欧蒙过敏原总IgE说明书

总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）说明书

[产品名称]

[通用名称] 总IgE检测试剂盒(酶联免疫法) [英文名称] Total IgE ELISA

[包装规格] 订货号 靶抗原 EV 3840-9601E 人IgE [预期用途] 用于体外定量检测人血清或血浆中总IgE。

基质 包被抗体的微孔板 规格 96?01(96) 适应症：过敏性疾病 、蠕虫病、湿疹性或非湿疹性皮炎、IgE骨髓瘤等。 临床意义：

1） 过敏反应和特应性疾病的诊断：除了皮肤和激发实验、检测特异性IgE外，变态反应性疾病的诊断还包括检测总IgE水平。但是，过敏反应并不总伴有总IgE水平的升高（成人>100 IU/ml）。相反，低水平的IgE（成人<25 IU/ml）也不能排除患有特应性过敏反应。通过长期脱敏治疗和远离过敏原，总IgE滴度通常会下降。

通过测定总IgE水平可以区分过敏性哮喘和内源性哮喘，过敏性鼻炎和血管舒缩性鼻炎以及婴儿特应性皮炎和脂溢性皮炎。在特应性皮炎患者中可见极高浓度的IgE（数千IU/ml）。 其他过敏性（和高IgE水平）的疾病包括急性复发性或慢性荨麻疹、复发性Quincke水肿（血管神经性水肿）、胃肠道不耐受和不明原因的疹病。检测总IgE也可用于鉴别诊断肺部嗜酸性粒细胞浸润、变态反应性曲霉病、外源性变态反应性肺泡炎（农夫肺和养鸽者肺）和Churg-Strauβ 综合征。

2） 其他疾病中的IgE：高IgE水平的非变态反应性疾病包括多种形式的蠕虫病，如弓蛔虫病、蛔虫病、血吸虫病、钩虫病、利什曼原虫病、毛线虫病。然而，在绦虫病和蛲虫病中未见有IgE水平升高。对于大多数病例，经有效治疗后，IgE水平可降至正常值范围内。

在下列疾病中可检测出高浓度的IgE： ? 湿疹性或非湿疹性皮炎； ? IgE骨髓瘤；

? 急性系统性红斑狼疮（SLE）； ? 移植物抗宿主反应；

? T细胞缺陷（Wiskott-Aldrich 综合征）； ? 2度或3度烧伤； ? 耳鼻喉肿瘤；

? 肝病（尤其与酒精滥用有关）；

? AIDS晚期阶段（CD4+ T细胞明显下降）。 在下列疾病中可有IgE缺陷：

? X-染色体相关低丙种球蛋白血症； ? 严重的联合免疫缺陷（SCID）； ? 毛细管扩张性运动失调； ? 肺纤维化疾病； ? 极少数的健康人。

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[检验原理] 试剂盒中每个微孔板条有8个可拆分的包被有抗人IgE多克隆抗体的微孔。第一次温育时，稀释后的样本在微孔中反应。如果样本阳性，特异性IgE与抗体结合。为了检测结合的IgE，加入能发生颜色反应的酶标抗人IgE抗体（酶结合物）进行第二次温育。然后加入酶底物，发生颜色反应。通过标准品1-4绘制的标准曲线来确定IgE浓度。

[主要组成成分] 成分 颜色 规格 标识 1. 微孔板：包被有抗原的微孔12条，每条有8个可拆分的微孔，直接使用 2. 标准品1：500 IU/ml（IgE， 人），直接使用 3. 标准品2：100 IU/ml（IgE， 人），直接使用 4. 标准品3：10 IU/ml（IgE， 人），直接使用 5. 标准品4： 0 IU/ml（IgE， 人），直接使用 6. 阳性对照1：（高浓度IgE，人），直接使用 7. 阳性对照2：（低浓度IgE，人），直接使用 8. 酶结合物：过氧化物酶标记的抗人IgE（小鼠），直接使用 9. 样本缓冲液：直接使用 10. 清洗缓冲液：10倍浓缩 11. 色原/底物液：TMB/H2O2，直接使用 12. 终止液：0.5M硫酸，直接使用 13. 产品说明书 14. 质控表 LOT 产品批号 IVD 体外检测 --- 红色，颜色随抗体浓度的降低而变浅 深蓝 浅蓝 紫色 橙色 无色 无色 无色 --- --- 12?8 1?2.0ml 1?2.0ml 1?2.0ml 1?2.0ml 1?2.0ml 1?2.0ml 1?12ml 1?100ml 1?100ml 1?12ml 1?12ml 1份 1张 储存温度 未开封可稳定至 STRIPS CAL1 CAL2 CAL3 CAL4 POS CONTROL1 POS CONTROL2 CONJUGATE SAMPLEBUFFER WASHBUFFER 10× SUBSTRATE STOP SOLUTION 1．不同批号试剂盒内的酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液可互换。 2．定标：采用国际参考品NIBSC 75/502 (National Institute for Biological Standards and Control, Hertfordshire, England) 定标，采用国际单位(IU)。NIBSC 75/502血清中抗体浓度为5000 IU/ml。

[储存条件及有效期] 2-8°C保存，不要冰冻。未开封前，试剂盒中各成分在有效期前均稳定有效。

1. 包被有抗原的微孔板：自第一次开封后，抗原包被的微孔板在干燥的2-8?C的环境中保存4个月。

2. 清洗缓冲液：稀释后的缓冲液于2-8?C最多可稳定4周。

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欧 蒙 [样本要求]

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样本：人血清或EDTA、肝素、柠檬酸盐抗凝的血浆。

稳定性：待测患者样本于2-8?C可储存14天，稀释后的样本需在同一个工作日检测。

样本稀释：患者样本用样本缓冲液1:10稀释。例如，可取100μl血清用900μl样本缓冲液稀释并使用混匀器混匀(加样枪不适合于混匀）。

注意：标准品和对照品已经稀释，直接使用，勿需再稀释！

[检验方法]

试剂的准备和稳定性

注意：所有试剂在使用前均应在室温（18-25?C）平衡约30分钟。试剂首次开封后，在无污染的情况下，于2-8?C保存，可稳定至所标示的有效期。

- 抗原包被的微孔：直接使用。在外包装密封线咬合部的上端剪开保护袋，为防止板条受潮，只

有当微孔板平衡到室温后才可打开包装。剩余板孔应立即放回保护袋并封好（保留干燥剂）。从第一次打开保护袋起，抗原包被的微孔可在干燥的2-8?C的环境中保存4个月。

- 标准品和对照血清：直接使用，使用前应充分混匀。

- 酶结合物：直接使用，使用前应充分混匀。

- 样本缓冲液：直接使用。

- 清洗缓冲液：10倍浓缩。如果浓缩清洗缓冲液中出现结晶，稀释前应加热到37?C并充分混

匀溶解。用干净吸管从瓶中吸取需要量的浓缩清洗缓冲液用蒸馏水1:10稀释（1份浓缩清洗缓冲液加9份蒸馏水）。如：需清洗一条微孔板条，则可取5ml浓缩清洗缓冲液用45ml蒸馏水稀释。稀释后的缓冲液如处理得当放置于2- 8?C可稳定4周。

- 色原/底物液：直接使用。因内容物对光敏感，使用后应立即盖好瓶盖。色原/底物液应为无色

澄清，如果变蓝则不要使用。

- 终止液：直接使用。

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欧 蒙 （部分）手工操作 样本温育： （第一步） 清洗：

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操作流程

按加样方案向相应微孔分别加100μl标准品、阳性对照、阴性对照或稀释后的样本，室温（18-25?C）温育30分钟。

手工：倒掉微孔板内液体，用稀释后的清洗缓冲液洗3次，每次300μl。 自动：用稀释后的清洗缓冲液清洗3次，每次450μL程序设定：如TECAN洗板机可设为“Overflow Modus”） 。

每次清洗时缓冲液在微孔中至少保留30-60秒，然后再倒掉。清洗后（包括手工或自动）应将微孔板倒置在吸水纸上拍打，以去除残存的清洗液。 注意：清洗后遗留在微孔中的残液（＞10μl）可干扰底物反应而导致吸光度值偏低。 清洗不充分（如清洗少于3次、清洗液太少或清洗时间太短）可能导致吸光度值偏高。

酶结合物温育： （第二步） 清洗： 底物温育： （第三步） 终止反应： 比色：

滴加100μl酶结合物至每一微孔，室温（18-25?C）温育30分钟。

倒掉微孔板内液体，如上述步骤清洗。

滴加100μl色原/底物液至每一微孔，室温（18-25?C）避光温育15分钟。

以与加色原/底物液相同的速度和顺序滴加100μl终止液至每一微孔。 450nm比色，参考波长620-650nm，加完终止液后30分钟之内比色，比色前轻轻振动微孔板以使液体扩散均匀。

采用全自动分析仪完成实验 使用分析仪可实现样本稀释和实验操作的全自动化。欧蒙公司授权的相关软件中的温育条件可能和ELISA 试剂盒说明书中的条件有轻微偏离。不过，欧蒙 Analyzer I，Analyzer I-2P 或Dynex 公司DSX 的实验条件与欧蒙ELISA 产品组合的有效性已经得到验证，可索取验证文件。也可以使用其他品牌开放式的全自动分析仪，但是组合的有效性需要用户自行确认。

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8 9 10 11 12 加样方案

1 C1 C2 C3 C4 Pos1 Pos2 P1 P2 2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P10 3 P11 P12 P13 P14 P15 P16 P17 P18 4 P19 P20 P21 P22 P23 P24 5 6 7 标准品（C1到C4）、阳性对照1和2（pos 1和pos2）和患者样本各在一孔中温育。每份样本复孔检测可提高实验的可靠性。

每一微孔可从板条上取下，这样可根据样本的数量选择试剂的用量，减少了试剂浪费。 阳性和阴性对照为实验可靠性的内部对照，每次实验都必须做。

[参考范围] 非过敏人群中IgE浓度正常范围上限为100 IU/ml（Thomas，1992）。用本检测系统检测250份献血者血清，结果几乎呈正态分布，与文献报道一致（Klink 等，1990）。

[检测结果的解释]

定量检测：分别以4份标准血清的浓度和吸光度为横、纵坐标点对点作标准曲线(线性/线性)，根据此标准曲线求出样本中IgE的浓度。下图仅为一典型标准曲线的示例，请不要用它来计算样本中抗体的浓度。如果采用自动方法判断结果，我们推荐使用三次函数插入法（cubic spline interpolation）以获得与实际曲线最接近的结果（判断软件：TECAN：EASYBase?，MICROTEK: Microwin?）。如果使用其他软件，三次函数插入法可能会产生问题。在这种情况下，可使用Akima插入法（TECAN：easyWIN fitting? ）或二次多项式。如果采用点对点线性推断法，则必须考虑到：当IgE浓度大于100IU/ml时，测量值可能会产生微小的偏差。 下图仅为一典型标准曲线的示例，请不要用它来计算患者样本中抗体的浓度。

21,5Extinktion10,500100200300400500600IgE [IU/ml]

如果患者样本的吸光度超出了标准品1（500 IU/ml），可报告为“＞500 IU/ml”。建议将样本1:40稀释后重新测定，从标准曲线计算出的数据再乘以4即为样本中抗体的浓度。

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/n5qt.html