端为止。吸样品时，先在脱气水与样品间吸入空气，再吸入比设定样品量多些的量，然后回吐设定的样品量。在连续分析样品时，自第二次起，只吸入设定的样品量。

3.试剂盘：共两个试剂盘，各有45个试剂瓶。用于放置四种试剂。 R1盘：R1和R4以及稀释液和清洗剂； R2盘：R2和R3以及清洗剂。

试剂瓶：70ml、20ml和7ml三种。

动作：开机时，顺时针方向旋转，使1号试剂瓶处于吸取位置。分析时，转向移动距离最近的方向。

4.试剂吸量机构：由试剂吸量管、试剂探针（包括液面检测器）及针头清洗槽组成，用于从各试剂瓶中吸取一定量的试剂，然后注入反应杯中。其工作原理与吸样机构相同。

5.反应盘：可放置160个比色杯，比色杯为塑料材质，光径长5mm。 6.反应槽：它保持反应杯内的反应液在一特定温度（37℃±0.1℃）

反应槽恒温系统

(1)干式恒温器加热：在比色杯与加热器之间隔有空气，干式恒温的特点是方便，速度快，不需要特殊的防护，但稳定性和均匀性稍差。

(2)水浴式循环加热式： 在比色杯周围充盈有水，加热器控制水的温度。特点是温度准确，

可达±0.1℃，但需要特殊的防腐剂才能保证水质的洁净。

(3)恒温液循环间接加热：它的结构原理是在比色杯周围流动着一种特殊的恒温液(具有无味、无污染、不变质、不蒸发等特点)，在比色杯与恒温液之间又有一个几毫米的空气夹缝，恒温液通过加热夹缝的空气达到恒温。

其均匀性、稳定性优于干式，又有升温迅速，不需特殊保养的优点。恒温控制器可以对25℃、30℃和37℃三种温度进行恒温，根据需要任意选择。

7.搅拌机构：包括两个搅拌棒和两个清洗塔。在各反应杯添加完试剂后，对其进行搅拌。 ?由电机和搅拌棒组成，电机运动带动搅拌棒高速转动，使反应液被充分混匀。 ?搅拌棒的下端是一个扁的金属杆，金属杆表面涂有一层不粘性材料，也有采用特殊的防粘附清洗剂，其作用是减少携带率，从而降低交叉污染率。 8.清洗机构（Rinsing Mechanism）

包括两个清洗装置，用于清除测定完毕后的反应液、清洗反应杯、注入及清除测定水空白时用的去离子水。

9.试剂冷藏装置：放置试剂盘和冷藏试剂，温度保持在5～15℃。同时扫描各试剂瓶的标签

10.光度计：光源采用卤素灯，工作波长325 ~800nm。 ? 光路设计方面采用后分光技术。

? 检测器采用12个固定波长 ，在340 ~800nm之间。 11.操作系统

前分光的光路：与一般分光光度计相同，即光源→分光元件→样品→检测器

后分光的光路：是光源→样品→分光元件→检测器，其光源是先照射到样品杯，然后通过光栅分光，再用检测器检测任何一个波长的吸光度。

后分光的优点：是不需移动仪器的任何部件，可同时选用双波长或多波长进行测定，降低了噪声，提高了分析的精度和准确度，减少了故障率。

后分光技术实现机理

是因为不同物质有其特定的产色基团，因此无论通过溶液的是单色光还是复合光，溶质也只是对特定波长的光产生强吸收效应。

只要能保证光电接收器感应到的是单色光。通过溶液的是单色光还是复合光并不重要，因此为后分光技术提供了可能 。

前分光与后分光的主要区别：在于前分光先分出多个单色光，再照射到比色杯窗口。后分光可连续不断检测不同波长的反应；前分光一般不能进行不同波长项目的不间断检测，通常

只能单项一次测完后，再测第二项。

目前全自动生物化学分析仪多采用后分光，半自动生物化学分析仪也有少数采用后分光原理。

生化试剂：双试剂(常见)，第一试剂先于样本中的干扰物质反应，第二试剂才与被检测物质反应，再进行测定。显色性，单一性

透射比浊法：在光源的光路方向上测量透射光（实际上还包括散射光）强度与入射光强度比值，并通过该比值测定出悬浮液或胶体溶液中质点的溶度，称为透射比浊法

该式与Lamber-Beer定律相似，这是生化分析仪利用透射比浊法进行定量测定的基础，该法可以与吸收光谱法共用一个检测器，所有

生化分析仪，不需增加任何部件，均可利用此法进行测定。

第四节、流式细胞术

1、 流式细胞仪分类：临床型（分析功能）、科研型（分析与分选功能） 2、 分析原理：

3、 分选原理：

激光光源：常把激光点设在液流聚焦处。为保证样品中细胞一个一个分别受到光照并且 照射强度十分一致，须将样品流与激光束正交且相交与激光能量分布峰值处。激光光源的宽度大于被测细胞，为零分辨率信号。

为了提高流式细胞仪的分辨率，发展了狭缝扫描技术：

散射光检测：

前向散射光（FSC)：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度(0.5°～10°)向前方散射的信号，用于检测细胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。

侧向散射光(SSC)：激光束照射细胞时，光以90°角散射的信号，侧向散射光对细胞膜、

胞质、核膜的折射率更为敏感，可提供有关细胞内精细结构和颗粒性质的信息。光散射测量最有效用途：从非均一群体中鉴别出某些亚群，此为血细胞分类的基本原理，但不能分析表面分子 荧光检测：

经过特异荧光素标记细胞后，受激发照射得到的荧光信号。可以定性、定量检测细胞内某种物质的量，大多数流式细胞仪检测荧光的方向与侧向散射光相同。可以利用特定波长的双色性反射镜和带通滤波片将同一方向上的侧向散射光与荧光分开。 滤片系统：

主要元件为滤光片，分长通滤光片、短通滤光片、带通滤光片、带阻滤光片和长波通双色性反射镜等。长波通双色性反射镜：大于特定波长的光通过而将小于等于特定波长的光反射

影响流式细胞术分析的因素： 细胞的荧光染色 激光光源的稳定性 细胞流速的稳定性 细胞悬液样品的影响

流式细胞仪的组成：

① 光学系统：主要是激发和收集光学元件组成

主要由激光器和多组透镜组成，所需的检测的荧光信号，红橙黄绿；

侧向散射光的收集：SS由一与光径成45°、波长为488nm的长波通双色性反射镜（488DL）进行分离。

荧光的收集：488DL滤光片透过的光，射向一个488nm的激光带阻滤过片（488BK），它截止任何残留激光，只透过荧光。

550DL滤光片与光路成45°角，其反射小于550nm的光束到一个525nm的带通滤光片（BP525/30）滤过片。该滤光片将510-540nm的光传递到FL1检测器。

下一个分光长通滤光片600DL，也与光路成45°角。其反射小于600nm的光，并射向（BP575/30）, （BP575/30）将560-590nm的光传递至FL2检测器。 FL3、FL4同理。

② 液流系统：作用是将被测样本管中的细胞通过液体流传递到流动室，经液流聚焦形成单细胞流，使其通过检验区（激光照射区）

核心是流动室，由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央开一个长方形孔，供单个细胞通过，检测区在该孔的中心或下方。流动室内充满了鞘液，鞘液流的作用是将样品流环包，使样品液处于单细胞状态

液流驱动系统：空气泵产生压缩空气，通过鞘流压力调节器在鞘液上施加一个恒定的压力，这样鞘液以匀速运动流过流动室，在整个系统中流速不变。

改变样本的进样速率开关，可提高采样分析的速度。但这并不是提高样品流的速度，而是改变细胞间的距离，使样本流变宽且细胞间距离缩短，这样单位时间内流经激光照射区的细胞数就可以增加。

常把激光点设在液流聚焦处。为保证样品中细胞一个一个分别受到光照并且 照射强度十分一致，须将样品流与激光束正交且相交与激光能量分布峰值处。激光光源的宽度大于被测细胞，为零分辨率信号。要求高分辨时，用低速

③ 电子系统（信号检测系统）

主要由光电装换器件光电二极管、光电倍增管和信号处理电路组成。 ④ 计算机系统（信号分析系统）

控制仪器的运行和数据采集、数据分析。数据显示： ⑤ 数据转换处理系统

流式细胞仪的主要性能指标

灵敏度：衡量仪器检测微弱荧光信号的重要指标，以能检测到的单个微球上最少标有FITC或PE荧光分子的数目表示。目前FCM<100.

分辨率：用变异系数来表示，一般FCM在最佳状态时，CV值<2%。

前向散射光检测灵敏度：可检测到最小颗粒大小，目前可检测直径0.2~0.5um的生物颗粒。

分析速度：表示每秒分析的细胞数量，目前3000~6000个/秒。

4、 带通滤波片波长范围： 上下限为滤波片数值加减15，如525nm对应的是510---540nm 5、 氩离子激光器光谱为488nm

用鞘液的原因：细胞堆积使阻塞管道，影响检验结果，降低速度，激光束无法对准细胞中心 3.1 鞘液原理

标本位于轴心稳定流动，外面包被有鞘液，鞘流处于湍流状态，围绕标本喷嘴高速流动，实现两种液体的同轴流动。

标本流的位置的稳定可通过调整它与鞘液流速的比例来实现，一般比例在1:50到1：几百

第五节、血细胞分析仪

1、 库尔特原理：微小粒子通过特殊的小孔时可产生电阻变化这现象，称为库尔特原理. 2、 电阻抗血细胞计数原理：

当细胞通过检测器微孔的孔径感受区时，在内外电极之间恒流源电路上，电阻值瞬间增大，产生一个电压脉冲信号。产生的脉冲信号数，等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞体积大小成正比。

细胞直方图：横坐标为血细胞体积大小纵坐标为细胞的相对数量 3、 小孔换能器

4、 血细胞分类计数：实际进行血细胞分析时，有两个计数池，一个池计数红细胞、血小板，另外一个池加溶血剂后计数白细胞，并对血红蛋白进行测定。红细胞和血小板共用一个小孔管，正常人红细胞体积和血小板体积间有一个明显界限，血小板计数准确容易。

血液中各种血细胞的体积不同，WBC体积范围120～1000fl，RBC在85～95fl，PLC在2～30fl , 血细胞计数便是利用它们的体积及数量不同。

体积不同，脉冲大小不同，WBC（白细胞）最大，RBC（红细胞）次之，PLC（血小板）最小。可根据阈值选择电路进行甄别。

5、 电阻抗法只能分辨出红细胞、白细胞和血小板，不能区分白细胞的三个亚群，要区分亚群，就要用到下面的白细胞分类技术

提高检测精度的方法

重合损失：理想情况是细胞一个个的通过小孔，但是孔的直径100um，所以在实际操作过程中，会存在两个、三个甚至更多细胞，一同或前后尾随进入小孔的可能性，这种情况虽然产生脉冲幅度比单个细胞要高，但它只能产生一个信号脉冲，使计数有所丢失，这种现象称为为重合损失。

为了能够更好的从物理上最大限度地减少重合现象，开发了鞘流法。可用于两种细胞技术原理：电阻抗原理和激光技术原理。

具体方法为：用一毛细管对准小孔管，细胞单纯悬液从毛细管喷嘴喷出，同时与四周流出的鞘液一起流过敏感区，保证细胞悬液在中间形成单个排列的细胞液，四周被鞘液包绕。

扫流技术：为了减少回流的红细胞对血小板计数的干扰，由于血小板和红细胞在同一个技术池内计数，红细胞在经过小孔后若发生回流，只要稍微触及小孔感应区，电极就可能感应到相当于血小板大小的小脉冲，血小板计数假性增多。扫流技术就是在红细胞和血小板计数的同时，在红细胞计数小孔的后面有一个稳定的液流通过，红细胞立即被冲走，防止回流。

细胞计数是指单位体积内的细胞数，通常红细胞、白细胞和血小板的计量均指每升细胞数量。

设被测血量的体积为Y，稀释倍数为C，计算结果为S，则每升内细胞数X为：X=CS/Y 定量装置就是用来精确测定样品体积的装置。常用的有水银压力式和光电检测式

6、 白细胞分类技术

白细胞分类技术（5种）

（一）容量、电导、光散射检测技术；每个细胞接受三维分析 体积(volume，V) 电阻抗原理测定细胞体积和数量。

电导性(conductivity，C) 高频电磁探针，测量细胞内部结构，细胞内核浆比例、质粒的大小 和密度，从而区别体积完全相同而性质不同的两个细胞。

光散射(scatter，S)细胞内粗颗粒的光散射强度要比细颗粒更强，通过测定单个细胞的散射光 强度可以把粒细胞区分开。DF3（体积值和电导值，但只显示嗜碱性粒细胞群 ）

（二）体积和细胞化学分类计数；

对白细胞计数用两种不同分类法，分别确定两次，第一次在WBC/BASO计数池内，首先将红细胞破碎，加入特殊溶剂将其余白细胞溶解，只留下嗜碱性粒细胞，然后根据电阻抗法对嗜碱性粒细胞进行计数

第二次白细胞的分类在反应室内进行，首先加入溶血剂使红细胞溶血，白细胞保持原形，然后对4种细胞进行不同染色，染色后使其成单细胞悬液进行反应室，反应室采用双鞘液技术。 第一鞘液聚集血样，使其通过变阻孔，电压脉冲大小与被测细胞的大小成正比。

第二鞘液维持聚焦细胞流离开小孔管进入光反应室。吸光度与细胞化学染色后的细胞含 量成正比。

阻抗与射频联合法；RF射频电流--细胞内部结构信息，DC: 直流电流--细胞大小的信息 嗜酸、嗜碱性粒细胞均采用电阻抗法进行检测，淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜酸性、嗜碱性）检测系统采用了电阻抗与射频联合检测

（四）光散射与细胞化学技术联合法；

（五）多角度偏振光散射技术

基于细胞大小、折射率、核形、核浆比值、以及颗粒性质等，均可影响不同角度下的散射光

强度。不同白细胞在以上几个方面完全一致的几率很小，从而对白细胞进行分类。 0°：前角光散射（1°～3°），可粗略测定细胞大小。 10°：狭角光散射（7°～11°），可测定细胞内部结构相对特征。 90°：垂直光散射（70°～110°），测定细胞核分叶情况。 90°：消偏振光散射（70°～110°），区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。

0°和 90°垂直光散射--单核（淋巴、单核、嗜碱性）、多个核（嗜中性、嗜酸性） 90°垂直光散射和90°消偏振光散射-嗜酸性、嗜中性 0°和 10°-淋巴、单核、嗜碱性

7、哪种分类没有用电阻抗分类技术 （四）光散射与细胞化学技术联合法；（五）多角度偏振光散射技术 这两种分类方法没有用电阻抗技术

血红蛋白测定原理（采用光电比色原理，双波长测血红蛋白原理） 血细胞悬液中加入溶血剂后，红细胞溶解释放出血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分结 合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，特定波长(530～550nm)下进行光电比色，吸光度值与所含血红蛋白含量成正比，经仪器计算显示血红蛋白浓度。

检测板电路PX2310C包括三部分电路：脉冲形成电路、脉冲放大电路和鉴别整形电路。脉冲形成电路由恒流源（低电平继电器闭合、电流串联负反馈）、铂金电极、稀释的样品血标本和小孔管组成。

第六节、尿沉渣分析仪

1、流式细胞术尿沉渣分析仪工作原理：（UF-100全自动尿沉渣分析仪）

1.） 稀释、染色的标本通过鞘液池 2.） 氩激光照射

3.） 测定荧光、散射光和电阻抗

荧光强度是从染色细胞发出的荧光强度，反映细胞定量特性如细胞膜、核膜、线粒体、核酸) 散射光强度(这种仪器测定的是前向角散射光它成比例的反映细胞的大小） 电阻抗的大小（电阻抗电信号主要与细胞的体积成正比)。

仪器结构:光学检测系统、液压系统、电阻抗检测系统、电子系统 2、影像式尿沉渣分析仪工作原理

与人工显微镜相似，其检测主要靠两个快速移动的CCD摄像头对样品计数池扫描，两个镜头的放大倍数分别为100和400倍，镜头所得影像数据化，取六个平均数据，经染色后，屏幕显示尿沉渣有形成分，图象可以贮存。

3、尿沉渣分析仪与显微镜检查比较

1）影像式尿沉渣分析仪：经过严格的定时、定速离心，留取定量的尿沉渣，以标准单位定量报告，因此同手工显微镜方法相比，它的分析标准定量、视野清晰、精确度较高，但许多步骤仍需人为操作，故仍可能存在人为误差。

2）流式细胞术尿沉渣分析仪尿液不需离心，标本用量少，检测细胞多，每一标本 分析量相当于显微镜检测50个高倍视野；检测速度快，每小时可检测100个尿液标本；每一标本检测步骤模式一致，且易于质量控制和标准化，因而检测精确度高。 沉渣自动分析仪目前尚不能检出滴虫、脂肪滴或药物、结晶等，也不能鉴别异

常细胞，大量细菌、酵母菌还会干扰计数，对影红细胞容易漏诊；尤其不能明确病理性管型的分类。

尿沉渣检验包括有形成分计数和形态学分析两方面的检验。经典的尿沉渣显微镜检查已伴随检验界渡过了漫长岁月，至今仍是最直接最权威的方法

4、 干化学试剂带结构：

试剂带采用多层结构：

第一层尼龙膜起保护作用，防止大分子物质对反应的污染，保证试剂带的完整性；第二层绒制层，它包括过碘酸盐区和试剂区，过碘酸盐区可破坏维生素C的干扰物质，试剂区含有试剂成分，主要与尿液所测定物质发生化学反应，产生颜色变化；第三层是吸水层，可使尿液均匀快速地浸入，并能抑制尿液流到相邻反应区；最后一层选取尿液不浸润的塑料片作为支持体。

(颜色越深-浓度越高-吸光度越大-反射率越小)

试剂带的试剂块要比分析仪测试项目多一个空白块；空白块是为了消除尿液本身的颜色及试剂块分布的状态不均等所产生测试误差，提高测量准确度而设置的。

各种测试膜块都有相应的测定测定波长，其中pH、亚硝酸盐、酮体、胆红素，的测定波长为620nm ；

葡萄糖、蛋白质、隐血的测定波长为550nm 。

尿胆原、尿比重、白细胞、维生素C取550nm和620nm波长下测得的反射率的平均值。 各膜块的参比波长为720nm。

5、尿液干化学分析仪的组成和工作原理

尿液分析仪一般由光学系统（光电转换系统）、扫描机构（光学驱动部分）、控制机构、I/V转换器、CPU板、残尿吸取机构、试剂带位置检测及打印机、显示器、功能键等部分组成。

仪器系统由CPU控制，当试剂带放到试剂架上后，CPU根据试剂带位置检测信号和控制键的信号（低电平）指挥控制机构和扫描机构，驱动光学系统对试剂带进行扫描。

光电系统上光电转换元件将各试剂的反射光信号（测定光和参考光）变成电信号（电流信号），再经I/V转换器把电流信号变成电压信号并放大，再经电子开关和A/D转换送到CPU板。CPU具有存储数据产生控制信号及各有光信号的及各有关的检测信号处理后，由打印机打印出测试结果。

第七节、电化学分析技术

1、 人体电解质正常指标及临床意义。

体液中电解质以Na+ 、K+、CL-的含量最高,对维持体液的渗透平衡及酸碱平衡起重要作用。

电化学临床分析仪器：

电解质分析仪：采用离子选择性电极（ISE）测量体液中离子浓度的仪器。测量样品的

钾、钠、氯、 pH值、钙、锂等。

血气分析仪：利用电极对血样中的酸碱（pH）、 二氧化碳分压（PCO2）和氧分压（PO2）进行测定的仪器，测量样品中的：pH、PCO2、PO2、AB、SB、BB、TCO2、BE blood、BEECF、SO2等。

2、 离子选择性原理

利用各种活性膜直接测量溶液中特定离子浓度的电极叫离子选择性电极，简称ISE.它能选择性的响应待测离子的浓度（活度）而对其他离子不响应，或响应很弱，其电极电位与溶液中待测离子活度的对数成线性关系，即遵循能斯特方程。

3、 能斯特方程

4、原电池：若要得到某一指示电极的电位，还需要用一个能提供稳定的电极电位的参考电极与参考电极组成电池。这种由指示电极、参比电极与被测溶液构成，能产生电能的电池称为原电池。两电极间的电位差称为电池电动势。

指示电极：在原电池中，借以反映离子活度的电极。即电极电位随溶液中待测离子活度的变化而变化，并能指示待测离子活度。

参比电极：电极电位稳定且已知，用作比较标准的电极。电化学分析中常用的参比电极是：甘汞电极和Ag/AgCl电极。

5、

PH测定原理：PH玻璃膜电极：

E=E1+E2,E1代表阳极半电池电动势，E2代表阴极电动势， E1=E2-0.0591 lg AH+ 6、 电化学法测量血液pH值

上面介绍的方法的先决条件是电极系统必须符合能斯特方程，否则将有误差，用标准曲线法就可克服这一弊端。

这种方法是用不同浓度的标准溶液与电极对组成电池，分别测电动势，在半对数坐标纸上以E对C做图，得到标准曲线，曲线的斜率理论上是2.303R*T/F,样品液用一对电极组成电池，测电动势，并有标准曲线

查得其浓度。

第三种方法：在未知试液中测电动势后，加入已知量待测离子（标准溶液），在测定电动势变化，借能斯特方程计算事业中待测离子的浓度。

7、离子选择性电极工作原理：特点：仅对溶液中特定离子有选择性响应。直接测定、选择性强、速度快，适应性强广泛使用、所需样品少 膜电极的关键：是一个称为选择膜的敏感元件

离子选择性电极作作正极时：对阳离子响应的电极，取正号；对阴离子响应的电极，取负号

8、

PCO2分压电极测定原理

它是一种气敏电极，

PCO2电极的基本成部分----玻璃电极。pH敏感的薄层玻璃膜----厚约0.1mm

玻璃电极与参比电极放在充满PCO2电极外缓冲液的外套中，它的pH值随血液的PCO2而改变。外套的前端是透气膜。

玻璃电极膜与其有机玻璃外套一端的渗透膜之间放一片尼龙网或擦镜纸，使两者之间保证有一薄层电极溶液间隔。前端有一层半透膜，只允许CO2气体通过，电极膜的材料多采用高分子有机化合物组成

9、 PO2电极测定原理

PO2 电极是氧化还原电极，对氧的测量是基于电解氧的原理实现的。目前用得最多的氧电极是电解式的Clark氧电极，Clark氧电极是由铂阴极、Ag/AgCl阳极、KCl电解质和透气膜所构成。

在外加电压超过0.8V时，即使PO2= 0 mmHg ，水本身也会被电解而产生电流。

外加在PO2电极上的工作电压通常为0.7 V。电流的大小通常只有几十纳安（10-9A），故PO2电极所配的放大器为高输入阻抗、低噪声的微电流放大器。当PO2的值为零时，电路中电流并不为零，存在一个微小的电流值，通常称其为基流。 在校准PO2电极时，需采用两种气体。先用不含氧的纯CO2气体通过测量管，将电路中的基流调为零；用第二种标准气体去测定PO2，便可得出PO2和电流的标准曲线。

电解质分析仪工作原理：采用一个毛细管测试管路，让待测液体同时和所有的测量电极相接触。这样，不同的电极和样品中相应的离子起作用而建立起各自相应的电位；电计部分将电极产生的电位放大后显示或打印出来。

电极结构：

指示电极：流动式离子感应透明膜电极 参比电极：流动式透明接头电极

钾电极由对K+具有选择性响应的中性载体和聚氯乙烯（PVC）等组成。

钠电极由对Na+具有选择性响应的特殊玻璃毛细管等组成。

氯电极由对Cl-具有选择性响应的中性载体和聚氯乙烯（PVC）等组成。

钙电极由对Ca2+具有选择性响应的中性载体和聚

氯乙烯（PVC）等组成。pH电极由由H+具有选择性响应的玻璃毛细管等组成。采用Ag-AgCl作为参考电极，参考电极采用透析膜将样品溶液与参考电极液隔开。

血气分析方法是一种相对测量方法。在测量样品之前，需用标准液及标准气体确定

pH、PCO2和PO2三套电极的工作曲线。通常把确定电极系统工作曲线的过程叫 做定标或校准（Calibration）每种电极都要有两种标准物质来进行定标，便确定建立工作曲线最少需要的两个工作点。

pH系统：使用7.383和6.840两种标准缓冲液进行定标。 氧和二氧化碳系统：用两种混合气体来进行定标。 5％ CO2和20％ O2 10％ CO2

一般的血气分析仪使用四支电极：pH 电极、PCO2 电极、PO2 电极、pH 参比电极

电解质分析仪工作原理：采用一个毛细管测试管路，让待测液体同时和所有的测量电极相接触。这样，不同的电极和样品中相应的离子起作用而建立起各自相应的电位；电计部分将电极产生的电位放大后显示或打印出来。

电极结构：

指示电极：流动式离子感应透明膜电极 参比电极：流动式透明接头电极

钾电极由对K+具有选择性响应的中性载体和聚氯乙烯（PVC）等组成。

钠电极由对Na+具有选择性响应的特殊玻璃毛细管等组成。

氯电极由对Cl-具有选择性响应的中性载体和聚氯乙烯（PVC）等组成。

钙电极由对Ca2+具有选择性响应的中性载体和聚

氯乙烯（PVC）等组成。pH电极由由H+具有选择性响应的玻璃毛细管等组成。采用Ag-AgCl作为参考电极，参考电极采用透析膜将样品溶液与参考电极液隔开。

血气分析方法是一种相对测量方法。在测量样品之前，需用标准液及标准气体确定

pH、PCO2和PO2三套电极的工作曲线。通常把确定电极系统工作曲线的过程叫 做定标或校准（Calibration）每种电极都要有两种标准物质来进行定标，便确定建立工作曲线最少需要的两个工作点。

pH系统：使用7.383和6.840两种标准缓冲液进行定标。 氧和二氧化碳系统：用两种混合气体来进行定标。 5％ CO2和20％ O2 10％ CO2

一般的血气分析仪使用四支电极：pH 电极、PCO2 电极、PO2 电极、pH 参比电极

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