非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响

目的 研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。 方法?┯τ没?质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人FL细胞株鞘脂类代谢的影响。 结果 非律平和制霉菌素均可影响FL细胞鞘脂类代谢,但是非律平(0.2 和10 μm

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２００７年１０月；２１（５）：４１６－４２１

ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００７　　Ｏｃｔ；２１（５）：４１６－４２１

中国药理学与毒理学杂志

非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响



刘广义１，马小琼２，沈　静２，董正伟１，杨　军１

（浙江大学１．公共卫生学院毒理学系，２．医学院病理及病理生理学教研室，浙江杭州　３１００５８）摘要：目的　研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。方法应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人ＦＬ细胞株鞘脂类代谢的影响。结果　非律平和制霉菌素均可影响ＦＬ细胞鞘脂类代谢，但是非律平（０．２和１０μｍｏｌ·

Ｌ－１

）诱导了多种新的神经酰胺类分子的合成，推测

主要影响神经酰胺类分子的代谢。而制霉菌素（

０．０５４和０．１０８μｍｏｌ·Ｌ－１

）在诱导了新的神经酰胺分子合成的同时，还导致鞘磷脂含量的增高，０．１０８μ

ｍｏｌ·Ｌ－１

可诱导更多神经酰胺分子的合成，推测制霉菌素可能对鞘磷脂类分子和神经酰胺类分子的代谢都有影响。结论　非律平和制霉菌素均干扰鞘脂类代谢，但二者的靶点可能不同。

关键词：非律平；制霉菌素；脂类组学；神经酰胺类；鞘磷脂类

中图分类号：Ｒ３９４．６，Ｒ９７８．１文献标识码：Ａ

文章编号：１０００３００２（２００７）０５０４１６０６

鞘脂类（ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ）作为一种以鞘胺基为基础的脂类，在当前的研究中越来越受到大家的关注。作为脂筏（ｌｉｐｉｄｒａｆｔ）的主要组成部分，它们为膜蛋

白的相互作用提供了平台［

１］

。此外，鞘脂类和它的代谢产物，如鞘胺醇（ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）、神经酰胺（ｃｅｒａｍｉｄｅ）和鞘磷脂（ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ）等可以作为第二信使发挥生物功能，参与了许多重要的信号传导通

收稿日期：２００６１１０１　接受日期：２００７０１３１　　基金项目：国家自然科学基金（３０３００２７７）；国家自然科学基金（３０４７１９５６）；国家自然科学基金（３０６００２２０）资助项目　　作者简介：刘广义（１９８１－），男，河南省商丘市人，硕士研究生，研究方向为细胞应激反应中的脂类组学研究。　　联系作者　Ｅｍａｉｌ：ｇａｓｔａｔｅ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　Ｔｅｌ／Ｆａｘ：（０５７１）８８２０８１４０

路，对细胞的分化、增殖和死亡［２－３］

，钙的动态平衡，肿瘤的发生，抗药性的产生和治疗［４－５］以及细菌和病毒的感染过程［６－７］等都有重要的调节作用。

但是很长时间以来，脂类的研究远远落后于基因和蛋白质的研究。一个最主要的原因就是缺乏一种精确的、高通量的脂类分析方法。传统的分析方法（如同位素标记、薄层层析和高效液相色谱等）虽可提供部分信息，但很不充足。比如，利用同位素标记及薄层层析，发现烷化剂甲基硝基亚硝基胍（Ｎｍｅｔｈｙｌ

Ｎ′ｎｉｔｒｏＮｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ，ＭＮＮＧ）可诱导神经酰胺的生成并介导凋亡［２，８］。但是，由于神经酰

胺可有不同的侧链长度、不饱和键数量、构像及手性等，具体发生变化的是哪一种或几种无法得知。这一问题直到将质谱技术应用在脂类研究才得到了解决。近年来，一个新的概念脂类组学（ｌｉｐｉｄｏｍｉｃｓ）被提出，即利用质谱技术对脂类组（ｌｉｐｉｄｏｍｅ）的所有

成分进行一次性的定性鉴定并定量［９－１２］

。与传统

的分析方法比较，质谱技术通量高，最重要的是可以鉴定出各种类别的脂类分子。利用这一技术，我们已研究了ＭＮＮＧ对细胞鞘脂类代谢的影响，发现ＭＮＮＧ可导致多种神经酰胺和鞘磷脂分子的改

变［

７，１３］

。在鞘脂类研究中，各种脂类代谢干扰剂是理解鞘脂类代谢通路所必需的研究工具。大环内酯类多烯型抗生素非律平（ｆｉｌｉｐｉｎ）和制霉菌素（ｎｙｓｔａｔｉｎ）主要用于治疗真菌类感染，它们可以和细胞中的胆固醇结合，形成复合体，从而导致细胞结构的改变，特别是可以干扰细胞的脂筏结构。因此它们是经常使

用的干扰细胞脂筏的药物［１４－１６］

。然而它们具体干

扰细胞的哪些鞘脂类代谢，以及如何干扰还没有明确的答案。此外，二者是否影响相同的或不同的鞘脂类也还不清楚。因此，本研究利用脂类组学方法研究它们对细胞鞘脂类，尤其是神经酰胺和鞘磷脂类的影响，以分析它们发挥作用的不同途径。

目的 研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。 方法?┯τ没?质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人FL细胞株鞘脂类代谢的影响。 结果 非律平和制霉菌素均可影响FL细胞鞘脂类代谢,但是非律平(0.2 和10 μm

中国药理学与毒理学杂志　　２００７年１０月；２１（５）１　材料与方法

１．１　材料

人羊膜上皮细胞株ＦＬ为本实验室保存。ＭＥＭ培养基（Ｅａｇｌｅ′ｓｍｉｎｉｍｕｍｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｄｉｕｍ）、Ｌ谷氨酰胺、小牛血清：美国Ｇｉｂｃｏ公司。二甲亚砜（ＤＭＳＯ

）、非律平、制霉菌素、乙酸乙酯（ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ）和２，５二羟基苯甲酸（２，５ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｌｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ，２，５ＤＨＢ）：美国Ｓｉｇｍａ公司。ＶｏｙａｇｅｒＤＥＳＴＲＭＡＬＤＩＴＯＦ质谱仪：美国ＡＢＩ公司。真空抽干机：美国Ｓａｖａｎｔ公司。１．２　细胞培养和处理

培养液包含ＭＥＭ、１０％小牛血清、０．０３％Ｌ谷

氨酰胺、１０ｋＵ·Ｌ－１青霉素和１２５ｍｇ·Ｌ－１链霉素。处理条件如下：１×１０７个细胞接种于细胞培养瓶中，

３７℃，５％ＣＯ２培养，

１ｄ后分别加入０．２或１０μｍｏｌ·Ｌ－１非律平［１７］，０．０５４或０．１０８μｍｏｌ·Ｌ－１［１８］

制霉菌素，继续培养３０ｍｉｎ［１８－１９］。

１．３　鞘脂的提取

将４×１０７

个细胞溶于５００μＬ氯仿与甲醇（２∶１，Ｖ／Ｖ）混合液，然后加入１ｍＬ蒸馏水混匀，４７７０×ｇ离心１５ｍｉｎ，吸取下层，放入真空抽干机抽干。抽

干的剩余物加入５

００μＬ含０．１ｍｏｌ·Ｌ－１

ＮａＯＨ的甲醇，放入５

５℃水浴处理１ｈ。然后加入１００μＬ的１ｍｏｌ·Ｌ－１

盐酸、５００μＬ正己烷和５０μＬ蒸馏水，４７７０×

ｇ离心１５ｍｉｎ。分层后，吸取下层液体放入真空抽干机抽干。抽干后的剩余物加入０．８ｍＬ的氯仿、甲醇和水（８６∶１４∶１，Ｖ／Ｖ／Ｖ）的混合液和０．２ｍＬ的氯仿、甲醇和水（３∶４８∶４７，Ｖ／Ｖ／Ｖ）的混合液，４７７０×ｇ离心１５ｍｉｎ，吸取下层，放入真空抽干机抽干，剩余

物即为鞘脂类样品，放入－７０℃储存［１３］。

１．４　ＭＡＬＤＩＴＯＦ质谱分析

样品溶于５μＬ氯仿和甲醇（２∶１，Ｖ／Ｖ）的混合溶液，然后加入５μＬ基质液（包含０．５ｍｏｌ·Ｌ－１

乙酸乙酯和０．１％三氟乙酸）放于０．５ｍＬ的离心管中，将离心管放在漩涡振荡器上混合均匀，再离心１ｍｉｎ

。取１μＬ混合物点在样品靶上热风吹。仪器测定条件如下：Ｎ２激光３３７ｎｍ，加速电压２０ｋＶ，正离子反射／延迟模式，延迟时间１００ｎｓ。应用Ｃ２二氢神经酰胺（ｄｉｈｙｄｒｏｃｅｒａｍｉｄｅ）（相对分子质量３４３．６）校准。处理组和对照组均重复３次，

每个样品得到６或７张质谱图，只有当一个峰在５张以上的图中出现且它的相对丰度大于３％，才认为它存在并用

·４１７·

于分析。所有质谱图均按照以上方法分析，所得到的差异性质谱数据与本实验室建立的鞘脂类数据

库［

１３］

进行比较。目前我们建立的数据库包含了常见的近９０种标准鞘脂类样品的质谱分析图谱。本研究分析的是神经酰胺和鞘磷脂。神经酰胺的结构是鞘氨醇氨基以酰胺键与一长链脂肪酸羧基相连，鞘磷脂的结构是神经酰胺的极性头部是磷酰胆碱，不同的神经酰胺和鞘磷脂只是碳链数和双键数目以及侧链上的一个羟基的变化，所以利用实验中得到的数据与数据库对比，根据分子量和神经酰胺及鞘磷脂的基本骨架，可以推测出成分的结构。

２　结果

２．１　非律平对ＦＬ细胞鞘脂类代谢的影响

神经酰胺分子在质谱分析中主要出现在质荷比（

ｍ∶ｚ）５００～７５０的范围内；而鞘磷脂分子主要出现在ｍ∶ｚ７５０～９００的范围内。在未经非律平处理的对照ＦＬ细胞中，经质谱分析发现极少有神经酰胺分子的存在，仅有少数几种鞘磷脂分子的存在（表１）。由于研究中经常使用的非律平浓度为０．２和Ｔａｂ１．　Ｅｆｆｅｃｔｏｆｆｉｌｉｐｉｎａｎｄｎｙｓｔａｔｉｎｏｎｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｈｕｍａｎａｍｎｉｏｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ

ｍ∶ｚＣｏｎｔｒｏＦｉｌｉｐｉｎ／μ

ｍｏｌ·Ｌ－１

Ｎｙｓｔａｔｉｎ／μ

ｍｏｌ·Ｌ－１

０．２１００．０５４０．１０８

５３６＋

＋

５５２＋

５８０＋

＋

６１２＋

＋

６２４＋

＋

６５８＋６６０＋＋＋

＋

６６８＋

＋

６７６＋７２０＋＋＋＋８１２＋＋＋＋＋＋＋８３４＋＋＋＋＋＋＋８３６

＋

＋

＋

＋＋

＋＋

Ｔｈｅｈｕｍａｎａｍｎｉｏｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｆｉｌｉｐｉｎａｎｄ

ｎｙｓｔａｔｉｎ

，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｆｏｒ３０ｍｉｎ．Ｌｉｐｉｄｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｍａｔｒｉｘａｓｓｉｓｔｅｄ，ｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｉｏｎｉｚｉｎｇｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｉｓｉｓｔｈｅｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｍａｓｓ

ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｄａｔａ．ｍ

∶ｚ：ｍａｓｓｔｏｃｈａｒｇｅｒａｔｉｏ．

目的 研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。 方法?┯τ没?质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人FL细胞株鞘脂类代谢的影响。 结果 非律平和制霉菌素均可影响FL细胞鞘脂类代谢,但是非律平(0.2 和10 μm

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１０μｍｏｌ·Ｌ－１［１７］，本研究首先用非律平０．２μｍｏｌ·Ｌ－１处理ＦＬ细胞３０ｍｉｎ后，提取细胞鞘脂类，进行

质谱分析。发现在ｍ∶ｚ５００～７５０的范围内有较大的改变。ｍ∶ｚ５３６，５８０，６２４，６６０，６６８和７２０等出现，表明有新的神经酰胺分子合成（图１）。而在ｍ∶ｚ７５０～９００范围内的几种鞘磷脂分子峰都没有改变，表明非律平对于鞘磷脂分子的代谢影响较小，而对于神经酰胺代谢的影响较大。

进一步用非律平１０μｍｏｌ·Ｌ－１

处理，ＦＬ细胞鞘脂类的变化与０．２μｍｏｌ·Ｌ－１处理的结果

一致（表１

），

表明低浓度和高浓度的非律平对于鞘Ｆｉｇ１．　Ｃｈａｎｇｅｓｉｎｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎ

ｄｕｃｅｄｂｙｆｉｌｉｐｉｎａｎｄｎｙｓｔａｔｉｎ．ＳｅｅＴａｂ１ｆｏｒｃｅｌｌｔｒｅａｔ

ｍｅｎｔｓ．Ｔｈｉｓｉｓｔｈｅｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｄａｔａ．

ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ　２００７　Ｏｃｔ；２１（５）

脂类和神经酰胺代谢的作用无明显差别。

利用我们实验室已经建立的质谱数据库［１３］

，搜

索以上差异的质谱峰，可以推断部分分子可能的结构图，如ｍ∶ｚ５８０和７２０的可能结构见表２。Ｔａｂ２．　Ｐｒｏｐｏｓｅｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｆｏｒｓｏｍｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ

ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｓｐｅｃｉｅ

ｓ

Ｄ：ａｄｏｕｂｌｅｂｏｎｄｉｎｔｈｅｍａｉｎｃｈａｉｎ．Ｔ：ｔｈｅｍａｉｎｃｈａｉｎｉｓｓａｔｕｒａｔｅｄ．Ｈ：ａｈｙｄｒｏｘｙｌｇｒｏｕｐｉｎｔｈｅｓｕｂｓｉｄｅｃｈａｉｎ．

２．２　制霉菌素对ＦＬ细胞鞘脂类代谢的影响

研究中常用的制霉菌素浓度是０．０５４和０．１０８

μｍｏｌ·Ｌ－１［１８］。本研究首先用制霉菌素０．０５４μｍｏｌ·Ｌ－１处理ＦＬ细胞３０ｍｉｎ后，用上述方法提取细胞脂

类，同样进行质谱分析。发现制霉菌素尽管没有诱导新的鞘磷脂分子产生，但在ｍ∶ｚ７５０～９００范围内８１２，８３４和８３６的强度都有所增强，表明制霉菌素可激活鞘磷脂的合成。同时还诱导了新的神经酰胺

分子的合成，在ｍ∶ｚ５００～７５０范围内，ｍ∶ｚ６１２，６６０，６７６和７２０等出现（图１）。

进一步用制霉菌素０．１０８μｍｏｌ·Ｌ－１

处理细胞

目的 研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。 方法?┯τ没?质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人FL细胞株鞘脂类代谢的影响。 结果 非律平和制霉菌素均可影响FL细胞鞘脂类代谢,但是非律平(0.2 和10 μm

中国药理学与毒理学杂志　　２００７年１０月；２１（５）

后，发现ＦＬ细胞鞘脂类的改变与０．０５４μｍｏｌ·Ｌ

－１处理的结果有相似性，但也存在差异（表１），即

０．１０８μｍｏｌ·Ｌ－１制霉菌素也可抑制鞘磷脂的水解，

并诱导新神经酰胺分子的合成。但其诱导神经酰胺

的合成作用与０．０５４μｍｏｌ·Ｌ－１相比更强一些，有两

种新分子ｍ∶ｚ５５２和６５８被诱导。

利用我们实验室已经建立的质谱数据库［１３］

，搜

索以上差异的质谱峰，可以推断部分分子可能的结

构图，如ｍ∶ｚ８１２的几种可能结构列于表２。

３　讨论

鞘脂类与胆固醇在细胞表面形成脂筏，作为蛋白质附着的平台。非律平和制霉菌素是常用来干扰细胞脂筏结构的化学试剂，但对于它们的作用机制还不是很了解。本研究结果表明制霉菌素与非律平对鞘脂代谢的影响明显不同（表１），如非律平和制霉菌素均诱导了ｍ∶ｚ６６０和７２０的出现，但非律平诱导了ｍ∶ｚ５３６，５８０，６２４和６６８的出现，制霉菌素诱导了ｍ∶ｚ６１２和６７６的出现，表明非律平与制霉菌素对于神经酰胺代谢的影响有很大区别。此外，非律平对鞘磷脂的代谢无明显影响，而制霉菌素却可影响鞘磷脂的代谢。同时本研究结果还表明，在目前研究中使用的非律平的不同剂量都可干扰鞘脂类的代谢，且无明显差别；但是高剂量制霉菌素的干扰效率较低剂量强，说明制霉菌素的作用可能存在剂量效应关系，但由于检测的剂量较少，还需进一步深入研究。

在神经酰胺的代谢通路中存在一条从头合成途径（ｄｅｎｏｖｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ），还有一条与鞘磷脂可逆的合成／水解途径，即神经酰胺通过鞘磷脂合成酶（

ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎｓｙｎｔｈａｓｅ）的作用可进一步合成为鞘磷脂，而鞘磷脂又可被鞘磷脂酶水解为神经酰胺（图２）。因此当鞘磷脂酶被激活时，鞘磷脂被水解减少，而神经酰胺量升高。本研究结果表明，非律平诱导了新的神经酰胺分子的产生。因此，非律平极有可能激活了神经酰胺的从头合成途径，导致新的神经酰胺分子的生成，而同时神经酰胺与鞘磷脂的合成和水解途径则不受影响，因而鞘磷脂类的代谢没有显著变化。制霉菌素也同样可能激活神经酰胺的从头合成途径，导致新神经酰胺分子的出现，但同时也可以通过激活神经酰胺向鞘磷脂的转化途径，

或抑制鞘磷脂向神经酰胺的水解而导致鞘磷脂分子

·４１９·

Ｆｉｇ２．　Ｐｒｏｐｏｓｅｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｉｌｉｐｉｎ

ａｎｄｎｙｓｔａｔｉｎｏｎｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．↑：ａｃｔｉ

ｖａｔｉｏｎ；Ｔ：ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ；？：ｔｈｅｒｅｉｓａｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ．

的累积（图２）。根据非律平和制霉菌素作用后神经

酰胺和鞘磷脂的不同变化，可以根据鞘脂类代谢的

通路［６］，推测二者干扰其代谢的不同靶点，为进一

步深入研究提供信息，这是传统方法所无法做到的。　　此外，在肿瘤细胞中通过调节鞘脂类代谢，增加神经酰胺的水平已经成为一种治疗肿瘤的新方法，

有些药物已进入临床验证阶段［

４，２０－２１］

。本研究发现非律平和制霉菌素作用于细胞也可以引起细胞神经酰胺代谢的改变，那么这两种药物对肿瘤的生长是否有一定的作用，为认识非律平和制霉菌素的药物作用提供了新视角。

Ｗｅｎｋ［１２］

在２００５年发表文章提出脂类组学将

是未来研究发展的一个热门方向，本研究进一步体现了脂类组学技术在当前脂类研究中的重要性。通过此项技术，不同的神经酰胺、鞘磷脂分子可以被鉴定出来，并进行相对定量，而且每一个分子的可能结构还可以通过与数据库的对比得到解析，这都是传统的脂类研究技术所无法达到的。虽然本研究中采用的ＭＡＬＤＩＴＯＦ方法在定量上有不足之处，但能满足在一次实验中鉴别出不同的鞘脂类分子并对这些鞘脂类分子进行相对含量比较的实验要求。随着脂类组学新技术如ＬＣＭＳ／ＭＳ的不断发展，定量的问题将得到更好的解决，为今后鞘脂的研究提供更先进的研究手段。４　参考文献：

［１］　ＳｉｍｏｎｓＫ，ＩｋｏｎｅｎＥ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｒａｆｔｓｉｎｃｅｌｌｍｅｍｂｒａｎｅｓ

［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８７（６６３３）：５６９－５７２．

［２］　ＹａｎｇＪ，ＤｕｅｒｋｓｅｎＨｕｇｈｅｓＰＪ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｐ５３ｉｎｄｅ

ｐｅｎｄｅｎｔ，ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｍｅｄｉａｔｅｄｃｙｔｏｌｙｔｉｃｐａｔｈｗａｙｉｎｐ５３ｎｅｇａｔｉｖｅｍｏｕｓｅｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＮｍｅｔｈｙｌＮｎｉｔｒｏＮｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００１，２７６（２９）：２７１２９－２７１３５．

［３］　ＨａｎｎｕｎＹＡ，ＬｕｂｅｒｔｏＣ．Ｃｅｒａｍｉｄｅｉｎｔｈｅｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ

目的 研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。 方法?┯τ没?质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人FL细胞株鞘脂类代谢的影响。 结果 非律平和制霉菌素均可影响FL细胞鞘脂类代谢,但是非律平(0.2 和10 μm

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ｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓＣｅｌｌＢｉｏｌ，２０００，１０（２）：７３－８０．

［４］　ＭｏｄｒａｋＤＥ，ＧｏｌｄＤＶ，ＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇＤＭ．Ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ

ｔａｒｇｅｔｓｉｎｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ，２００６，５（２）：２００－２０８．

［５］　ＫｏｋＪＷ，ＳｉｅｔｓｍａＨ．Ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｅｎｚｙｍｅｓ

ａｓｔａｒｇｅｔｓｆｏｒａｎｔｉｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．ＣｕｒｒＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓ，２００４，５（４）：３７５－３８２．

［６］　ＹａｎｇＪ，ＹｕＹ，ＳｕｎＳ，ＤｕｅｒｋｓｅｎＨｕｇｈｅｓＰＪ．Ｃｅｒａｍｉｄｅ

ａｎｄｏｔｈｅｒｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｉｎｃｅｌｌｕｌａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ

，２００４，４０（３）：３２３－３５０．［７］　ＨｕａｎｇＹ，ＹａｎｇＪ，ＳｈｅｎＪ，ＣｈｅｎＦＦ，ＹｕＹ．Ｓｐｈｉｎｇｏ

ｌｉｐｉｄｓａｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎＮｍｅｔｈｙｌＮ′ｎｉｔｒｏＮｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００５，３３０（２）：４３０－４３８．

［８］　ＫｏｌｅｓｎｉｃｋＲ，ＨａｎｎｕｎＹＡ．Ｃｅｒａｍｉｄｅａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．

ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｃｈｅｍＳｃｉ，１９９９，２４（６）：２２４－２２５；［９］　ＨａｎＸ，ＧｒｏｓｓＲＷ．Ｇｌｏｂａｌａｎａｌｙｓｅｓｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｌｉｐｉｄｏｍ

ｅｓｄｉｒｅｃｔｌｙｆｒｏｍｃｒｕｄｅｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓｂｙＥＳＩｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ：ａｂｒｉｄｇｅｔｏｌｉｐｉｄｏｍｉｃｓ［Ｊ］．ＪＬｉｐｉｄＲｅｓ，２００３，４４（６）：１０７１－１０７９．

１０］　ＨａｎＸ，ＣｈｅｎｇＨ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｄｉｒｅｃｔｑｕａｎｔｉｔａ

ｔｉｏｎｏｆｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｐｅｃｉｅｓｆｒｏｍｌｉｐｉｄｅｘｔｒａｃｔｓｂｙｓｈｏｔｇｕｎｌｉｐｉｄｏｍｉｃｓ［Ｊ］．ＪＬｉｐｉｄＲｅｓ，２００５，４６（１）：１６３－１７５．

１１］　ＨａｎＸ，ＧｒｏｓｓＲＷ．Ｓｈｏｔｇｕｎｌｉｐｉｄｏｍｉｃｓ：ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ

ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｌｉｐｉｄｏｍｅｓｄｉｒｅｃｔｌｙｆｒｏｍｃｒｕｄｅｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］．ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍＲｅｖ，２００５，２４（３）：３６７－４１２．

１２］　ＷｅｎｋＭＲ．Ｔｈｅｅｍｅｒｇｉｎｇｆｉｅｌｄｏｆｌｉｐｉｄｏｍｉｃｓ［Ｊ］．Ｎａｔ

ＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ，２００５，４（７）：５９４－６１０．

１３］　ＨｕａｎｇＹ，ＳｈｅｎＪ，ＷａｎｇＴ，ＹｕＹＫ，ＣｈｅｎＦＦ，ＹａｎｇＪ．

ＡｌｉｐｉｄｏｍｉｃｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＮｍｅｔｈｙｌＮ′ｎｉｔｒｏＮ

ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ　２００７　Ｏｃｔ；２１（５）

ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅｏｎｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．ＡｃｔａＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＳｉｎ（Ｓｈａｎｇｈａｉ），２００５，３７（８）：５１５－５２４．

［１４］　ＡｗａｓｔｈｉＫａｌｉａＭ，ＳｃｈｎｅｔｋａｍｐＰＰ，ＤｅａｎｓＪＰ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎ

ｔｉａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｉｌｉｐｉｎａｎｄｍｅｔｈｙｌｂｅｔａｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｏｎＢｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００１，２８７（１）：７７－８２．

［１５］　ＦｏｒｔｉｎＤＬ，ＴｒｏｙｅｒＭＤ，ＮａｋａｍｕｒａＫ，ＫｕｂｏＳ，Ａｎｔｈｏｎｙ

ＭＤ，ＥｄｗａｒｄｓＲＨ．Ｌｉｐｉｄｒａｆｔｓｍｅｄｉａｔｅｔｈｅｓｙｎａｐｔｉｃｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆａｌｐｈａｓｙｎｕｃｌｅｉｎ［Ｊ］．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ，２００４，２４（３０）：６７１５－６７２３．

［１６］　ＶｅｒｈｅｉｊｅｎＩ，ＴｏｕｒｌｏｕｓｓｅＤ，ＶａｎｄｅｒｈｅｙｄｅｎＰＭ，Ｂａｃｋｅｒ

ＪＰ，ＶａｕｑｕｅｌｉｎＧ．ＥｆｆｅｃｔｏｆｓａｐｏｎｉｎａｎｄｆｉｌｉｐｉｎｏｎａｎｔａｇｏｎｉｓｔｂｉｎｄｉｎｇｔｏＡＴ１ｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｎｉｎｔａｃｔｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００４，６７（８）：１６０１－１６０６．

［１７］　ＫｈｉｎｅＡＡ，ＴａｍＰ，ＮｕｔｉｋｋａＡ，ＬｉｎｇｗｏｏｄＣＡ．Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ

Ａａｎｄｆｉｌｉｐｉｎｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｔｗｏｇｌｏｂｏｔｒｉａｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ／ｖｅｒｏｔｏｘｉｎ１ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎＶｅｒｏｃｅｌｌｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ［Ｊ］．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００４，１４（８）：７０１－７１２．

［１８］　ＺｉｎｋＳ，ＭｅｈｌｇａｒｔｅｎＣ，ＫｉｔａｍｏｔｏＨＫ，ＮａｇａｓｅＪ，

ＪａｂｌｏｎｏｗｓｋｉＤ，ＤｉｃｋｓｏｎＲＣ，ｅｔａｌ．Ｍａｎｎｏｓｙｌｄｉｉｎｏｓｉｔｏｌｐｈｏｓｐｈｏｃｅｒａｍｉｄｅ，ｔｈｅｍａｊｏｒｙｅａｓｔｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ，ｇｏｖｅｒｎｓｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓｚｙｍｏｃｉｎ［Ｊ］．ＥｕｋａｒｙｏｔＣｅｌｌ，２００５，４（５）：８７９－８８９．

［１９］　ＣｈｕＣＬ，ＢｕｃｚｅｋＴｈｏｍａｓＪＡ，ＮｕｇｅｎｔＭＡ．Ｈｅｐａｒａｎｓｕｌ

ｐｈａｔｅｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓｍｏｄｕｌａｔｅｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２ｂｉｎｄｉｎｇｔｈｒｏｕｇｈａｌｉｐｉｄｒａｆｔｍｅｄｉａｔｅｄｍｅｃｈａｎｉｓｍ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＪ，２００４，３７９（Ｐｔ２）：３３１－３４１．

［２０］　ＯｇｒｅｔｍｅｎＢ，ＨａｎｎｕｎＹＡ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｓｐｈｉｎｇｏ

ｌｉｐｉｄｓｉｎｃａｎｃｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．ＮａｔＲｅｖＣａｎｃｅｒ，２００４，４（８）：６０４－６１６．

［２１］　ＲｅｙｎｏｌｄｓＣＰ，ＭａｕｒｅｒＢＪ，ＫｏｌｅｓｎｉｃｋＲＮ．Ｃｅｒａｍｉｄｅ

ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｓａｔａｒｇｅｔｆｏｒｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔ，２００４，２０６（２）：１６９－１８０．

［［［［

目的 研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。 方法?┯τ没?质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人FL细胞株鞘脂类代谢的影响。 结果 非律平和制霉菌素均可影响FL细胞鞘脂类代谢,但是非律平(0.2 和10 μm

中国药理学与毒理学杂志　　２００７年１０月；２１（５）·４２１·

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｉｌｉｐｉｎａｎｄｎｙｓｔａｔｉｎｏｎｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎ

ｈｕｍａｎａｍｎｉｏｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ

１２２１１

ＬＩＵＧｕａｎｇＹｉ，ＭＡＸｉａｏＱｉｏｎｇ，ＳＨＥＮＪｉｎｇ，ＤＯＮＧＺｈｅｎｇＷｅｉ，ＹＡＮＧＪｕｎ

（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙａｎｄＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，

ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００５８，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡＩＭ　Ｔｏｓｔｕｄｙｗｈｅｔｈｅｒｍａｃｒｏｌｉｄｅｓ

ｐｏｌｙｅｎｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｆｉｌｉｐｉｎａｎｄｎｙｓｔａｔｉｎｈａｖｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｆｆｅｃｔｓｏｎｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎ

（ＦＬ）ｃｅｌｌｓ．ＭＥＴＨｈｕｍａｎａｍｎｉｏｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ

　ＡｆｔｅｒＦＬｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｔｗｏＯＤＳ

０．２ａｎｄ１０μｍｏｌ·ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｆｉｌｉｐｉｎ（

－１Ｌ）ａｎｄｎｙｓｔａｔｉｎ（０．０５４ａｎｄ０．１０８μｍｏｌ·－１Ｌ），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃ

，ｌａｓｅｒｄｅｔｅｄａｎｄｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｍａｔｒｉｘａｓｓｉｓｔｅｄ

ｓｏｒｐｔｉｏｎｉｏｎｉｚｉｎｇｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅ

ＥＳＵＬＴＳ　Ｂｏｔｈｆｉｌｉｐｉｎａｎｄｎｙｓｔｒｙａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒ

ｔａｔｉｎａｆｆｅｃｔｅｄｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｈｏｗ

－１

，ｆｉｌｉｐｉｎ（０．２ａｎｄ１０μｍｏｌ·Ｌ）ｍａｉｎｌｙｅｖｅｒａｆｆｅｃｔｅｄｃｅｒａｍｉｄｅ，ａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｔｈｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｍａｎｙｎｅｗｃｅｒａｍｉｄｅｓｐｅｃｉｅｓ．Ｏｎｔｈｅｏｔｈｅｒ

－１

ｈａｎｄ，ｎｙｓｔａｔｉｎ（０．０５４ａｎｄ０．１０８μｍｏｌ·Ｌ）ａｆｆｅｃｔｅｄｂｏｔｈｃｅｒａｍｉｄｅａｎｄｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎｔｏｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｎｅｗｃｅｒａｍｉｄｅｓｐｅ

，ｎｙｓｔａｔｉｎａｌｓｏｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｃｉｅｓ

ｏｆｓｅｖｅｒａｌｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎｓｐｅｃｉｅｓ．Ｎｏｎｅｔｈｅｌｅｓｓ，ｔｈｅｈｉｇｈｅｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｎｙｓｔａｉｎ（０．１０８

－１

ｍｏｌ·Ｌ）ｉｎｄｕｃｅｄｔｈｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｏｒｅｃｅμｒａｍｉｄｅｓｐｅｃｉｅｓｔｈａｎｔｈｅｌｏｗｅｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ

－１

０．０５４μｍｏｌ·Ｌ）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮｎｙｓｔａｔｉｎ（

Ｂｏｔｈｆｉｌｉｐｉｎａｎｄｎｙｓｔａｔｉｎａｆｆｅｃｔｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ

，ｈｏｗｅｖｅｒｔｈｅｙｍａｙｔａｒｇｅｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ

ｓｔｅｐｓｉｎｔｈｅｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｐａｔｈｗａｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｉｌｉｐｉｎ；ｎｙｓｔａｔｉｎ；ｌｉｐｉｄｏｍｉｃｓ；ｃｅ

；ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎｓｒａｍｉｄｅｓ

ｏｕｎｄａｔｉｏｎｉｔｅｍ：ＴｈｅｐｒｏｊｅｃｔｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙＮａｔｉｏｎａｌＮａｔ　　Ｆ

（３０３００２７７）；ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ

ＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（３０４７１９５６）；ａｎｄＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（３０６００２２０）



Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．

（本文编辑　齐春会）

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