LI-6400便携式光合仪使用流程说明（个人总结）

LI-6400便携式光合仪使用流程说明

一、仪器连接安装 1、加装化学药品

① 蓝色干燥剂在正面主机上面，白色苏打在下面；

② 换药时先拧开底盖并且填充量低于螺线1cm，将盖帽旋紧，注意密封圈；

③ 两个化学管在不测时调在中间，测定时要在bypass，调零时Scrub，测CO2响应曲线时苏打管完全

scrub，干燥管-bypass；

④ 白色苏打不能重复利用且不变色，而干燥剂可重复利用，吸水后变红色，在210℃烘90min，变

成蓝色，当出现粉末时将其倒掉；

2、连接硬件

① 将25针的连接器一端插入标有［IRGA］的插座中，另一端插入标有［CHAMBER］插座中，宽

面(长边)朝上，且拧紧螺丝钉（注意不要拧得太紧，否则螺丝钉将被折断）；

② 将末端有黑色标记的软管与操作台右端标有［SAMPLE］的端口（有黑色皮垫）连接，另外一

个软管（无黑色标记）与标有［REF］的端口（无黑色皮垫）连接；

③ 标有［INLET］的端口（套有绿色软管）是空气的入口，连接缓冲瓶（悬挂在空中2~3 m，空气

流动相对稳定处，以防止污物进入主机，同时在测量过程中可减少空气流动对测量结果的影响）； ④ 连接电缆与IRGA头部圆形IRGA端口上的红色圆点和IRGA分析器上的红色选点对齐时插进，且

能听到响声，注意：插头一定要推到底，不能留有空隙；

⑤ 安装CO2钢瓶（测CO2响应曲线时才安装，或实验必需）将CO2 小钢瓶装入套筒，顺时针旋转，

直到感觉保护罩接触到了小钢瓶，稍微加力便导致钢瓶被刺穿，这时需要快速旋紧，防止CO2 泄露，注意：O形圈后将套筒旋紧；

⑥ 切记分析器各部件：光量子传感器，紫色插头处，叶温热电偶，2个黄色：匹配阀，如果使用CF

卡存数据，则插入主机后面固定小槽内。注意：插头直插直拔，勿晃动，最好拔金属，勿动线。 另外，把光量子传感器红帽和进气口（缓冲瓶）绿帽都先收好。

3、电池安装

① 将电池倾斜，以顶起电池槽上端的止脱销，然后平推到底，2节电池能用4h； ② 充电器上灯灭表示充好，充时灯亮，一节电池3h就能充好，充满电池不需再充电； ③ 检测有电标志，先灯亮，几秒后灭掉表明有电，注意换保险丝220-230v，1/4安。

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二、开机预热 1、预热期间检查

① 检查温度 ：h行三个温度值Tblock, Tair和 Tleaf彼此相差应该在1℃以内；

② 叶温热电偶的位置：直接测叶片T时，其位置应高于叶室垫圈约1mm，使夹叶片时能充分接触；

若用能量平衡方法测量叶温，则叶温热电偶的结点位置应低于叶室垫圈1mm，确保夹叶片时，接触不到叶片；

③ 检查光源和光量子传感器：光源，正常否，传感器，g行 ParIn_μm 和ParOut_μm是否有响应

（叶室密封为0），g行Prss_kPa（大气压）值是否合理，注意查完将分析器松开；

④ 叶室混合扇：测量菜单中，按2、F1、按O关闭，或按F打开，听分析器头部声音是否有变化，若

有变化，表示正常，注意测量用恒温时才打开风扇；

⑤ 检查是否存在气路堵塞： 设定流速1000，化学管拧到完全bypass，当检查仪器实际流速能否达

到650以上，然后将化学管从完全bypass调节到完全scrub，检查仪器实际流速能否达到650以上，若达不到，则说明气路堵塞，则首先检查两管，方法都是将调解旋钮从一侧完全旋到另一侧，检查流速下降是否大于10，若有则存在堵塞，常见堵塞地方是：化学管内过滤嘴；化学管顶部的两个小的聚乙烯透明管，注意把流量调回原来设定值400-500。

2、预热后检查

① 叶室的漏气检查：将化学管scrub，然在叶室四周吹气，如果发现A行样品室CO2S的读数变化小于2微摩尔，说明密封好，如果变化超过2ppm，即为漏气（注意：叶室垫圈、密封圈、排气管） ② 检查流速零点： (测量菜单中-按2-F2-按N关闭)，然关闭叶室风扇（按2-F1-按O关闭）；检查b

行 flow在±2ppm之间表示正常；如果不在需进入校准菜单，进行Flow meter zero。

③ 检查CO2和H2O IRGAs零点：（1）将两个化学管都完全吸收（scrub），完全闭合约5min，参比

CO2读数在±5ppm以内，且ΔCO2在±1ppm以内，参比H2O在±0.5ppm，且ΔH2O在±0.1ppm，说明零点正常；

（2）如果超过这个范围，约10min，还不能达到要求，需进入校准菜单，进行IRGAs zero（IRGA调

零：关闭叶室（不能有叶片）等待 CO2和H2O浓度下降，CO2 R和S波动范围在±0.1，苏打管：scrub,化学管：bypass（按下F1-Auto CO2进入自动调整CO2零点），H2OR和S波动范围在±0.01，苏打管：bypass，化学管：scrub（按下F2-Auto H2O，自动调整H2O零点）按 quit--F5 退出，约15min，化学管完全scrub，注意一个一个管开始调，若对CO2和H2O同时调F3-Auto All，切记都不要经常调； （3）可直接从view Settings—veiw History（查看历史）—调用以前出厂校准信息（最顶端带＊＊进

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入—set to（F3）—F5（OK）。 注意：绝不允许进行“CalibMenu”中“IRGASpan”的任何操作！ ④ 校准叶温热电偶 拔出连接插头，切断叶温热电偶连接，然后检查h行Tblock-Tleaf<0.1℃以内，

不在0.1℃以内，需要调节电位调节器进行校准。

⑤ 检查匹配阀 开始测量前进行一次匹配，当全天都在相同的CO2浓度下做实验，每20到30分钟就

应当匹配一次，每次测量都要改变CO2浓度，每变一次需要进行一次匹配。

三、校准菜单（Calib Menu） 1、Flow Meter Zero

选择“Flow Meter Zero”，校正自动进行，10秒钟后，流量计信号应在 0±1mV范围内，按F5 退

出。注意关闭空叶室，化学管完全scrub。

2、 红外分析仪——IRGA Zero

①选择“IRGA Zero”，先校正CO2零点：按F1，AutoCO2，苏打管：Scrub，化学管：bypass；等待

CO2R和CO2S稳定在±1μmol/mol；

② 再校正H2O零点：按F2，AutoH2O，苏打管：bypass，化学管：scrub；等待H2OR和H2OS稳定在

0.01（时间最少15分钟），按F5（Quit）返回Calibration Menu；

③ 当对CO2 和 H2O 都同时调零，则，这时按F3 (AutoAll)，旋紧碱石灰管和干燥管上端的调节螺

母指向Full scrub方向，按F5 (Quit)退出，在“Calib Menu”（按F3）中选择“View, Store Zero & Spans”，按提示进行存贮操作。

注意：绝不允许进行“Calib Menu”中“IRGA Span”的任何操作，校正CO2和H2O零点时，应该关闭叶室并且保持叶室中不能夹入叶片，而且利用新鲜的碱石灰和干燥剂。关闭仪器叶室，然选择“Y”。

3、CO2 Mixer 校正

① 选择“CO2 Mixer -Calibrate”，确认CO2 Mixer的最大值，应该在2000μmol/mol以上； ② 自动校正 CO2 Mixer，该过程在0～5000mv之间进行8个点的校正，每个点大约需要20～30秒； ③ 显示校正数据并提示用户Plot this（Y/N），选择“Y”，显示校正数据的图形； ④ 应用校正结果“Implement this calibration（Y/N）”，选择Y，退出返回到校正主菜单。 注意：校正前应该安装CO2 Mixer，并将Cylinder Cover拧紧以刺破CO2钢瓶如长期未使用CO2钢瓶，则首次使用时需要进行CO2 calibration，以后则不必经常校准，注意将CO2调节旋钮拧至Scrub并关闭叶室。

4、LED光源校准

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① LED光源取代上部叶室的位置，LED的光传感器接头替代原叶室的内置光量子传感器接头； ② 选择“Light Source Calibrate”；选择“Y”；自动校正 LED光源 ；

③ 显示校正结果并显示响应的图形 ；应用校正结果，选择“Y”；选 回 OPEN 测量主菜单。 注意：只有当安装了LED红蓝光源并且选择了响应的配置文件才能够按以上操作；不要忘记安放3

个O型圈。

四、测量菜单

注意！！下面测量方式都需进行以上相关的准备步骤，以下详细说明各方式测定流程

第一种测量步骤：非控制环境条件（日变化）流程

1、开机选择 Config Menu—打开标准叶室（factory default）； 2、打开测量菜单进行日常检查 （参照以上第二大点内容）；

3、打开叶室 夹好叶片，再密封；（注意叶温热电偶避开叶脉，用手柄上旋钮密封后，确定不漏气，每次用直接打开夹叶片，切记不必每次再拧手柄旋钮了，不然会折断）；

4、进入测量菜单F4（New Menu）

① 按1, F1，打开Open LogFile将数据存入建立一个文件，（注意 按F1“Dir”，重新定义路径：选 中Flash，这样文件保存在CF卡，方便导数据；不然默认在User主机上，导数据费时费电）确定输入一个remark（标记何处理何品种名），完成文件名。

② 等待a行参数稳定，b行ΔCO2值波动 < 0.2，Photo参数稳定在小数点之后1位； c行参数在正常范 围内（0 < Cond < 1、Ci > 0、Tr > 0）； ③ 按F1(Log)记录数据；

④ 更换另一叶片（按F4，添加remark，分清不同处理或品种）；按F3，一定记住Close file保存数据文件；注意：至少半小时进行一次Match（建议每一品种测3片叶子，读3个数）

5、导出数据 （若在CF卡上，直接用读卡器导出来，存在主机时详细见后面第四大点） 6、退回主界面：关机。注意：把化学管旋钮旋至中间松弛状态；保持叶室处于打开状态。

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第二种测量步骤：控制环境条件的测定流程

1、开机选择 主菜单Config Menu（打开红蓝光源（LED）已安装 2、进入测量菜单

① 将光强设为自然状态一致或光强饱和点（一般1000-1500范围），设定需要CO2 浓度，取下外置光量子传感器的小红帽，若外界光强低于1000，则要进行光诱导光越弱诱导时间越长（取决于最高光强，诱导完成后在测量菜单第2功能行F5，按f5，选择“Q) Quantum Flux XXX mol/m2/s”，enter，输入需要光强，enter；

② 将苏打管拧到完全scrub位置，化学管拧到完全bypass位置，按2，再按F3- Mixer(CO2)按上下箭头键选择参考室R和样品室S设定CO2需要浓度（安装钢瓶状态）；

③ 按2（2功能行）：F1，LeafFan，保持Fast；F2，Flow通常为500（小叶片或低光合速率的植物，可以将Flow调低到200以上）；F4，Temp，一般为off状态，做控制温度时才进行设定（测量之前一定要首先查看参数行H的值，了解当前环境的温度，因只能控制环境温度的正负7度以内；F5，Lamp通常保持off；

④ 打开叶室 ：夹好叶片，从测量菜单上按F1，Open LogFile，然后按F1“Dir”，重新定义路径：选中Flash或user建立一个文件，enter，输入一个remark标记；

⑤ 等待a行参数稳定，b行ΔCO2值波动 < 0.2 μmol-1，Photo参数稳定在小数点之后一位，c行参数在正常范围内（00、Tr>0）；

⑥ 按F1(Log)记录数据；（一般每一品种测3片叶子，每片读3个数）

⑦ 更换另一叶片，按F4，添加remark, 重复4-6步骤，进行测量；注意：至少半小时进行一次Match；⑧ F3(Close file)，保存数据文件。

3、导出数据（详细见后面第四大点）

4、退回主界面：关机。提示：如果外界光强低于1000μmolmol-1，则需要进行光诱导，一般诱导时间约30mins左右，诱导光强取决于实验设计的光响应曲线中的最高光强，或者植物生活中较适宜的光强，在测量菜单第2功能行的F5，按Q，设定相应的光强，打开光源，然后将叶片夹入已打开光源的叶室，如果外界光强很好，不需要诱导，夹上叶片后打开光源，设定成光强梯度的饱和点，闭合叶室不漏气，准备测量。注意：把化学管旋钮旋至中间松弛状态；旋转叶室固定螺丝，保持叶室处于打开状态，把光量子传感器红帽和缓冲瓶进气口绿帽都盖好。

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第三种测量步骤：光响应曲线测定步骤

1、开机选择主菜单Config Menu（打开红蓝光源（LED）已安装； 2、进入测量菜单，进行日常检查 （参照以上第二大点内容）；

① 当安装钢瓶状态时，将苏打管拧到完全Scrub位置，化学管拧到完全Bypass位置，按2，再按F3， Mixer(CO2)按上下箭头键选择参考室R和样品室S设定CO2需要浓度；当没有安装钢瓶时，两个化学管都拧到完全bypass位置；

② 当有无钢瓶状态下，光强都设为自然状态一致或光强梯度的第一个点，设定CO2 浓度（安装钢瓶时设定：等于或高于空气中的；未安装：直接用自然的CO2 浓度），取下外置光量子传感器的小红帽，若外界光强低于1000，则要进行光诱导光越弱诱导时间越长，诱导完成后在测量菜单第2功能行F5，按Q设定相应光强；

③ 按2（2功能行）：F1，LeafFan，保持Fast；F2，Flow通常为500（小叶片或低光合速率的植物，可以将Flow调低到200以上）； F4，Temp，一般为off状态，做控制温度时才进行设定一般25-30℃（测量之前一定要首先查看参数行H的值，了解当前环境的温度，因只能控制环境温度的正负7度以内；F5，Lamp通常保持off，做控制温度设为自然状态一致或光饱和点；

④ 当安装钢瓶状态时，需按F3，Mixer(CO2)，按上下箭头键选择参考室R和样品室S设定CO2需要浓度当没有安装钢瓶时，无需按F3，直接用自然的CO2 浓度。 3、进入测量菜单

① 打开叶室，夹好叶片，闭合叶室；注意叶温热电偶避开叶脉

② 按F1，Open LogFile，选择将数据存入Flash或user建立一个文件，进入输入一个remark确定； ③ 按5，F1(Auto prog) ，进入自动测量界面，按上下箭头键选择Light Curve，确定，出现Desired lamp settings，可按home键自高到低设定光强梯度2000、1600、1200、1000、800、600、400、300、200、150、100、50、0（注意设定时将数据删除完，数值间一定空格间隔，200以下的可多设几个），确定，出现最小等待时间：设定120S（不能更改，不然数据不佳），最大等待时间：设定200s，enter，ΔCO2绝对值低于50需匹配enter，按Y，进入自动测量（Log记录数据，＊表明数据记录进行中）。 ④ 按1，F3(Close file)保存文件（切记），更换叶片，重复1-3步骤。

注意：等待测量中可通过功能行1的F2（view file）下的F1(ImportGrafDef)—从light curve进入看到 6

散点图（完成后功能行左上角*消失），或按F3（View Data），以D这种格式的数据为成列排列，按字母D，查看数据。按住shift键和右键头，可以快速查看各列数据。

4、 导出数据 （详细见后面第四大点）

5、退回主界面：关机。注意：把化学管旋钮旋至中间松弛状态；旋转叶室固定螺丝，保持叶室处于打开状态，把光量子传感器红帽和缓冲瓶进气口绿帽都盖好。

提示：⑴ 每次开始测量之前，进行一次匹配（F5-match）,一个植株上选3片叶子，每片取1个数，建议轮回测完1次重复，再测第2次重复，减少时间跨度；

⑵ 选程序红蓝光，2-3日校准一次光源（按F3校准菜单--选LED，calibration，enter，plot Y，一条直线说明正常。

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第种测量步骤：CO2响应曲线测定步骤

1、 开机选择 主菜单Config Menu（打开红蓝光源（LED）已安装； 2、进入测量菜单

① 安装上CO2钢瓶：将苏打管拧到完全Scrub位置，Dessicant化学管拧到完全Bypass位置（注意密封圈，把油滤勾出来装好，放在2个化学管中间并拧好螺丝；每个钢瓶在使用之前都要求做1次校准）

② CO2混合器校准：将注入系统（钢瓶）进行预热1分钟左右，按Escape进入主菜单，按2，再按F3，

Mixer(CO2)按上下箭头键选择参考室R和样品室S设定CO2需要浓度，再按F3进入calib menu（选择CO2 Mixer，calibrate，enter），若CO2浓度高于2000ppm—-按Y，自动进行8点校准（8个电压值标定8个CO2浓度），完成后提示“implement this calibrate?”，按“Y”，然后按esc（注意：每个钢瓶在使用之前都要求校准一次；若曲线不直，把苏打管拧到完全scrub，再校准1次）

③ 按2（2功能行）：F1，LeafFan保持Fast；F2，Flow通常为500； F4，选择Block（输入测定温度，

一般25-30℃）； F5，Lamp，选择 Q) Quantum Flux，设定为饱和光强(根据光响应曲线确定约700以上或设为实验要求的光强)， enter；按3，F1（area）输入测量叶面积或默认叶室面积。 3、进入测量菜单

① 打开叶室 夹好叶片（可提前夹住叶片，留封勿胁迫，做20分钟光诱导活化，CO2S浓度可设定为比 环境浓度40-50ppm（约400ppm左右）；

② 将光强设为饱和光强（一般1200左右）或设为实验要求的光强，从测量菜单上按F1，Open LogFile，选择将数据存入Flash或user建立一个文件，enter输入一个remark；

③ 按5功能行：F1(Auto prog) ，进入自动测量界面，按上下箭头键选择A-Ci-Curve，enter，命名新文件进入，添加remark，出现Desired CO2 settings，可按home键自高到低设定光强梯度1500、1000-0（注意设定时将数据删除完，数值间一定空格间隔，200以下的可多设几个) ，enter，出现最小等待时间：

设定60S；最大等待时间：设定300，enter，ΔCO2绝对值低于50需匹配，按Y，进入自动测量，等待测量结束。（期间可通过功能行1的F2（view file）下的F1(ImportGrafDef)—从light curve进入看到散点图（完成后功能行左上角*消失），

④ 按1，F3，Close file，保存文件（切记），更换叶片，重复1-3步骤。 4、 导出数据 （详细见后面第四大点）

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5、退回主界面：关机。提示：把化学管旋钮旋至中间松弛状态；旋转叶室固定螺丝，保持叶室处于打开状态，把光量子传感器红帽和缓冲瓶进气口绿帽都盖好。

注意：每次换钢瓶后都要求做1次校准匹配；提前做20分钟光诱导，把叶室夹住，留缝，勿胁迫，把光强设到最高值

五、导出数据

用RS-232数据线连接电脑和6400（按esc退回主界面，按F5 Utility Menu），按上下箭头选择“File Exchange Mode”，在电脑上预先安装SimFX软件，双击打开LI6400FileEx，点击File，选择Prefs，选择Com端口，按Connect，连接成功后，选择文件传输到指定位置（CF卡内的数据也可在退出卡后，直接插入电脑读卡器来导出数据），关机—把化学管旋钮旋至中间松弛状态；旋转叶室固定螺丝，保持叶室处于打开状态。测量结束后，应关闭文件（“closefile”按F3）使其存贮。不进行此操作，数据会丢失。

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6400-09土壤呼吸叶室测量步骤

1、安装土壤呼吸叶室

① 用8颗内六角螺丝把土壤呼吸室固定块装到叶室下半部分的位置；（闭路式）

② 安装时注意在分析器底座上的密封垫片（可重复使用，要一直粘在分析器底座上，勿移位） ③ 8颗螺丝上紧，逐渐上紧，均匀受力； 2、先装好化学药品

① 苏打管下和干燥管上位置正确；

② 换药先拧开底盖并且填充量低于螺线1cm； ③ 不可拧的过紧，注意密封圈；

④ 干燥管完全bypass，苏打管完全Scrub以抽提CO2； 3、LI-6400连接

①一条缠有黑胶接到主机侧面的样本室与参比室进气口“Y”形管； ②一条连接土壤呼吸室的胶管到LI-6400主机采气口（标有Inlet）。

4、开机（Is the chamber/IRGA connected? Y——选择“Soil Chamber”——加载相应计算程序

——OPEN主菜单） 5、测量菜单

① 测量土壤表面CO2浓度（把叶室靠近土表，屏幕显示的CO2S 浓度）； ② 改变管道的连接方式（苏打管部分Scrub，干燥管完全bypass）；

③ 去除塑料盖，输入文件名（1，F1），进入显示存储空间，进入添加标记remark；

④ 输入叶室的面积（功能3，F1），80cm2 （用土壤环）默认为81.6 cm2，确定土壤表面的CO2S； ⑤ 将叶室安装到土壤环（PVC）上，插入土壤温度传感器（靠近叶室，深度为5～10cm）； ⑥ 输入Target 值（变值）和“Delta”值 (功能7，F1) ，输入Depth值(功能7，F5如果使用了土壤环，

一般为-1) ，输入测量重复3次（功能7，F2），选择测量结果（功能7，F4），测量开始（功能7，F3），设表样（±1），进入“Y”，查看数据，功能1，F2-F3-D-shift左右键查看数据。 6、导出数据

① 用RS-232数据线连接电脑和LI-6400，按esc退回主界面，Utility Menu（F5），file exchange mode，

在电脑上预先安装SimFX软件，双击打开LI6400FileEx，点击File，选择Prefs，选择Com端口，按Connect，连接后选择文件传输到指定位置（CF卡内的数据也可在退出卡后，直接插入电脑读卡器来导出数据），Ok，按connect，显示user下存储文件，将文件拖到电脑相应文件夹。

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土壤呼吸测定注意事项

1、校准菜单(Calib Menu)只有以下三个选项供选择： \2S, H2OS)\是仅对样本室IRGA进行操作； \—-是对IRGA进行标准距校准;

\”与光合作用测量环境下的功能是相同的; 2、测量菜单（New Measurements）功能键的改变 用土壤呼吸室配置文件运行后，以下功能键被屏闭： （Match—Leaffan —Flow—Mixer—Lamp）

3、如果使用了土壤环，那么应该输入负数，深度为土壤呼吸室底部边缘与土表之间的距离，单位为

cm ，尽量把土壤环埋成一致深度，提前几个小时或一天把土壤环插入样地，埋时拿木棒垫在上面左右敲打，尽量均匀保持水平面；

4、为了增加测定的可比性，测定时间最好一致，因为一天之中，同一块土壤“呼吸”变化很大； 5、土壤室的下边缘尽量靠近地面，增加混合程度，使测量气室底端距离地面1-2 cm为宜； 6、增加测定点数，以期获得更加接近真实土壤呼吸速率；

7、保持土壤呼吸室遮荫，以免升温，风吹会使得叶室口处产生气压波动，最好在刮风环境下用物体

为叶室挡风；

8、降雨后CO2浓度升高，将导致测量出土壤呼吸初值高于真实两倍多，在安放土壤呼吸室时需要小

心，以免造成土壤环移位；

9、输入在该测量点循环测量（Cycles）的重复次数 (功能键7行, F2)

10、数值记录方式：记录最终的计算结果，记录测量过程中的瞬时观察值，还是两者都记录 (功能键

第 7行, F4)；

11、按Start (功能键第7行, F3)开始测量--若尚未打开任何记录文件，系统会提示输入保存数据的文件

名——按 键，数据会记录在缓存中，或输出到 comm 端口，再次按下escape键，数据不保存，但测量程序还将继续进行——测量过程，用户定义好的提示语句将自动给出，提示语句清单在功能键第3行, f4 \进行设定； 12、加入标识。测量循环就可以开始了；

13、LI-6400系统提供图示化监视测量过程的进展，调用\，这是土壤呼吸室配置程序

的默认曲线图设置；

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14、设定目标值，环境CO2浓度的初始值；delta为差值—入target为340ppm，delta为10ppm，则上限

为350ppm，下限为330ppm。当浓度达到350ppm时，泵打开，抽提CO2达330ppm以下。如此反复循环。

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/mg8x.html