紫外可见光谱分析实验讲义 - 图文

第十三章 紫外可见光谱分析

在仪器分析中紫外—可见分光光度法是历史悠久、应用最为广泛的一种光学分析方法。他是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析，所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外—可见分光光度法。

分光光度法是在比色法的基础上发展起来的，两者所依据的原理基本上是相同的。由于分光光度法采用了更为先进的单色系统和光检测系统，使得分光光度法在灵敏度、准确度、精密度及应用范围上都大大的优于比色法。

物质分子吸收一定波长的紫外光时，分子中的价电子从低能级跃迁到高能级而产生的吸收光谱叫紫外光谱。紫外吸收光谱是由于分子中价电子的跃迁而产生的，所以又称为电子光谱。由于电子跃迁的同时，伴随着振动能级和转动能级的跃迁，故紫外光谱为带状光谱。紫外吸收光谱的波长范围是10-400nm(纳米), 其中10-200nm 为远紫外区（这种波长的光能够被空气中的氮、氧、二氧化碳和水所吸收，因此只能在真空中进行研究，故这个区域的吸收光谱称真空紫外），200-400nm为近紫外区, 一般的紫外光谱是指近紫外区。波长在400～800nm范围的称为可见光谱。常用的分光光度计一般包括紫外及可见两部分，波长在200～800nm（或200～1000nm）

相对其他光谱分析方法来说，紫外—可见分光光度法有如下特点，1）、、其仪器设备和操作都比较简单，分析速度较快，且分析成本低；2) 灵敏度较高, 由于相应学科的发展，使新的有机显色剂的合成和研究取得可喜的进展，从而对元素测定的灵敏度大大提高了一步。特别是由于多元络合物和各种表面活性剂的应用研究，使许多元素的摩尔吸光系数由原来的几万提高到几十万。相对于其它痕量分析方法而言，光度法的精密度和准确度一致公认是比较高的。不但在实际工作中光度法被广泛采用，在标准参考物质的研制中，它更受重视，很多光度分析法已制定成为标准方法。如在紫外区直接检测抗坏血酸时，其最低检出浓度可达到10-6g/mL ；3）有较好的选择性，目前已有些元素只要利用控制适当的显色条件就可直接进行光度法测定，如钴、铀、镍、铜、银、铁等元素的测定，已有比较满意的方法了，通过适当的选择测量条件，一般可在多种组分共存的体系中，对某一物质进行测定；4）精密度和准确度较高。在仪器设备和其他测量条件较好的情况下，对于一般的分光光度法来说，其浓度测量的相对误差在1～3%范围内，如采用示差分光度法测量，则误差往往可减少到千分之几。虽然相对误差比重量法和滴定法大，但对于微量组分的测定已经满足要求；5）适用浓度范围广，可从常量分析（尤其是使用示差法）到痕量分析（经预富集后）；6）用途广泛，由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收，因此均可借此法加以测定。到目前为止，几乎化学元素周期表上的所有元素（除少数放射性元素和惰性元素之外）均可采用此法。在医药、化工、冶金、环境保护、地质等诸多领域，紫外—可见分光光度法不但可以进行定量分析，还可以对被测物质进行定性分析和结构分析，进行官能团鉴定、相对分子质量测定、配合物的组分及稳定常数的测定等等。

由于分光光度法具有以上优点，因此目前仍广泛地应用于化工、冶金、地质、医学、食品、制药等部门及环境监测系统。

13.1 基本原理

紫外可见吸收光谱遵从朗伯－比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即

A= κ cl

式中比例常数κ与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。

朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。

13.1.1 理论基础

紫外可见吸收研究的是分子内部的运动，可分为分子内原子在平衡位置附近的振动，价电子运动和分子绕其重心的转动。所以分子的能量E等于以上三项之和：

E?Ee?Ev?Er

式中，Ee、Ev、Er分别代表电子能、振动能和转动能。

分子从外界吸收能量后，就引起分子能级的跃迁，即从基态能级跃迁到激发态能级。分子吸收能量具有量子化的特征：

?E?E2?E1?h??hc?

紫外吸收光谱是由于分子中的电子跃迁产生的。按分子轨道理论，在有机化合物分子中这种吸收光谱取决于分子中成键电子的种类、电子分布情况，根据其性质不同可分为3种电子：（1）形成单键的σ电子 ；（2）形成不饱和键的π电子 ；（3）氧、氮、硫、卤素等杂原子上的未成键的n电子

图13.1 基团中的σ，π，n成键电子

当它们吸收一定能量ΔE后，将跃迁到较高的能级，占据反键轨道。分子内部结构与这种特定的跃迁是有着密切关系的，使得分子轨道分为成键σ轨道、反键σ*轨道、成键π轨道、反键 π* 轨道和n轨道，其能量由低到高的顺序为：σ<π

图13.2 分子轨道中的能量跃迁示意图

因而将这些跃迁分为：

（1）N→V 跃迁：由基态轨道跃迁到反键轨道（包括σ→σ*跃迁和π→π*跃迁）；

（2）N→Q跃迁：分子中未成键n电子激发跃迁到反键轨道（包括n→σ*跃迁和n→π*跃迁）；

（3）N→R跃迁：σ键电子逐步激发到各个高能级上，最后电离成分子离子的跃迁（光致电离）；

（4）电荷迁移跃迁：在光能激发下，物质（化合或络合物）中的电荷重新分布，导致电荷从化合物的一部分迁移到另一部分而产生吸收光谱。

因此，有机化合物价电子可能产生的主要跃迁为σ→σ*、n→σ*、n→π*和π→π*。各种跃迁所需能量大小为：

σ→σ*＞n→σ*≥π→π*＞n→π*

n? ? *跃迁: 当不饱和键上连有杂原子（如羰基、硝基）时，杂原子上的n电子能跃迁到π*轨道。n→π*跃迁是四种跃迁中所需能量最小的，它所对应的吸收带位于200～400nm的近紫外区。如果带杂原子的双键基团与其它双键基团形成共轭体系，其n→π*跃迁产生的吸收带将红移，例如丙酮的n→π*跃迁在276nm，π→π*跃迁在166nm，而4-甲基-3-戊烯酮的两个相应吸收带分别红移至313和235nm。但是n? ? *跃迁是禁阻跃迁，所以吸收强度很弱。

? ? ? *跃迁: 不饱和键中的π电子吸收能量跃迁到π*反键轨道。π→π*跃迁所需能量较n? ? *跃迁的大，吸收峰波长较小。孤立双键的π→π*跃迁产生的吸收带位于160～180nm，仍在远紫外区。但在共轭双键体系中，吸收带向长波方向移动（红移）。共轭体系愈大，π→π*跃迁产生的吸收带波长愈长。例如乙烯的吸收带位于162nm，丁二烯为217nm，1，3，5－己三烯的吸收带红移至258nm。这种因共轭体系增大而引起的吸收谱带红移是因为处于共轭状态下的几个π轨道会重新组合，使得成键电子从最高占有轨道到最低空轨道之间的跃迁能量大大降低。

n ? ?*跃迁: 是氧、氮、硫、卤素等杂原子的未成键n电子向σ反键轨道跃迁当分子中含有－NH2 、－OH、－SR、－X等基团时，就能发生这种跃迁。n电子的n→σ*跃迁所需能量较大，偏于远紫外区，一般出现在200nm附近，受杂原子性质的影响较大。

?? ?*跃迁: 是单键中的σ电子在σ成键和反键轨道间的跃迁。因σ和σ*之间的能级差最大，所以σ→σ*跃迁需要较高的能量，相应的激发光波长较短，在150～160nm范围，

落在远紫外光区域，超出了一般紫外分光光度计的检测范围。

电荷迁移跃迁: 用光照射化合物时，电子从给予体向与接受体相联系的轨道上的跃迁称为电荷迁移跃迁。这种跃迁谱带较宽，吸收强度大。

无机化合物产生的跃迁主要为电荷迁移跃迁和配位场跃迁。

既然一般的紫外光谱是指近紫外区，即 200-400nm，那么就只能观察 ? ? ? *和 n? ? * 跃迁。也就是说紫外光谱只适用于分析分子中具有不饱和结构的化合物。

图13.3 电子跃迁所处的波长范围及强度

13.1.2 紫外光谱中常用的名词术语

发色团（chromophore）：也称生色团，是指在一个分子中产生紫外吸收带的基团，一般为带有π电子的基团。有机化合物中常见的生色团有：羰基、硝基、双键、三键以及芳环等。发色团的结构不同，电子跃迁类型也不同，通常为n→ π *、π→π*跃迁，最大吸收波长大于210nm。

助色团（auxochrome）：有些基团，本身不是发色团，但当它们与发色团相连时，可以使含有发色团的有机物的颜色加深, 这类基团称为助色团。助色团通常是带有孤电子对的原子或原子团，如：－OH、－ NH2、－NR2、－OR、－SH、－SR、－X（卤素）等。在这些助色团中，由于具有孤电子对的原子或原子团与发色团的π键相连，可以发生p－π共轭效应，结果使电子的活动范围增大，容易被激发，使 π→π*跃迁吸收带向长波方向移动，即红移。

红移（red shift）：也称向长波移动（bathochromic shift），当有机物的结构发生变化（如取代基的变更）或受到溶剂效应 的影响时，其吸收带的最大吸收波长（λmax）向长波方向移动的效应。

蓝移（blue shift）： 也称向短波移动（hypsochromic shift），与红移相反的效应，即由于某些因素的影响使得吸收带的最大吸收波长（λmax）向短波方向移动的效应。

增色效应（hyperchromic effect）：或称浓色效应，使吸收带的吸收强度增加的效应。 减色效应（hypochromic effect）：或称浅色效应，使吸收带的吸收强度减小的效应。 强带：在紫外光谱中，凡摩尔吸光系数大于104的吸收带称为强带。产生这种吸收带的

电子跃迁往往是允许跃迁。

弱带：凡摩尔吸光系数小于1000的吸收带称为弱带。产生这种吸收带的电子跃迁往往是禁阻跃迁。

末端吸收（end absorption）： 指吸收曲线随波长变短而强度增大，直至仪器测量极限（190nm），在仪器极限处测出的吸收为末端吸收。

肩峰：指吸收曲线在下降或上升处有停顿，或吸收稍微增加或降低的峰，是由于主峰内隐藏有其它峰。

13.1.3 紫外吸收光谱与分子结构的关系

根据电子跃迁讨论有机化合物中较为重要的一些紫外吸收光谱，由此可以看到紫外吸收光谱与分子结构的关系。

(1) 饱和有机化合物

饱和碳氢有机化合物只有σ键电子，只产生σ→σ*跃迁，所需能量最大，吸收带在远紫外区。

当饱和单键碳氢化合物中的H被含孤对电子的O、N、X、S等杂原子取代时，产生能量低于σ→σ*跃迁的n→σ*跃迁，吸收波长向长波分析移动。所以饱和有机化合物中含有－NH2、－NR2、－OH、－OR、－SR、－Cl、－Br、－I等助色团时，有红移现象。

当生色团为P－π共轭系统时，产生n→π*跃迁的R带吸收。R带所需能量最小，是禁阻跃迁，因而吸收强度最小，波长最长，甚至进入可见光区。

(2) 不饱和脂肪族有机化合物

不饱和碳氢化合物含有π键电子，产生π→π*跃迁，吸收波长在175～200nm范围。当化合物中存在－NH2、－NR2、－OR、－SR、－Cl、－CH3等助色团时，也有红移现象，并使吸收强度增大。当不饱和脂肪族有机化合物含有共轭双键时，由于形成大π键，产生K带吸收，红移明显，并且吸收强度很大（ε≥104）；共轭双键越多，红移越显著，溶液甚至产生颜色，同时吸收强度也越大。

(3) 芳香族化合物

苯环结构中有三个乙烯的环状共轭体系，在185nm和204nm产生两个很强的E带吸收；在254nm产生中等强度的B带吸收的精细结构。若苯环含有取代基，B带吸收的精细结构消失，但吸收强度增加，并发生红移。助色团使E带吸收红移，生色团使E带吸收与K带吸收合并，并红移。

紫外光谱横坐标表示吸收光的波长，用nm（纳米）为单位，纵坐标表示吸收光的吸收强度，可以用A(吸光度)、T(透射比或透光率或透过率)、1-T(吸收率)、?(吸收系数) 中的任何一个来表示，吸收曲线表示化合物的紫外吸收情况。

13.1.4 紫外光谱中的几种吸收带

吸收带(absorption band): 在紫外光谱中，吸收峰在光谱中的波带位置。根据电子及分子轨道的种类，可将吸收带分为四种类型。

（1）K带：当分子中两个或两个以上双键共轭时，π→π*跃迁能量降低， 吸收波长红移，共轭烯烃分子如1，3-丁二烯的这类吸收在光谱学上称为K带（取自德文：共轭谱带， konjuierte）。K带出现的区域 为210～250nm，εmax>104（lgεmax>4），随着共轭链的增长，吸 收峰红移，并且 吸收强度增加。共轭烯烃的K带不受溶剂极性的影 响，而不饱和醛酮的K带 吸收随溶剂极性的增大而红移。

从<1到6,000 nm/min，有充分灵活的选择来获取实验数据。

汞灯端口：Evolution 201 & 220分光光度计是这类仪器中唯一提供汞灯校准附件的仪器。这个附件可提供全波长范围的波长准度和波长再现性的校准。在某些特殊的情况下，如需重做波长校准，即可用此附件测量并存储校正数据，就像我们在出厂前所做的一样。

闪烁氙灯光源：闪烁氙灯仅在进行测量的时候发出强烈的闪光。长效闪烁氙灯能够保证持续工作3年，具有使用成本低廉，维修间隔周期长，在可见光区和紫外区都具有很高强度的优点。最重要的是，闪烁氙灯不需要预热，能够适时进行测量。

13.3.5.2 仪器的操作步骤

1）开机 顺序开启紫外可见光谱仪电源（仪器开机后即进入自检）、计算机主机。 2）启动软件

A. 开启计算机主机开关后，计算机会根据配置进入Windows 或Vista操作系统。 B．双击桌面【thermo insight】快捷键后，进入thermo insight工作站。 3）仪器初始化

Evolution 220开机后即进入自检，大概5-10min后自检结束，仪器可由本机控制、计算机控制、或者把本机控制和计算机控制结合起来。一般我们选择由计算机控制具体的操作：用触摸笔点击触摸屏界面的thermo insight软件的

system setting system instrument control 中的computer 完成仪器的控制由仪器本身到计算机的转换

进入计算机的thermo insight工作站界面后，仪器即可测试，不需预热 4） 参数设定

计算机的thermo insight工作站界面上的HOMO菜单有四种相应的测试方法：Fixed; Scan; Quant; Rated.选择相应的测试方法，然后进入相应的 setting 菜单设置相应的测试参数即可测试

5） 光谱测定

A. 空白的紫外光谱：一般紫外测试的样品不论是固体还是液体测试，都需要空白样的测试，液体用相应的溶剂做空白，固体测试透过或者反射紫外可见光谱都有相应的空白配件。打开样品室盖，将空白对照放入样品室的样品池，盖上样品室盖。点击【measure scan】菜单界面下的“baseline”，进行背景扫描。

B.样品的紫外光谱：被测物质为液体的话溶液浓度不宜过高，一般为mg/L级，固体粉末则放入相应的固体粉末池连接积分球测试。

打开样品室盖，取出空白对照，将经适当方法制备的样品放入样品室的样品架上，盖上样品室盖。点击【measure scan】菜单界面下的“measure”，弹出对话框【confirm sample list】显示sample number，确认后点击【continue】进行样品扫描。数据采集完成后，弹出“数据采集完成”窗口，点击“是”。

C. 保存样品光谱数据：数据采集完成后，选择【file】菜单栏下“save workbook”，出现“enter workbook file name”窗口，输入保存文件名，点击“保存”。

样品的保存设置在【options】菜单下面的【data store】下可以按要求设置

D. 测定下一样品的紫外光谱：重复2）～4）操作，如果体系相同则采用同一背景，体系不同则1）～4）操作。

6) 扫谱结束后，取下样品池，小心取出盐片。洗去样品（千万不要用水洗）。然后，再于红外灯下用滑石粉及无水乙醇进行抛光处理。最后，用无水乙醇将表面洗干净，擦干，烘干按要求将模具、样品架等擦净收好，石英比色皿，或者积分球配件晾干收好。

7) 关机

A. 选择【file】>【exit】，退出程序；

B. 从计算机桌面的开始菜单中选择关机，出现安全关机提示。 C. 关闭计算机电源。 D. 关闭仪器电源。

13.3.5.3 样品测试的一般步骤

将待测样品放于样品池中。样品是液体的话，溶解在适当的溶液中放入石英比色皿的智能恒温8联池转换器或者智能恒温单池转换器样品池中，固体测紫外可见吸收光谱的话更换积分球配件，放在相应位置测量固体的透过或者反射紫外可见光谱。 （1）积分球的实验原理

从样品表面反射回来的辐射能量大小。反射率定义为： R% = I/I0×100。I为被反射的辐射强度，I0为从某些标准表面反射回来的辐射强度。镜面反射具有定义明确的反射角，如从镜面的反射一样；而漫反射时，部分被反射表面吸收，部分被反射表面散射。反射光谱的测定是在紫外-可见分光光度计上加一可进行反射操作的附件。光学积分球，一般将一根内径为60-150毫米的铝棒切成两半，技术比较精细复杂哦，然后将其挖成空心球，在球的内壁上涂上硫酸钡或熏上二氧化镁。这时，在球心放上被测试的样品，则在球内壁的任何地方的漫反射强度都相等，这就是积分球的工作原理，如图13.10所示。

图13.10 积分球的工作原理

左图中两个对角镜用于反射从样品反射过来的光线。右图是用于反射光谱测定的积分球附件。从单色器过来的双光束通过两个窗口进入积分球，照射在样品及参比上，反射光进入光电倍增管，后者交互测定样品及参比的漫反射。除去吸收池，样品可以是染色线、膜的涂层等固体样品，此时参比处放置MgO标准白板。积分球内表面涂有高漫反射材料的BaSO4，可以使反射能量均匀化，在球内任一给定点反射光的强度都与空间分布无关，而与样品的漫反射率成正比。

（2）使用积分球附件的注意事项:

a 无论使用透过样品还是反射样品,都要使样品紧密贴紧积分球开口,如有间隙会使测量值产生误差.

b 如副白板表面被污染,可用细砂纸轻轻磨干净，并将副白板保存在干燥的容器中. c 测试粉末样品时，禁止倒置以将粉末或粉尘弄入积分球内 d 不能用手触摸镜面

e 当积分球不使用时，把积分球和反射筒（reflector）放回附件箱内

f 清洁事项：对于镜片，用干燥清洁的压缩空气或氮气清洁；对于涂层表面，先用干燥清洁的压缩空气清洁，接着用蒸馏水洗净，再用压缩空气干燥；对于附上的灰尘，用细度

为220—240目的砂纸除去，再用蒸馏水洗净，最后用压缩空气干燥。

（3）液体样品的测量

被测物质为液体的话溶液浓度不宜过高，一般为mg/L级，在进行定量测试时要精确计算加入的量，作为标准曲线或者判断化合物的一种手段。在进行大量的样品测试时，可以用智能恒温8联池转换器代替智能恒温单池转换器快速的进行紫外光谱的测试。下图是智能恒温单池转换器和可屏蔽的样品检测器以及石英比色皿。可屏蔽的样品检测器可依照自己分析需要，使用额外独立的检测器。石英比色皿采用1cm石英吸收池，智能恒温单池转换器对于少量的样品测试方面快捷，附件示意如图13.11所示。

图13.11 石英比色皿及吸收池，智能恒温单池转换器附件示意图

下图13.12是智能恒温8联池转换器示意图。8联池联动对于大量的样品测试，省时省力。具体的操作在每个测试技术的【setting】设置里有详细说明。

图13.12 智能恒温8联池转换器

（4）固体样品的测量

固体样品的紫外测试用积分球配件来进行测试。光散射物质存存在于各种各样的样品中，比如自然水样以及生物匀浆等等。面对传统测量方法很难准确测量的散射物质以及混浊溶液，Evolution 220系统都能轻松实现。Evolution 220分光光度计的积分球附件(ISA-220)通过收集并整合散射的光线，能够把这些很难测试的样品准确地测量出来。ISA-220积分球附件是在同类价格仪器中性能最为突出和优秀的。它是60mm直径的Spectralon (R)球和10mm硅光电二极管，以及一个专用的AFBG光学系统的组合，能提供连续和准确的数据。在传统实验中，因为溶液中的悬浮微粒而产生的散射光造成人为的高吸收读数。由于采用散射测量. 利用ISA-220积分球捕获所有的正向散射光，提高数据质量并减少测量误差。

在作为反射附件时，ISA-220附件安装在样品仓的右侧，从而能让您的样品位于测量光束的焦点处。您还可以调整样品的位置，选择采用或者不用8度的角来测量全反射（SPIN）或者漫反射（SPEX）。采用较小的反射口，能够把单光束带来的误差最小化，选择INSIGHT软件中的自动纠偏功能，这种误差则基本上能被消除。ISA-220附件为科研和常规的反射测量提供了卓越的性能。ISA-220是为测量反射而设计的，样品正好完全在积分球光束的焦点上， 此外，为方便拿取样品采用了弹簧样品夹设计。

固体样品的测试一般分为测试固体样品的透射性能和反射性能，对于固体样品的透射性能的测试，要求样品尽量的透明成膜，对于不透明的固体一般做其反射性能。积分球及其配件如图13.13所示，右边带有数据接口的是积分球的主体部分，圆柱形的样品池或样品空白放在其左边的带有弹簧夹的槽中进行测试。旁边的三个圆形配件从上往下分别是固体样品的

透射性能测试的空白标准，固体样品的反射性能测试的样品池，固体样品的反射性能测试的空白标准。

图13.13 积分球及其配件示意图

在测试固体样品的反射性能时，先测试空白标准，测试完成后，换入固体样品的反射性能测试的样品池，固体样品的反射性能测试的样品的制作：把待测固体在研钵中研磨成粉末，均匀的平铺在样品池表面，然后旋紧待测。固体样品的透射性能测试的样品的制作：不同于固体样品的反射性能测试，透射测试的空白标准是夹在积分球左边的弹簧夹的槽中，待测样则放入积分球前段的光路上并且不取下空白进行测试。 （5）EV 220分光光度计的几种测试方法

本实验室的Evolution 220分光光度计共有 Fixed; Scan; Quant; Rated.等测试方法：仪器采用模块化设计，在智能恒温8联池转换器、智能恒温单池转换器和积分球之间可以互相更换，

（4）标准曲线的绘制

准确吸取芦丁标准溶液1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、1.8mL、2.0mL分别置于10mL容量瓶中，加1%AlCl3 溶液，充分混合至刻度，在波长λ1=463nm、λ2=417nm、λ3=382nm 下分别测得吸光度，计算ΔA值，并计算ΔA与浓度关系的回归方程。

（5）样品中总黄酮含量的测定

取植物叶和果的提取物，测定用1%的AlCl3溶液定容过的黄酮溶液在测定波长下的吸光度值，根据ΔA值，计算总黄酮含量。

五、数据处理

（1）绘制植物叶和果的提取物及芦丁标准品与1% AlCl3显色反应的吸收曲线确定测定波长。

（2）按照公式计算标准曲线的各ΔA值，计算ΔA与浓度关系的回归方程。 （3）由标准曲线计算植物叶和果中的总黄酮含量。

六、注意事项

（1）黄酮类物质广泛存在于各类植物体内，一般采集的各类水果、蔬菜、药材等均含有黄酮类物质。为确定采集的植物体内确有黄酮类物质，可先按照实验步骤1进行黄酮的定性分析。

（2）本实验中的吸收光谱图以刺五加的叶和果与芦丁对照绘制，并确定了λ1、λ2和λ3

的测定波长。实际测定的植物样品，可根据植物提取物与芦丁标准品的吸收光谱图选择各自合适的λ1、λ2和λ3的测定波长。

（3）1% AlCl3溶液的用量在0.5～2.5mL范围内几乎不影响测定结果。

七、思考题

（1）详细推导三波长分光光度法ΔA值的计算公式。

（2）将三波长分光光度法应用于实际样品测定时，如何选择λ1、λ2和λ3的测定波长？

参考文献

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朱明华．仪器分析[M]．北京：高等教育出版社，2008．

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