葛根不同提取工艺的实验研究_金福

葛根不同提取工艺的实验研究

金 福,易 红,冯伟红,杨 华

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2

2*

(1 浙江省临海市第二人民医院,浙江临海317016;2 中国中医科学院中药研究所,北京100700)

葛根为临床常用中药,为豆科植物野葛Puerar ialobata(Wild.)Ohwi的干燥根,具有解肌退热、升阳透疹、生津止泻的功效。葛根又属于药食同源,也

广泛地被应用于保健食品和食品中。现代化学、药理研究结果认为葛根中以葛根素为代表的异黄酮类成分具有改善心、脑血液循环,扩张冠状动脉,降血压,降血糖等作用,是葛根中的主要有效成分。有关葛根提取工艺的研究已有很多

[1]

次加醇180mL(6倍量),回流1h,120目筛网滤过,放置过夜。第2天离心2500r 10min,上清液回收乙醇,水浴浓缩至稠膏状,真空减压干燥,得干浸膏。测定干浸膏得量和葛根素含量,平行做2份。2.1.2 水提工艺 称取葛根饮片30 0g,加水回流提取3次,每次加水300mL(10倍量),回流1h,80目加4层纱巾滤过,水浴浓缩至稠膏状,真空减压干燥(65 ,8h),得干浸膏。测定干浸膏得量和葛根素含量。平行做2份。

2.1.3 提取物中葛根素的含量测定方法

[3]-1

,大部分单独进行

了水提工艺或醇提工艺研究,只有一部分进行了简单的水提与醇提工艺的对比,其结果也不尽相同。

本研究以葛根素含量为指标,系统比较了水与不同浓度乙醇对于葛根中葛根素提取量的影响,并对水提工艺的条件进行筛选,为葛根的工业化提取工艺提供实验依据。1 材料

葛根饮片购于北京卫仁饮片厂,经鉴定植物来源为豆科植物野葛P lobata的干燥根。葛根素对照品(中国药品生物制品检定所,批号752 200108)。甲醇(GR,北京化工厂);水(自制高纯水);其他试剂均为分析纯。HP1100高效液相色谱仪,G1315ADAD检测器,G1311A四元泵,G1313A自动进样器,G1316A柱温箱,G1322A在线脱气机。HPCHEM色谱工作站。LXJ 84 01离心机(北京医疗仪器修理厂)。2 方法与结果

2.1 葛根不同提取溶剂的选择

由于葛根素的水溶解性不好

[2]

色谱

-1

条件:色谱柱ZorbaxC18(4 6mm 250mm);流动相甲醇 水 冰醋酸(25 75 0 1);流速1mL min,柱温35 ,检测波长251nm。

供试品溶液制备:取葛根提取物研细,过60目筛,精密称取约10mg,置50mL具塞锥形瓶中,精

密加入30%乙醇25mL,密塞,称重,加热回流提取0 5h,取出,放冷,再称重,用30%乙醇补足减失的质量,摇匀,滤过。取续滤液,即得。

对照品溶液制备:取葛根素对照品约8 6mg,精密称定,置100mL量瓶中,加甲醇溶解至刻度,摇匀;精密量取葛根素溶液1mL置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL含葛根素对照品0 0086mg)。

标准曲线的的绘制:在上述色谱条件下,精密吸取葛根素对照品溶液(0 0086g L

-1

)0 5,1,5,

,选择生产中常

10,15,20,25 L注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以葛根素的进样微克数为横坐标,以峰面积的

积分值为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程Y=-26349+2323889X,r=0 9998,结果表明,葛根素在0 043~2 15 g呈线性关系。

样品测定取供试品溶液用0 45 m微孔滤膜滤过,分别吸取各供试品液10 L,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定葛根素的含量。2.1.4 葛根的出膏率和葛根素含测结果 葛根不

用的水和不同浓度乙醇为提取溶剂进行提取试验。

2.1.1 醇提工艺 称取葛根饮片30 0g,分别加入30%,50%,70%,90%浓度乙醇,回流提取3次,每

[收稿日期] 2009 01 21

[基金项目] 国家 十五 科技攻关项目(2001BA701A37 4)[通信作者]

*

杨华,Te:l(010)84017310,E mai:lyanghua2796@si

同工艺提取物中葛根素的含量测定结果、出膏率和葛根素提取率见表1。

表1 不同溶剂提取葛根中葛根素提取率比较%

溶剂水30%乙醇50%乙醇70%乙醇90%乙醇

出膏率31 5818 1217 3417 2411 91

质量分数6 72510 35511 49012 68016 165

提取率81 5774 0876 9986 6477 46

No.123方差来源

ABCD(误差)

表4 葛根素方差分析

离差平方和2 44617 521646 771 07

自由度

2222

均方差1 223 7623 380 53

F2 287 0343 70

* 显著性

表5 葛根水提取工艺验证实验

出膏率/%24 7424 6525 48

葛根素含量/mg g-121 1221 0821 43

葛根素转移率

/%79 8879 7381 05

转移率平均值

/% 80 22

由表1可见以水为溶剂提取时,葛根素的提取率达到80%以上;以不同浓度的乙醇提取时,除

70%乙醇的提取率达到80%以上外,其他均低于水的提取率。但由于上述工艺中70%乙醇的用量为6倍,水的用量为10倍,难比较,因此又做了用10倍量70%乙醇提取的试验,结果葛根素的提取率为79 16%。由此可知选择以水作为葛根的提取溶剂,即可保证葛根素的提取率,又可节约能源,降低生产成本。故选择以水作为葛根的提取溶剂。

2.2 正交试验筛选水提取最佳工艺条件

称取葛根饮片9份,每份30g,按L9(3)正交表安排加水回流提取试验见表2,提取液分别浓缩干燥后测定葛根素的含量和出膏率,并对其进行方差分析,结果见表3~5。

表2 因素水平表

水平123

A加水量/倍

81012

B提取时间/h

11 52

C提取次数

123

4

由表4可知,A因素(加水量)和B因素(提取

时间)对结果无显著性影响;C因素(提取次数)对结果有明显影响,确定C3为最佳。故最佳条件为A3B1C3,也即:加水12倍,提取3次,每次1h。2.3 葛根水提取工艺验证试验

取葛根200g,3份,加水12倍,加热提取3次,每次1h。滤过,合并滤液,离心后分取上清夜进行减压干燥。计算出膏率,测定葛根素含量。

由表5结果可知3批验证平均得膏率为24 96%,葛根素的转移率为80 22%。3 讨论

有文献报道通过TLC比较发现,葛根的水和乙醇提取液,薄层斑点的数目、大小、色调、及Rf值均一致,与本实验结果基本一致。说明以水为溶剂提取葛根的有效成分,符合传统用药习惯,既可保证葛根素的提取率,又可节约能源,降低生产成本。我国的葛根野生资源丰富,本实验得出的工艺条件适合用于配方颗粒、保健食品添加物、进一步提纯所用的粗提物的提取。

[参考文献]

[1] 易 红,杨 华.葛根的品种产地和提取工艺研究进展概况

[J].中国实验方剂学杂志,2006,12(11):60.

[2] 王 成,刘玉玲,谷士杰,等.葛根素的溶解性及其络合助溶的

研究[J].中国药学杂志,1993,28(5):294.[3] 中国药典.一部[S].2000:273.

[4] 杨 红,杨红琳.用薄层色谱法对水和乙醇作葛根成分提取溶

剂的比较研究[J].华西药杂志,1994,9(1):35.

[5] 崔九成,宋小妹,张培芳,等.葛根总黄酮提取工艺研究[J].西

北药学杂志,199,14(10):202.

[4 5]

表3 正交试验结果

No.123456789

出膏率/%17 7323 1324 0322 2125 5617 7325 7117 4019 81

葛根素/mg g-1

9 980414 016113 675914 750416 36909 847216 306111 37489 9449

[责任编辑 周 驰]

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