复方利肝汤对急性肝损伤小鼠的保护作用研究

复方利肝汤对急性肝损伤小鼠的保护作用研究

摘要：目的：研究探讨复方利肝汤对急性肝损伤模型小鼠的保护作用。方法：采用腹腔注射CCl4制备急性肝损伤小鼠模型，分别检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）及小鼠肝组织总抗氧能力（T-AOC）和丙二醛（MDA），并进行肝脏组织病理评分，观察复方利肝汤对肝损伤模型小鼠的影响，结果：复方利肝汤能显著降低CCl4致肝损伤小鼠血清ALT、AST、LDH活性，明显提高肝组织总抗氧能力，降低MDA，减轻CCl4对肝细胞的损害。结论：复方利肝汤对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠有保护性作用。

关键词：复方利肝汤；CCl4 ；肝损伤

ABSTRACT： Objective： To observe the protective effect of Compound Ligan Decoction on hepatic injury induced by carbon tetrachloride. Methods： The ALT，AST，ALP， LDH liver index，hepatic pathological change and impairs total antioxidant capabilities （T-AOC）、Hepatic malondialdehyde（MDA） were examined on hepatic injury induced group moreover compared with control group and Compound Ligan Decoction group. RESULTS： There were striking differences

on hepatic injury induced group compared with control group and Compound Ligan Decoction group（p<0.05）.Compound Ligan Decoction could obviously reduce the level of ALT ，AST ， ALP，LDH and MDA induced by carbon tetrachloride and recover the hepatic injury.Conclusion： Compound Ligan Decoction has the protective effect on hepatic injury induced by carbon tetrachloride.

KEYWORDS：Compound Ligan Decoction；carbon tetrachloride；hepatic injury

复方利肝汤是由葛根、党参、黄芩、刺五加、栀子等组成，具有疏肝理气、清热利湿、护肝解毒、益气健脾、提高免疫力等功效，有广泛的临床应用基础。而CCl4诱导的急性肝损伤模型是应用较为广泛的研究肝保护药物的动物模型。本研究探讨复方利肝汤对CCl4致急性肝损伤小鼠的保护作用。 1材料与方法 1.1 材料 1.1.1动物

昆明系小鼠，5～8周龄，体重（20±2）g，雌雄各半，购自四川省医学科学院实验动物研究所，合格证号：SCXK（川）2013-18，恒温25℃、相对湿度40-70%环境饲养，饲标准饲料。

1.1.2药品与试剂

复方利肝汤，用水煎，浓缩至相对于生药量为2.5g/ml，置4℃冷藏备用。利肝康片为云南昊邦制药有限公司产品；生理盐水购自四川科伦药业股份有限责任公司；CCl4 （分析纯）购自成都市联合化工试剂研究所； AST、ALT、LDH检测试剂盒购于四川迈克生物科技有限公司；总抗氧能力、MDA检测试剂盒为南京建成生物工程公司产品；戊巴比妥钠，北京化学试剂公司 1.1.3仪器

OLYMPUS DP71病理显微摄影，日本奥林巴斯光学工业株式会社；IKN电动组织匀浆机，上海依肯机械设备有限公司；冷冻离心机，美国贝克曼公司；Spectra Max M5多功能酶标仪，美国Molecular Devices公司。 1.2 方法 1.2.1动物分组

所有小鼠随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组，模型组，利肝康片组和复方利肝汤高、中、低剂量组。 1.2.2 急性肝损伤模型建立及给药

正常对照组：灌胃相同体积的生理盐水，每日1次，连续7日；模型组：灌胃相同体积的生理盐水，每日1次，连续7日；利肝康片组：按0.5g/kg混悬液灌胃，每日1次，连续7日；复方利肝汤组：分别按20g/kg、10g/kg、5g/kg

混悬液灌胃，每日1次，连续7日。模型组、利肝康片组以及复方利肝汤组于第7日末次给药3h后腹腔注射CCl4，20mg/Kg，橄榄油稀释。各组均禁食不禁水，16h后，眼眶取血，同时脱颈椎处死小鼠，迅速取出肝脏，存放于-70℃，备用。

1.2.3 指标检测

取小鼠眼眶血，静置15min后，4000rpm，离心20min，分离血清，置于-70℃保存备用。取小鼠右叶肝组织加适量生理盐水，制备成匀浆，-70℃保存备用。血清ALT，AST，LDH及肝组织MDA和T-AOC的含量测定，严格按试剂盒说明书操作。

1.2.4 肝脏病理学检查

取肝左叶组织距边缘0.5cm处小块组织，用10%甲醛溶液固定，72h后取出，按常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片后，HE染色、脱水、透明、封片，光学显微镜（400倍放大）下观察肝病理学变化。肝损害程度判断标准用“+”表示轻度肝损害，肝小叶内肝细胞脂肪变性，偶见点状坏死，少见汇管区炎症，肝损害面积在1/3以内；用“++”表示中度肝损害，肝细胞脂肪变性坏死明显，炎症细胞浸润明显，可见中央静脉区淤血，肝损害面积在1/3～2/3之间；用“+++”表示重度肝损害，肝细胞弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死，中央静脉区淤血严重，肝损害面积大

于2/3。为便于统计分析“-”计为0，“+”计为1分，“++”计为2分，“+++”计为3分，进行量化评分。 1.2.5 统计学处理？

生化指标值以x±s表示，差异显著性分析用SPSS13.0软件进行统计分析处理，p<0.05是差异显著性标准。 2 实验结果

2.1 血清ALT、AST、LDH的活性测定结果

血清指标检测结果如表1所示，模型组与正常对照组比较，血清中ALT、AST、ALP和LDH分别升高3.9，3.4，2.1，1.6倍（P<0.05），表明造模型成功。而给予不同剂量的复方利肝汤后，ALT、AST、ALP和LDH各项指标与模型组均有显著降低，其中高剂量组分别下降66.2%，62.1%，40.9%，38.1%，具有显著性差异（P<0.05），且优于利肝康片组，说明复方利肝汤能减少肝细胞内酶的逸出，对肝细胞有较明显的保护作用。

2.2 肝组织MDA、T-AOC的活性检测结果

实验结果如表2，模型组的肝组织中MDA的含量升高至对照组的2.6倍，而给予复方利肝汤7d后，与模型组对比，肝组织中MDA的含量显著降低，恢复至对照组的正常水平。这表明复方利肝汤明显抑制了CCl4诱导的脂类过氧化反应。此外，模型组肝脏T-AOC经CCl4损伤后降低至对照组的45%（P<0.05），而复方利肝汤组肝脏T-AOC是模型组的1.4

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