防腐体系效能挑战实验（两面针）

新厂家卡松防腐体系效能挑战实验

1、试验原理和判定标准

本次试验采用经典的为期28天的防腐单次挑战实验，是将防腐剂混入洗发露和沐浴露配方基质中，然后一次性接入多种、一定数量的微生物进行挑战，将样品暴露在空气中，室温条件下，每周定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的抗菌效果。 判定标准：

①第28天时，样品中含细菌>103cfu/g(ml)，该样品不能通过微生物攻击的挑战性实验，表明样品的防腐体系不能有效地起到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。

②第28天时，样品中含细菌在102cfu/g(ml)-103cfu/g(ml)，该样品有条件地通过挑战性实验，即当产品中蛋白质或其它动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防腐体系可以使用，否则不能。

③第28天，样品中含细菌在10cfu/g(ml)-102cfu/g(ml)，表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。

④从第7天起，样品中的细菌<10cfu/g(ml)，说明该样品的防腐体系对微生物有特强的抑杀作用，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时很不容易被微生物污染。

2、试验仪器

恒温培养箱、灭菌平皿、高压灭菌锅、酒精灯、锥形烧瓶、灭菌刻度吸管、试管、接种环、电子称。 3、培养基和试剂

生理盐水、卵磷脂、吐温80-营养培养基。 4、挑战用微生物

提取菌珠：有储罐间空气细菌培养得出菌种。

菌种培养：实验前，将各菌种接种于营养琼脂平板培养基，于37℃（细菌）培养箱中培养。细菌培养48小时，挑选典型的菌落于50g灭菌的生理盐水，制成一定浓度的细菌混合悬液，置于冰箱冷藏备用。 5、微生物挑战实验

取细菌的混悬液2ml，加生理盐水至20g此悬液为1:10的细菌混悬液，再用生理盐水按1:10稀释，按平板倾注法计数细菌混悬液细菌量；称取洗发露和沐浴露基质样品各20克，加入灭菌的容器内，加入10ml混合细菌悬液，充分混匀,然后置于室温下。在接菌的0、7、14、21、28天取样分析：准确称取3克样品，加到含有玻璃小球和27ml灭菌生理盐水的锥形瓶内，充分震荡混匀，此悬液为1：10稀释液；然后再用生理盐水按1：10依次稀释。按平板倾注法计数样品中含菌量细菌培养37℃下48小时。 菌种 洗发水 沐浴露 0天 80000 400000 400000 7天 120 70 14天 无法计数 无法计数 无法计数 无法计数 根据目前的测试结果表可以看出，发现一矛盾的结论，从一周的培养结果看防腐剂的杀菌效果比较好，而从后面的结果可以看出防腐剂挑战过关可能性较低。

试验小结，根据7天灭菌效果来看，细菌量小于原溶液的0.1%，新厂家的卡松防腐剂有较好的防腐杀菌效果。

本次试验，需要改进的地方，在测定产品0天，需将样品稀释1:10000倍，细菌数量的统计更准确；样品配置的量需要更多一些，长时间暴露空气中时，会干掉，使测试时样品量不够。

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