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绵阳师范学院

本科生毕业论文

题 目 芦丁与牛血清白蛋白的相互作用研究 专 业 化 学 院 部 化学与化学工程学院 学 号 0610410160 姓 名 罗 涛 指 导 教 师 XXX 副教授 答 辩 时 间 二○一二年五月

论文工作时间：2011年12月 至2012年5月

论文题目来源：

国家自然科学基金项目 编号：

四川省自然科学研究项目 编号：

校级自然科学研究项目 编号：

罗 涛 绵阳师范学院2012届本科毕业论文

芦丁与牛血清白蛋白的相互作用研究

学 生 罗 涛 指导教师 XXX

摘 要：在Tris缓冲溶液(pH=7.4)体系中，用荧光光谱技术研究水溶液中芦丁与牛血清白蛋白的相互作用。结果表明，芦丁对牛血清白蛋白内源荧光(345 nm)产生较强的荧光猝灭作用，根据不同温度下芦丁对牛血清白蛋白的荧光猝灭作用,证明其为静态猝灭机制,计算出290 K、298 K时结合常数Ka(分别为4.384×103 L·mol-1、0.7032×103 L·mol-1)，根据热力学参数确定其作用力以范德华力或氢键作用力为主。

关键词：芦丁；牛血清白蛋白；荧光光谱

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Study on the binding interaction betweenrutin and BSA

Undergraduate Luo Tao Supervisor Xing Ming

Abstract：The interaction of rutin and bovine serum albumin (BSA) in aqueous solution (Tris-HCl buffer, pH=7.4) has been studied by fluorescence spectrometry. The results showed that the fluorescence intensity of BSA at 345 nm was quenched intensively by rutin. According to the quenching effect of rutin on the fluorescence intensity of BSA under different temperatures, and the quenching mechanism was confirmed to be a static one. The binding constants Ka at 290 K and 298 K were 4.384×103 L·mol-1and 0.7032×103 L·mol-1. Based on the thermodynamic parameters, the electrostatic action was confirmed to be Vander walls force or bond.

Keywords：Rutin; Bovine serum albumin; Fluorescence spectroscopy

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目 录

前言 ............................................................................................................................... 1 1 芦丁、牛血清白蛋白、荧光分析的介绍 ............................................................... 1

1.1 芦丁的简介 ..................................................................................................... 1 1.2 芦丁的药理作用 ............................................................................................. 1

1.2.1 抗自由基活性 ....................................................................................... 1 1.2.2 抗脂质过氧化作用 ............................................................................... 2 1.2.3 血管舒张作用 ....................................................................................... 2 1.2.4 抗病毒作用 ........................................................................................... 3 1.2.5 拮抗血小板活化因子作用 ................................................................... 3 1.2.6 抗急性胰腺炎(AP） ............................................................................. 3 1.2.7 对胃溃疡的保护作用 ........................................................................... 4 1.3 牛血清白蛋白简介 ......................................................................................... 4 1.4 荧光分析的特点和应用 ................................................................................. 4 2 实验部分 ................................................................................................................... 5

2.1 仪器 ................................................................................................................. 5 2.2 试剂 ................................................................................................................. 6 2.3 标准溶液配制 ................................................................................................. 6

2.3.1 1 mol·L-1NaCl水溶液 ............................................................................ 6 2.3.2 1.0×10-4 mol·L-1的牛血清白蛋白溶液 ................................................. 6 2.3.3 运行的Tris-HCl缓冲溶液配制 ........................................................... 6 2.3.4 牛血清白蛋白溶液体系的配制 ........................................................... 7 2.4 荧光测量 ......................................................................................................... 7

2.4.1 室温（290 K）下的测量 ..................................................................... 7 2.4.2 298 K下的测量 ..................................................................................... 8

3 数据处理与结果讨论 ............................................................................................... 8

3.1.1 基础理论 ............................................................................................... 8 3.1.2 温度的影响 ........................................................................................... 9

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3.1.3 药物分子与蛋白质分子间结合力的确定 ......................................... 12

结论 ............................................................................................................................. 13 参考文献 ..................................................................................................................... 14 致 谢 ......................................................................................................................... 16

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前言

1 芦丁、牛血清白蛋白、荧光分析的介绍

1.1 芦丁的简介

芦丁(见下图1-1)又名芸香苷、紫槲皮苷，为一来源很广的黄酮类化合物。主要存在于豆科植物槐的花蕾（槐米）、果实（槐角），芸香科植物芸香全草，金丝桃科植物红旱莲全草及蓼科植物荞麦的籽苗中[1]。

OHOHHOOOOHOglucose(6'1'')rhamnose

图1-1 芦丁的结构式图

1.2 芦丁的药理作用

1.2.1 抗自由基活性

芦丁为黄酮类化合物，是清除自由基的强氧化剂，它可终止自由基的连锁反应，抑制生物膜上多种不饱合脂肪酸的过氧化作用，清除脂质过氧化产物，起到保护生物膜的药理作用[2]。姜宝红等[3]考察了体外具有较强醛糖还原酶活性的芦丁对大鼠糖尿病肾病（ND）的防治作用，结论提示芦丁可改善四氧嘧啶大鼠糖尿病肾病，其机制可能与抑制醛糖还原酶和消除氧自由基有关。芦丁在体外具有自由基清除（在10-2 mol·L-1时的抑制率达到31.4%）和抑制醛糖还原酶活性（在

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10-2 mol·L-1时的抑制率达到74.2%）的作用，从而阻止葡萄糖转变为山梨醇，减弱山梨醇通路激活对大鼠造成的损害。另外，芦丁可降低肾组织脂质过氧化物酶（LPO）活性，延缓氧自由基对肌体的进一步损伤。陈仙等[4]探讨了芦丁是否对高能冲击波引起的肾功能损伤有保护作用。有学者认为体外冲击波碎石术除产生机械作用外。还可能对肾组织细胞产生生物化学作用，这种作用的基础是氧自由基。氧自由基的产生参与了体外冲击波碎石术后肾功能损害。有资料证实，芦丁具有阻止氧自由基所致的脂质过氧化作用及稳定细胞膜、抑制细胞膜系统内钙离子水平的异常升高，并通过舒张血管平滑肌而改善肾脏有效血浆流量（ERPF），增加肾小球滤过率。实验证实在体外冲击波碎石术前应用芸香苷，则体外冲击波碎石术后血丙二醛（MDA）含量较对照组患者明显降低，血超氧化物歧化酶（SOD）活性较对照组明显升高，提示芦丁可使氧自由基减少，SOD活性上升。因此，芦丁通过上述药理作用发挥效应，减轻高能冲击波对肾组织细胞的损害，有效地防治体外冲击波碎石术所致的肾脏损伤。研究表明，脑在缺血低氧时有大量的一氧化氮（NO）及自由基产生，这可能与脑细胞的凋亡有关，如对脑缺血损伤有一定的保护作用，其保护作用可能与其抗自由基作用、抗凋亡及减少NO生成有关。

1.2.2 抗脂质过氧化作用

脂质过氧化是指活性氧自由基攻击生物膜中的不饱和脂肪酸而引起的一系列氧化过程。朱建林等[5]通过对大鼠SOD活性、自由基脂质过氧化产物MDA含量及大肝脏脂褐（Lipofuscin）含量的测定及分析发现，芦丁对去势大鼠脂质过氧化有抑制作用，可抑制去势后大鼠抗氧化系统抗氧化能力的下降。芦丁具有对抗内源性雌激素下降引起的抗氧化能力的下降，具有抗氧化作用。高密度脂蛋白（HDL）具有抗动脉粥样硬化作用。但HDL与低密度脂蛋白（LDL）及极低密度脂蛋白（VLDL）一样在体外也可被氧化修饰，一旦HDL被氧化修饰则具有致动脉粥样硬化作用。孟芳等[6]利用体外Cu2+介导氧化修饰的手段，探讨了芦丁对HDL氧化修饰作用的影响。结论表明芦丁可显著抑制HDL的氧化修饰。 1.2.3 血管舒张作用

实验检测芦丁对去氧肾上腺素（phenylephrine，PE）预收缩的胸主动脉环张力的影响，表明芦丁可能通过NO鸟苷酸环化酶途径产生内皮依赖性的血管舒张

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作用[7]。 1.2.4 抗病毒作用

有研究表明，芦丁有抗病毒和抑制醛糖还原酶活性的作用。实验发现，芦丁的肺指数抑制率27.3%，能够降低流感小鼠的肺指数，具有明显的抗流感病毒的作用，并与有关芦丁能够使毛细血管的脆性及异常的通透性得到改善的报道相一致[8-9]。

1.2.5 拮抗血小板活化因子作用

血栓形成、动脉粥样硬化、炎症反应及缺血再灌注自由基损伤等诸多心脑血管疾病的发病过程均与血小板活化因子（PAF）介导密切相关，因此拮抗PAF的作用，为目前缓解缺血性心脑血管疾病的重要途径。实验表明，芦丁可拮抗PAF与兔血小板膜受体的特异性结合，抑制PAF介导兔血小板黏附与PMNS内游离Ca2+浓度升高，表明芦丁抗PAF的作用机制是通过抑制PAF受体活化，进而阻断PAF诱发的反应，从而起到保护心血管的作用，结果表明芦丁为一种PAF受体拮抗药[10]。

1.2.6 抗急性胰腺炎(AP）

芦丁能有效防止低钙血症的发生，并降低胰腺组织Ca2+浓度。研究发现芦丁能提高胰腺组织大鼠磷脂酶A2（PLA2）含量，提示芦丁可能对胰腺组织PLA2的释放及激活具有抑制作用；芦丁能有效防止AP大鼠低钙血症的发生，可能是通过阻止Ca2+内流并降低胰腺组织细胞Ca2+超载，而减轻对AP的病理生理损害

[11]

。赵维中等采用放射免疫分析法测定经注射芦丁的模型大鼠血浆血栓素B2

（TXB2）、前列腺环素（PG12）及内皮素含量变化。结果芦丁皮下注射给药能有效降低AP大鼠血清淀粉酶含量，改善胰腺组织的病理学变化。与SO组比较，AP模型组造模后12 h血浆的T/P比值较SO组均显著性升高（P<0.01）；芦丁各用药组的T/P比值较AP模型组显著性降低（P<0.01）。芦丁抗实验性AP作用机制可能与降低血浆T/P比值，改善胰腺微循环障碍有关。陈爱华等[12]观察各组Wistar大鼠血液流变学、酶学及胰腺的病理学改变，并对胰腺病理切片进行评分比较。结果AP大鼠全血黏度、血浆黏度、血沉、红细胞比容、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数均显著升高，病理检查显示胰腺组织明显坏死和炎性细胞浸润。芦丁（120，60，30 mg·kg-1）皮下注射给药，可改善上述各项病理生理指标，结

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果显示芦丁能有效改善AP大鼠血液流变异常，保护胰腺组织。芦丁在产生抗AP作用同时，能够降低AP大鼠血清异常增高的NO水平，提示芦丁的抗AP作用机制与其降低NO水平有关。研究表明，组织中氧自由基的防御、损害系统的平衡失调乃是其致AP组织损伤的原因。研究显示，芦丁可显著减少AP大鼠胰腺组织的MDA含量，再次证明了芦丁可以抑制氧自由基对膜的过氧化作用。同时发现芦丁可提高胰腺组织SOD清除氧自由基的活力。提示芦丁一方面通过增强机体对氧自由基的清除能力，另一方面也可通过抑制AP过程中氧自由基对 膜脂质的过氧化作用，发挥抗AP作用[13]。 1.2.7 对胃溃疡的保护作用

有报道芦丁对大鼠应激性胃黏膜损伤具有预防性保护作用。王宇翎等在实验中利用大鼠醋酸烧灼型胃溃疡模型，测量大鼠胃溃疡体积及组织病理学检查，并观察芦丁和银杏叶提取液（GBE）对胃液量、胃酸、胃蛋白酶活性的影响。芦丁（5，10 mg·kg-1）和GBE（25，50 mg·kg-1）造模后给药，可明显减小溃疡体积，组织病理学变化较轻，且对大鼠胃液量，胃液酸度和胃蛋白酶活性无明显影响，显示芦丁对大鼠胃溃疡有明显的治疗作用。

1.3 牛血清白蛋白简介

牛血清白蛋白是血液的主要成分，称作BSA，分子量为68 kD，等电点4.8，含氮量16%，含糖量0.08%，仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。每一个蛋白分子能携带七个脂肪酸分子。这些脂肪酸分子结合在蛋白的缝隙中，它们富含碳的尾部埋藏在里面安全地避开周围的水分子。血清蛋白同样能够携带许多其它的不溶于水的分子。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。尤其是血清蛋白，能够携带着许多药物分子[14]，比如芦丁，正因为血清蛋白是如此普遍地存在于血液中并且比较容易地被提纯，所以它成为科学家最早研究的蛋白质之一。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、pH缓冲作用、载体作用和营养作用[15-17]。

1.4 荧光分析的特点和应用

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荧光分析是由试样溶液所产生的荧光的强度来测定试样溶液中荧光物质的含量。荧光分析的灵敏度不仅与溶液的浓度有关，而且还与紫外光照射强度及荧光分光光度计的灵敏度有关。对于光敏物质所允许的照射强度虽有所限制，但光度计的灵敏度却可以大大增加。因此，荧光分析的灵敏度一般都高过应用最广泛的比色法和分光光度法。比色法及分光光度法的灵敏度通常在千万分之几；而荧光分析法的灵敏度常达亿分之几，甚至有千亿分之几的[18]。荧光分析法的另外一个优点是选择性高。这主要是指对有机化合物的分析而言，因为凡是会发生荧光的物质，首先必须会吸收一定频率的光，但会吸收光的物质却不一定会发生荧光，而且对于某一些给定波长的激发光，会产生荧光的一些物质所发出的荧光波长也不尽相同，因而只要控制荧光分光光度计中激发发光和荧光单色器的波长，便可能得到选择性良好的方法。

荧光光谱技术[19-20]已成为研究生物大分子与小分子、离子相互作用的重要手段， 荧光测试中的发射峰特征、荧光偏振、能量转移及荧光寿命等指标可以对蛋白质分子中荧光生色集团的结构及其所处的微环境提供有用信息。其中中药有效成分与蛋白质相互作用的研究陆续有报道，大多是从电化学、荧光、紫外方面进行的研究。本文用荧光光谱法研究在模拟机体生理pH值条件下芦丁与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用；讨论芦丁与BSA之间发生的有效的猝灭过程，讨论其在不同温度下的结合常数、热力学因素等重要信息，确定其分子间的结合力，试图从分子水平了解蛋白质分子与小分子间相互作用机制，了解其在体内的运输和分布情况，为生命科学研究提供有用的信息和数据。

1.5 研究目的、意义和主要内容

1.5.1研究目的、意义

文字简述说明论文研究目的和意义。 1.5.2 研究主要内容

用文字或者（1）、（2）、（3）….等阐述论文研究主要内容。

2 实验部分

2.1 仪器

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RF-4500PC荧光光谱仪（Hitachi，Japan） 微量可调移液器（Gilson，French）

PHS-2C型数字式pH计（Ridao instruments） SYC-15超级恒温水浴（南京桑立电子设备厂） SWQ-Ic数字控温仪

AUW220D十万分之一天平(SHIMADZU，Japan） 1.0 cm比色皿 25 mL比色管

50 mL 容量瓶

2.2 试剂

牛血清白蛋白（BSA，上海伯奥生物科技有限公司），贮备液于277 K冰箱中保存

芦丁（sigma公司）溶液浓度为8.035×10-4 mol·L-1 Tris-试剂（三羟甲基氨基甲烷，成都科龙化工试剂厂） 盐酸（A.R.，成都科龙化工试剂厂） 乙醇（A.R.，成都科龙化工试剂厂） NaCl（A.R.，成都科龙化工试剂厂） 所用试剂均为分析纯 实验用水为蒸馏水

2.3 标准溶液配制

2.3.1 1 mol·L-1NaCl水溶液

称量2.9285 g NaCl固体，用蒸馏水稀释至50 m L，摇匀；作用：以维持生理条件下的离子强度。

2.3.2 1.0×10-4 mol·L-1的牛血清白蛋白溶液

称量0.33521 g牛血清白蛋白固体，用蒸馏水溶解稀释至50 m L； 2.3.3 运行的Tris-HCl缓冲溶液配制

移取Tris溶液（0.2 mol·L-1）25.00 mL和盐酸溶液（0.1 mol·L-1）40.00 mL，蒸馏水7.54 mL，混合均匀，调节pH=7.4。

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2.3.4 牛血清白蛋白溶液体系的配制

在10 mL比色管中依次加入1.0×10-4 mol·L-1 BSA溶液0.1 mL；1 mol·L-1NaCl水溶液1 mL，使缓冲溶液的离子强度保持一致；pH=7.4的Tris-HCl缓冲液稀释至10 mL。

2.4 荧光测量

2.4.1 室温（290 K）下的测量

RF-4500PC荧光光谱仪操作如下： (1) 开机准备

打开样品室盖，检查样品室内没有样品后关上样品室盖。 (2) 开机

打开电源开关（POWER-ON）待风扇正常运转后按（X.LAMRSTART）钮，黄色指示灯亮。在氙灯点亮后，等待5-10 min，打开（MAIN-ON）。打开计算机及外设，点击桌面上的Flsoluflonc软件，等待光谱仪的自检。 (3) 编辑分析方法。

点击右边菜单的Methed按钮等到出现一个Analysmethed对话框再点击Genera按钮。在Measurement中选择波长扫描Wavelength scan。点击Instrument选择荧光激发Excitation为282.0 nm，选择荧光发射光为荧光，扫描波长范围为294.0 nm至460.0 nm，扫描速度为1200 nm·min-1，扫描电压为700 V，狭缝宽度为5.0 nm。一切准备就绪后点击OK，方法生成。 (4) 测试样品

(a)用移液管移取3 mL牛血清白蛋白溶液，放入比色皿中，再将比色皿放入样品室，关上样品室盖，点击Measure按钮，开始测量。检测完成后点击Report按钮，保存文件，设置文件名0，保存。

(b)打开样品室盖，用微量可调移液器移取20 μL芦丁溶液于比色皿中，关上样品室盖，打开搅拌器搅拌3分钟后关掉搅拌器，点击Measure按钮，开始测量。检测完成后点击Report按钮，保存文件，设置文件名1，保存。

(c)重复(2)的操作，分别设置文件名为2、3、4、5、6、7、8、9，保存。 (d)测试完后，将数据导出，保存在盘中。 (5) 关机

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(a)将样品拿出样品池。 (b)退出所有窗口，关掉电脑。 (c)关闭（MAIN→OFF）。 (d)关闭电源。

(e)在记录本上记录使用情况。 2.4.2 298 K下的测量

操作步骤和290 K基本一致，只是在样品测试过程中，需要连接恒温槽，搅拌时间延长到5分钟，其余操作同2.4.1。

3 数据处理与结果讨论

3.1 猝灭机理及猝灭常数的确定

3.1.1 基础理论

动态猝灭是猝灭剂和荧光物质的激发态分子之间的相互作用过程，其作用过程遵循斯特恩-沃尔默(Stern-Volmer)方程：

F0/F=1+Kaτ0[Q]=1+KSV[Q] (3-1)

式中F0和F分别是不存在和存在猝灭体时荧光体的荧光强度；Ka是生物大分子的猝灭常数；τ0是不存在猝灭体时荧光体的荧光寿命；[Q]是猝灭体的浓度；KSV称为Stern-Volmer猝灭常数。

静态猝灭是猝灭剂和荧光物质分子在基态时生成不发光的配合物，从而导致荧光物质荧光强度降低的过程，此过程可用下式描述：

F0/F=1+Ka[Q] (3-2)

式中Ka是静态猝灭常数(即配合物的缔合常数)。

比较式(3-1)和式(3-2)可以看到，无论是静态猝灭还是动态猝灭，F0/F与[Q]之间均存在线性关系，因此仅仅通过测量荧光强度所得到的荧光猝灭数据无法判断猝灭现象究竟是属于动态还是静态的。

分静态猝灭还是动态猝灭可以通过以下几个方面来确定：

(1) 动态猝灭依赖于扩散，而升高温度导致扩散加快，因此动态猝灭常数将随着温度的升高而增大；但升高温度将导致配合物的稳定性降低，因此静态猝灭

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常数将随温度的升高而减小。

(2) 仔细考察荧光体的吸收光谱。由于动态猝灭只影响到荧光分子的激发态，因而并不改变荧光物质的吸收光谱；而静态猝灭中，基态配合物的生成往往会导致荧光物质吸收光谱的改变。

(3) 静态猝灭剂的存在并不改变荧光分子激发态的寿命，τ0/τ=1；而动态猝灭剂的存在使荧光寿命缩短，寿命的减小和荧光强度的减小相等，τ0/τ=F0/F。 3.1.2 温度的影响

分别测定了在pH =7.4时290 K与298 K条件下芦丁对BSA的荧光猝灭情况。（见图3-1和图3-2及表3-1和表3-2）。

1800160014000Fluorescence1200100080060040020003003203403603804004204404608Wavelength/nm

图3-1 290 K芦丁对BSA荧光光谱图

表3-1 290 K时，不同浓度芦丁对BSA荧光猝灭光谱数据

序号 1 2 3 4 5

C(芦丁)/mol·L-1

0 0.05356×10-3 0.1061×10-3 0.1607×10-3 0.2142×10-3

F 1502 1417 1176 1165 930.3

9

F0- F 0 85.00 326.0 337.0 571.7

(F0-F)/F 0 0.06000 0.2772 0.2893 0.6147

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6 7

0.2678×10-3 0.3214×10-3

782.6 296.5

719.4 1205

0.9192 4.071

180016001400Fluorescence12001000800600400200030035040009450Wavelength/nm

图 3-2 298K芦丁对BSA荧光光谱图

表3-2 298 K时，不同浓度芦丁对BSA荧光猝灭光谱数据

序号 1 2 3 4 5 6 7

C(芦丁)/mol·L-1

0 0.05356×10-3 0.1061×10-3 0.1607×10-3 0.2142×10-3 0.2678×10-3 0.3214×10-3

F 1700 1232 1199 1176 1146 1126 1102

F0- F 0 468.0 501.0 524.0 554.0 574.0 598.0

(F0-F)/F 0 0.3798 0.4178 0.4456 0.4834 0.5098 0.5427

由图可知,随着芦丁浓度的增加，BSA的荧光强度逐渐降低，表明二者之间存在相互作用，产生了猝灭现象。

芦丁对BSA的荧光猝灭的Stern-Volmer图根据Stern-Volmer方程绘制。不

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同温度下的[(F0-F)/F]~[Q]曲线见图3-3。 290K

1.00.8y=4.384x-0.37890.6(Fo-F)/F0.40.20.00.100.150.200.25-10.300.35C/10mol·L-3

298K

0.550.50y=0.7032x+0.29320.45(Fo-F)/F0.400.350.300.050.100.15-30.20-10.250.300.35C/10mol·L

图 3-3 [(F0-F)/F]~[Q]曲线

由图3-3可以得出 Stern-Volmer方程及Stern-Volmer猝灭常数Ka，（见表3-3）。

表 3-3 Stern-Volmer方程及Stern-Volmer猝灭常数Ka

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温度/K Stern-Volmer方程

Stern-Volmer猝灭

常数Ka

4.384×103 0.7032×103

相关系数r

290 298

y=4.384x-0.3789 y=0.7032x+0.2932

0.9715 0.9871

由表3-3可以看出：随温度升高直线斜率减小，表明猝灭机理为静态猝灭。 3.1.3 药物分子与蛋白质分子间结合力的确定

生物大分子与药物小分子相互作用形成配合物的过程中，常常存在以下几种作用力：疏水作用力（Hydrophobic interactions）、静电引力(Electrostatic interactions)、 氢键 Hydrogen Bond)和范德华力(Vander walls force)等。根据ROSS理论：

△H≥0 △S >0 疏水作用力 △H<0 △S>0 静电作用力 △H<0 △S<0 范德华力或氢键作用力

因此，可以利用热力学参数(Thermodynamic Parameters)来确定类型。用上面在不同温度下相互作用所得的结合常数，利用公式：

lnK2/K1=ΔH(1/ T1- 1/ T2) /R (3-3) ΔG=-RTlnKa (3-4) ΔG=ΔH-TΔS (3-5)

从而计算出反应的焓变(?H)、熵变(?S)和吉布斯自由能变(?G) 等反应的热力学参数的值，计算结果（见表4）。

表3-4 290 K和298 K温度下的热力学参数

温度/K 290 298

Ka/L·mol-1 4.384×103 0.7032×103

△G/KJ·mol-1

-20.35 -16.24

△H/KJ·mol-1

-26.54 -26.54

△S/J·mol-1·K-1

-21.17 -34.56

所以，芦丁与牛血清白蛋白之间的相互作用力为范德华力或氢键作用力。

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结论

本文应用荧光光谱法对芦丁与牛血清白蛋白之间的相互作用进行研究，芦丁对牛血清白蛋白和人血清白蛋白的荧光都存在猝灭作用，此荧光猝灭过程是由于形成复合物而引起的静态猝灭，且都发生分子内的非辐射能量转移。试验发现温度对芦丁与牛血清白蛋白的荧光灭反应的影响较大，两者在生理条件下猝灭机理为静态猝灭。用荧光法较详尽地研究了模拟生理条件下芦丁与BSA的相互作用。在pH为7.4的Tris-HCl缓冲溶液(内含0.1 mol·L-1的NaCl以维持离子强度)体系中，芦丁对BSA内源荧光(345nm)产生了较强的荧光猝灭作用，计算了两个实验温度下芦丁与BSA的结合常数，进而得到作用过程的热力学参数，得出了范德华力或氢键作用力为主要作用力。

本文所获结果可以为更深入的了解芦丁与血清白蛋白的作用机理，改造芦丁分子，寻找新的药物分子提供有价值的参考信息。

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致 谢

弹指一挥间，大学四年已经接近了尾声。当自己怀着忐忑不安的心情完成这篇毕业论文的时候，自己也从当年一个从山里走出的懵懂孩子变成了一个成熟青年，回想自己的十几年的求学生涯，虽然只是一个本科毕业，但也实属不容易。首先，从小学到大学的学费和生活费就不是一个小数目，这当然要感谢我的爸爸妈妈，他们都是农民，没有他们的勤勤恳恳和细心安排没有他们的支持和鼓励，我是无论如何也完成不了我的大学学业。其次我要感谢我论文指导老师X老师和X老师，他们教我如何真诚做人、踏实做事；每一次的谈话都如同春风化雨，指引着我们沿着正确方向前进。毕业论文的每一个过程都凝结着胡老师和崔老师的心血，从选题到答辩的每一步，都离不开X老师和X老师悉心的指导。X老师和X老师对我的影响是巨大而深刻的，这种影响不是一朝的迸发，而是日积月累的渗透，在这点滴汇聚中使我逐渐形成正确、成熟的人生观、价值观。为此，我常常庆幸于我的幸运——有这样的导师是我学生生涯的一大幸事！遗憾的是，毕业在即，能够在X老师和X老师身边学习的日子已屈指可数。多么希望时间可以再多些，日子可以再长些，让我可以有更多的时间、更多的机会向X老师和X老师再多学一点。但我知道，我人生的角色该转换了，我该走出校园了，在这转变发生之前我有X老师和X老师给我的如此多的指导，就将使我在面对以后的工作和生活有可以借鉴的资本。在此，我要真诚的说声：“谢谢您们，X老师和X老师！”

感谢和我一起生活两年半的室友，是你们让我们的寝室生活充满快乐与温馨。“君子和而不同”，我们正是如此！愿我们以后的人生都可以充实、多彩与快乐！

感谢我的朋友，感谢你们在我失意时给我鼓励，在失落时给我支持，感谢你们和我一路走来，让我在此过程中倍感温暖！

一个人的成长绝不是一件孤立的事，没有别人的支持与帮助绝不可能办到。我感谢可以有这样一个空间，让我对所有给予我关心、帮助的人说声“谢谢”！今后，我会继续努力，好好工作！好好学习！好好生活！

罗 涛 2012年05月

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