微生物学实验一

微生物学实验

实验室须知

1. 应保持实验室安静，切勿高声喧哗和随意走动。 2. 实验室内禁止饮食、吸烟、及用嘴湿润铅笔和标签等 物。 3. 使用显微镜和其它贵重仪器时，应在教师同意后方可 使用，切勿擅自拆卸，否则因此而损坏仪器，应予以 赔偿。 4. 遇意外发生，应立即报告教师，不可自己随意处理。

实验室注意事项：1. 每次实验前必须认真预习，课堂上注意聆听教师对实验内容 的讲解，注意观察教师的示范操作。 2. 实验时应仔细认真，严格按操作规程进行，注意改变生活中 的习惯动作，以掌握微生物学实验的科学操作方法。 3. 使用贵重仪器应先事先熟知操作规程，遇仪器故障时请教师 帮助解决。 4. 实验中如遇菌液外溢、皮肤划伤或菌液吸入等意外，应立即 报告老师及时进行处理，不得隐瞒，以免酿成后患。 5. 注意安全，易燃物品如二甲苯、吸水纸等应远离火源。打火 机只能用于点燃酒精灯，酒精灯用完应及时盖上灯帽。 6. 实验完毕，必须将仪器放到指定地点，带菌工具应先进行消 毒。

实验室注意事项：7. 实验需进行培养的材料，要标明姓名、组别、日期后，放于 教师指定的培养箱中进行培养。 8. 未经教师同意，实验室中的任何菌种和物品不得携带出室外。 9. 实验时应认真进行观察和操作，做好实验记录；有疑难问题 向教师求教。 10. 励行节约，对水、电、染色液、镜油、擦镜纸、吸水纸及 其它药品等均应节约使用。 11.实验后应对实验室整理清扫，洗手后方可离开实验室，关窗 锁门。

微生物学实验室常用的器皿1.试管 2.吸管 3.培养皿 4.三角烧瓶 5.载玻片与凹玻片 –普通载玻片用于微生物涂片、染色，作形态观 察等 –凹玻片是在一块厚玻片的当中有一圆形凹窝， 作悬滴 观察活细菌以及微室培养用。 6.滴瓶：用来装各种染料、生理盐水等 7.接种工具：接种环、接种针等

常用器材 酒精灯 接种环 试管夹 吸耳球 计数器 镊子 香柏油 擦镜纸 1/人 1/人 1/人 1/2人 1/2人 1/2人 1/2人 1/2人

实验报告格式 基本信息的填写(不能留空)。 题目 目的 原理 材料和器皿 实验报告必须以实事求是、严肃认 真的科学态度，按照指导书的要求 按时完成。 实验报告应该简明扼要、叙述准确、 数据完整、绘图清晰且写实，应有 讨论、有分析，结论明确。

方法和步骤 实验结果 – 画图 – 文字描述 分析和讨论 思考题

清洁与卫生 保持实验台的清洁与试剂架的整齐洁净。 废纸、培养基等废弃物一律丢入垃圾桶内，严禁放入水 槽！ 培养皿、玻片、试管等玻璃仪

器清洗后一律搁置凉在不 朽钢网框里。 玻片上的染液必须彻底清洗干净(用洗衣粉洗)。 培养皿、试管等玻璃仪器上做的标记必须彻底洗净。 最终垃圾由值日生倒入卫生间箩框里，湿拖把挂在水槽 水龙头架上滴水凉干。 每次值日生4人。

实

验

内

容

实验一 显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法 实验二 细菌的革兰氏染色及芽孢染色法 实验三 鞭毛染色法及活细菌运动性的观察 实验四 四大类微生物菌落及个体形态观察 实验五 微生物大小测定及血球计数板计数 实验六 培养基配制及灭菌 实验七 微生物的分离纯化与平板菌落计数 实验八 微生物的生理生化反应(一) 实验九 微生物的生理生化反应(二)

实验一显微镜油镜的使用及细菌的 简单染色法教学目标或要求：※掌握显微镜油镜的工作原理及使用方法； ※学习细菌制片和简单染色技术； ※观察细菌的三种基本形态； ※初步建立无菌操作的概念；

普通光学显微镜

普通光学显微镜根据物镜与被检物体之间的介质不同，可分为：①干燥系物镜。以空气为介质，包括低倍物镜( 4*、 10*)和高倍物镜(40*)。 ②油浸系物镜。常以香柏油为介质，此物镜又叫油 镜头(100*),其上常刻有“HI”(homogeneous immersion)或“OI”(oil immersion)字样，有的还 刻有一圈红线或黑线标记。

油镜使用的原理 油镜的透镜很小，光线通过玻

片与油镜头之间的空气时，因介质密度不同，发生折射或全 反射，使射入透镜的光线减少，

物象显现不清。若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率 (n=1.52)相近的香柏油 (n=1.515),则使进入透镜的光 线增多，视野亮度增强，使物 象明亮清晰 。

瞳距调节

粗调松紧调节旋钮

聚光镜中心调节②10X物 镜 ①标 本

④ 聚光镜升降 旋钮

油镜观察操作方法在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后 将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏 油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几 乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到

最合适的观察点。 油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭 去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯(香柏

油溶于二甲苯)擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。

普通光学显微镜注意事项1. 观察标本时，两眼宜同时睁开。减少眼睛疲劳。最好用左眼 观察，右眼配合绘图和记录。 2. 使用油镜必须按先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察。 3. 下降镜头时，一定要从侧面注视，切忌用眼睛对着目镜，边 观察边下降镜头的错误操作，

以免压碎玻片而损坏镜头。 4. 使用二甲苯擦镜头时，注意二甲苯不能过多，以防溶解固定 透镜的树脂。 5. 注意保持显微镜的洁净，对金属部分要用软布擦拭，擦镜头 必须用擦镜纸，切勿用手或用普通布、纸等，以免损坏镜头。

显微结构图的绘制(1)绘图要用黑色硬铅笔，不要用软铅笔或有色铅 笔，一般用 2H 铅笔为宜。 (2)画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓，再依 照轮廓一笔画出与物象相符的线条。线条要清 晰，比例要准确。 (3)图的明暗及浓淡，应用细点表示，不要采用涂抹 方法。点细点时，要点成圆点，不要点成小撇。 (4)整个图要美观、整洁，还要特别注意准确性

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