培养基模拟灌装工艺验证方案

文件名称 文件编码 颁发部门 培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证方案 品质管理部 页码数 执行日期 第1页/共20页

审 批 起草人 起草人 起草人 审核人 审核人 审核人 审核人 批准人

部门 品质管理部 生产技术部 针剂车间 针剂车间 生产技术部 质检中心 品质管理部 质量负责人 姓名 签名 日期 分发部门：

培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证小组

文件名称 文件编码 颁发部门 培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证方案 品质管理部 页码数 执行日期 第2页/共20页 一、概述

厂区无菌操作生产线，按2010版GMP及其附录要求进行设计，是专用于小容量注射剂非最终灭菌产品生产使用。

某某产品因无法进行F0≥8分钟湿热灭菌，以达到SAL≤10，但处方可以通过微生物滞留过滤器过滤，故采用除菌过滤和无菌工艺相结合的灭菌方法。

无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之一，确保产品无菌是该工艺最大的难点，减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措施为：①人员的培训 ②无菌工艺验证。

按SFDA化学药品注射剂基本技术要求：培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的一种系统验证，是判断无菌保证水平的关键手段。故在正式生产前必须按某某产品生产工艺进行培养基模拟灌装验证。

1 本次验证关键生产工艺流程图 D级背景 2 验证原理

将培养基暴露于设备、容器密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长并评价结果，确定实际生产中产品污染的可能性。对于失败的验证进行菌种分析并调查，确认并解决可能造成失败的原因后，重新进行验证。 3验证次数

按2010版GMP附录1要求因该生产线为新建厂区设施，为培养基模拟灌装试验的首次验证，故需进行连续三个批次的验证活动。

C级背景 A级背景 一般区 灯 检 灌 封 干热灭菌 除菌过滤 安瓿的清洗 称 量 配 料 工器具清洗和灭菌 -6

文件名称 文件编码 颁发部门 培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证方案 品质管理部 页码数 执行日期 第3页/共20页 二、验证目的

1通过该工艺验证活动证明新设计厂房采用既定的无菌生产工艺能保证产品的无菌要求； 2通过该工艺验证活动证明无菌操作相关人员资格，降低人员带入无菌的风险； 3通过该工艺验证活动确保生产符合现行GMP法规要求。

三、验证范围和实施时间

1本验证方案适用于厂区小容量注射剂车间无菌生产线正式投入使用前某某品种小容量注射剂无菌生产工艺培养基模拟灌装验证活动；

2计划验证实施时间为2013年3月~4月连续三个批次。

四、验证小组和职责 1 验证小组

根据验证的内容和验证管理文件要求，成立验证小组，验证小组成员见下表，小组人员应在最终验证报告中签名确认。在验证实施前，方案起草人应对所有相关参与人员进行验证方案的培训，做好培训记录，并将记录附于验证报告后。 姓名 职务 生产技术部经理 职责 验证小组组长，负责验证文件的审核和工作总体安排和实施，组织调查和处理验证过程中出现的异常情况 技术管理员 负责验证文件的起草，提供验证过程中相关技术支持，参与验证异常情况调查工作 车间主任 安排车间岗位人员配合验证工作的实施，对验证过程的异常情况进行协助调查，负责验证文件的审核 车间技术副主任 负责验证文件的起草，提供验证过程中相关技术支持，参与验证异常情况调查工作 灯检岗位人员 负责灯检操作和产品7天和14天的观察与统计 灌封岗位人员 负责灌封操作并记录 配料岗位人员 洗瓶岗位人员 负责配料操作和除菌过滤以及灭菌操作并记录 负责洗瓶和安瓿灭菌操作并记录 文件名称 文件编码 颁发部门 培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证方案 品质管理部 页码数 执行日期 第4页/共20页 QC经理 维修员 QC 负责验证过程中设备的维修工作，参与验证模拟维修活动 负责验证相关检验工作和检验数据收集统计工作，参与验证过程异常情况调查工作，负责验证结束后培养基的灭活处理工作 负责验证文件的审核，协调验证相关检验工作，参与验证异常情况调查处理 QA QA 负责验证文件的审核和文件的归档，协调各部门相关工作具体安排 确保验证活动按方案执行，确保验证活动符合GMP要求，负责相关取样工作 QA 负责验证文件的起草，组织验证方案相关培训，参与验证异常情况调查工作 2各部门职责 2.1 品质管理部 协助验证活动的执行

参与验证异常情况的调查和处理 参与验证文件的起草工作 负责验证过程的取样

负责生产监督，保证所有数据的真实性和完整性 负责验证文件的审批和归档 2.2 质检中心

协助验证活动的执行，提供必要的取样工具 参与验证异常情况的调查和处理 负责相关检验工作，提供相关检验数据 负责最终培养基的处理 2.3 生产技术部 负责验证活动的执行

负责验证数据的收集和相关文件的起草 负责组织验证过程中异常情况的调查和处理 2.4 生产车间 负责验证相关操作活动 参与异常情况的调查和处理

质量负责人 负责验证文件的批准，验证证书的签发 文件名称 文件编码 颁发部门 培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证方案 品质管理部 页码数 执行日期 第5页/共20页 参与验证文件的起草和审核 2.5 工程部

协助验证活动确保其顺利完成 维修人员参与验证活动的实施 2.6 物料管理部

协助提供验证活动过程中所需物料

五、风险评估分析表

通过风险评估，确认本次验证活动需要验证的项目

可风险描述 能性 环境达不到相中 关生产要求 高 高 高 期环境监测并趋势分析 行动态监测 人员培训并更衣考核上岗，所有相关人员，模拟生产实人员造成污染 中 高 高 高 每批对进入无菌区人员取样监控 验证灭菌后储存方式和有灭菌后的衣服，器具等发生二次污染 低 高 高 高 效期，操作人员培训考核上岗，生产过程中进行严格监控，生产结束后与产品接触表面取样 所有灭菌装载和参数须经灭菌效果未达低 到 式灭菌 配液/灌封超过低 规定时限要求 灌封设备故障中 中 低 中 人员培训，使用前通过试中 低 中 工艺规程中明确规定时限 间挑战进行验证 模拟维修操作进行挑战验按照工艺规定工序最大时高 中 中 过验证，按经验证的操作方在设备验证中完成 际活动后取样，对最多允许人数进行挑战 相关验证操作与正常生产一致，生产结束后对关键表面取样，储存方式和有效期在相关清洁灭菌验证中完成 严重性 可风险测指数 性 建立厂房清洁消毒规程，定培养基灌装全程对环境进风险控制措施 验证项目

文件名称 文件编码 颁发部门 培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证方案 品质管理部 页码数 执行日期 第11页/共20页 生产现场已发现的菌种（若无则取消该组试验），接种浓度均小于100cfu/瓶，分别在相应温度下培养5天。5天内至少50%以上接种的各安瓿瓶中的TSB培养基中应出现明显的所接种的微生物的生长；对已经出现明显微生物生长的西林瓶，各组各取1瓶进行镜检、API等已确定是添加的菌。

七、可能的偏差或漏项的处理

评价无菌模拟灌装试验结果的主要指标之一是微生物污染水平，如果试验结果证明其污染水平超过规定的合格限度，则应立即停止生产，调查并记录污染产生的原因。在调查结束并采用相应的措施后应重复进行培养基无菌模拟灌装试验。 原因调查至少应包括如下项： a、生产环境微生物监测数据； b、生产环境悬浮粒子监测数据； c、人员和设备污染的监测数据； d、生产环境浮游菌监测数据； e、操作间的空气流向、压差； f、操作人员的操作方法、培训情况； g、模拟灌装试验过程中的异常情况； h、无菌室生产工具及其他用品的储存状况； i、鉴别污染微生物的种、属，以寻找污染源的线索； j、无菌室的清洁、清洁堆规程的培训及执行情况； k、无菌生产用设备的控制系统和监测系统的校正； l、生产后过滤器的完整性检测结果； m、相关产品、相关生产过程存在的问题等。

原因调查结束后，应根据调查所确定的或可能发生的原因制定纠正或改进方案并予以实施。当改进方案实施之后应重复模拟灌装试验。

八、再验证周期

1 当空气净化系统、灌封和过滤设备、除菌过滤和灌封工艺以及灌封操作人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装无菌生产工艺验证。

2 当空气净化系统连续停机超过1个月，重新开启生产前

3未出现异常情况时也需每半年至少进行一个批次培养基模拟灌装无菌生产工艺验证。 九、附件

文件名称 文件编码 颁发部门 培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证方案 品质管理部 页码数 执行日期 第12页/共20页 《培训记录》,《表面微生物监测记录》，《悬浮粒子监测记录》，《沉降菌监测记录》，《浮游菌监测记录》，《菌种鉴别记录》，《细菌内毒素检测记录》，《确认相关验证和确认工作》，《确认相关文件》，《培养基信息确认表》，《TSB培养基过滤前微生物限度检查》，《TSB培养基无菌性检查记录》，《培养基微生物生长试验》，《安瓿瓶无菌检查记录》，《人员进出无菌区登记台账》，《培养基灌封试验产品培养过程温湿度记录》，《模拟灌封样品培养最终结果记录》，《培养基微生物阳性对照培养结果》和《TSB（小容量注射剂多少规格）批生产记录》。

附件1

确认相关验证和确认工作 项目 WFI系统验证 PW系统验证 HVAC系统验证 压缩空气系统验证 过滤系统验证 灭菌设备确认 验证报告文件号 验证有效期至 检查结论 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 灭菌储存和效期验证 洗瓶机确认 隧道烘箱确认 灌装机确认 无菌区清洁消毒验证 恒温恒湿箱确认 配制罐确认 无菌分析方法学验证 备注 确认人/日期 附件2 复核人/日期 确认相关文件 文件名称 工艺规程 批生产记录 检查结论 符合□不符合□ 符合□不符合□ 文件名称 配料岗位SOP 灌封岗位SOP 洗烘瓶岗位SOP 灭菌柜清洁、操作和维护保养SOP 隧道烘箱清洁、操作和维护保养SOP 检查结论 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 符合□不符合□ 工器具处理岗位SOP 符合□不符合□ 配制罐清洁、操作和维护保养SOP 洗瓶机清洁、操作和维护保养SOP 备注 确认人/日期

符合□不符合□ 符合□不符合□ 复核人/日期

附件3

培养基信息确认表 培养基灌封验证的批号： TSB培养基进厂批号 TSB培养基有效期至 培养基全称 说明书中的培养基的配制方法 备注： 确认人/日期： 附件4 TSB培养基过滤前微生物限度检查 培养基灌封验证批号 培养条件 试验方法 将 ml的TSB先在23~28℃培养48h，再在30~35℃培养48h，统计菌落数。 24h 48h 72h 96h 复核人/日期： 胰酪胨大豆肉汤培养基 取本品30g,加1L蒸馏水，加热溶解；分装，121℃高压灭菌15min。若本品出现结块，请勿使用。 供应商 上海中科昆虫生物科技开发有限公司 培养时间 菌落数(cfu/ml) 结论 确认人/日期： 附件5 □合格（≤1cfu/ml） □不合格 复核人/日期： TSB培养基无菌性检查记录 培养基灌封验证批号 培养日期 培养天数 23~28℃培养 30~35℃培养 备注 结论 确认人/日期： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 (打“-”表示不长菌，打“+”表示长菌) □合格（培养14天后均无任何微生物生长） □不合格 复核人/日期： 附件6 培养基微生物生长试验 培养基灌封验证批号 试验日期 菌种名称 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 黑曲霉 菌种信息 培养条件 试管1 试管2 空白 结论 生孢梭菌 备注 “+”表示阳性，“-”表示阴性 结论：□合格（所有接种管出现明显的所接种的微生物的生长，空白管显阴性） □不合格 确认人/日期： 附件7 安瓿瓶无菌检查记录 培养基灌封验证批号 培养日期 取样时间 培养结果 备注 结论 确认人/日期：

前期 (打“-”表示不长菌，打“+”表示长菌) □合格（培养14天后均无任何微生物生长） □不合格 复核人/日期： 中期 后期 复核人/日期：

附件8 人员进出无菌区登记台账 培养基灌封验证批号 记录日期 进入人员 备注

进出无菌区时间 主要操作活动 附件9 培养基灌封试验产品培养过程温湿度记录 灌封试验批号： 生产日期： 以下为23~28℃培养期间温湿度记录 产品入库的日期/时间： 入库时温湿度： 是否符合要求：□是□否（标准：23~28℃） 培养天数 1 2 3 4 5 6 7 时间 上午 温度 湿度 时间 下午 温度 湿度 备注 记录人 23~28℃培养结束日期/时间： 以下为30~35℃培养期间温湿度记录 产品入库的日期/时间： 入库时温湿度： 是否符合要求：□是□否（标准：30~35℃） 培养天数 8 9 10 11 12 13 14 时间 上午 温度 湿度 时间 下午 温度 湿度 备注 记录人 30~35℃培养结束日期/时间： 备注：

附件10

模拟灌封样品培养最终结果记录 灌封批号 培养日期 盘号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 评价： 本次验证总共灌封 瓶，灯检不合格品______瓶，实际培养 瓶，先于 ℃下培养___天,后于 ℃下培养___天，共有 瓶长菌。长菌的产品中，经检查安瓿瓶破损数为______瓶。 备注： 检查人/日期

复核人/日期 长菌数 生产日期 至 发现日期 菌种鉴定 盘号 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 长菌数 发现日期 菌种鉴定 附件11 培养基微生物阳性对照培养结果 培养基灌封验证批号 试验日期 菌种名称 安瓿瓶编号 01-05 06-10 枯草芽孢杆菌 11-15 16-20 21-25 26-30 31-35 36-40 白色念珠菌 41-45 46-50 51-55 56~60 61-65 66-70 71-75 76-80 81-85 86-90 备注： 结论：□合格（50%以上接种的TSB培养基中应出现明显的所接种的微生物的生长） □不合格 确认人/日期：

复核人/日期： 有无微生物生长（瓶号） 有 无 培养条件 生长微生物的瓶号 生长微生物比例（%） 结论 菌种信息

培养基模拟灌装（小容量注射剂）

无菌生产工艺验证方案

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