鸡油菌多糖的提取及组成分析

鸡油菌

　2005年7月第28卷第7期重庆大学学报(自然科学版)

JournalofChongqingUniversity(NturlScienceEdition)

Jul.2005　Vol.28　No.7

文章编号:1000-582X(2005)07-0118-04

鸡油菌多糖的提取及组成分析

王茂胜,连　宾

1

1,2

3

,梁宗琦,刘爱英

11

(1.贵州大学发酵工程与生物制药省重点实验室　2.重庆大学,摘　要:鸡油菌(Cantharelles),多糖是鸡油菌的重要活性

成分之一.,、时间、固液比(加水倍数),确定了最佳提取工艺为40min、80℃和25倍水,在此条.薄板层析结果显示,鸡油菌多糖主要由葡萄糖、甘露糖、核糖组成.

关键词:鸡油菌;多糖;提取;组成　　中图分类号:Q539

文献标识码:A

鸡油菌(Cantharellescibarius)别名黄丝菌、杏菌,是一种外生菌根真菌,属真菌界(Kingdomfungi)、担子菌门(Basidiomycota)、同担子菌纲(homobasidiomyce2

tes)、鸡油菌目(Cantharellales)、鸡油菌科(Cantharel2laceae)和鸡油菌属(cantharellus).鸡油菌是鸡油菌目、

脂、异丙醇、乙酸等)均为分析纯,单糖标品(葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖

、棉子糖、麦芽糖、

核糖)均为生化试剂.

1.2　鸡油菌多糖提取及组成研究工艺流程

参照文献[4-6]并进行适当修改,对鸡油菌多糖提取及组成研究采用以下工艺进行:

科、属的模式种,富含胡萝卜素、VA、VC和钙、铁、磷等多种矿质元素,其性平、味甘,具有清肝、明目、利肺、和胃、益肠、减肥、美容和抗衰老等功效

[1-2]

.经常食用该

菌可以防治因缺乏VA所引起的皮肤干燥症、角膜软化症、视力失常、眼炎、夜盲症;还可以预防某些呼吸道和消化道感染的疾病.此外鸡油菌子实体多糖对小白鼠肉瘤S-180的抑制率可达80%

[3]

,但鸡油菌多糖的

图1　多糖提取及组成研究工艺流程

含量和组分未见报道.文中以贵阳市花溪区野生鸡油菌为材料,采用正交实验设计法研究了提取温度、时间、加水倍数及木瓜蛋白酶4个因素对鸡油菌多糖提取率的影响,为进一步研究鸡油菌多糖的化学结构和生物活性提供基础资料.

1.3　鸡油菌水溶性多糖最佳提取方法的确定1.3.1　鸡油菌总糖含量测定方法

多糖提取率以总糖含量作为指标,其测定方法采用蒽酮比色法,具体包括如下步骤:

1)制作标准曲线:分别配制浓度为10、20、30、40、50μg/mL的葡萄糖溶液,各取1mL,再加入3mL蒽酮试剂,迅速浸入于冰水中冷却,待几只试管均加完后,一起浸入沸水浴中(为防止水分蒸发,应在试管口上加盖一个玻璃球,自重新沸腾起记时间),准确煮沸

[4]

1　材料与方法

1.1　主要材料、试剂

鸡油菌:野生鸡油菌子实体采自贵阳市花溪区.

多糖提取与测定所有试剂(氯仿、正丁醇、乙酸乙

3

收稿日期:2005-03-11

基金项目:教育部西部地区高等学校高级访问学者计划项目(教技厅函[2002]3号);贵州大学科学基金(校科合博基字

(2001)001号)

作者简介:王茂胜(1978-),男,山西朔州人,贵州大学硕士研究生,主要从事微生物方面的研究.

鸡油菌

第28卷第7期　　　　　　　　　　王茂胜,等:　鸡油菌多糖的提取及组成分析119

10min后,取出用自来水冷却,于室温中平衡片刻(约10min左右),然后在620nm处比色,以吸光度(OD

2　结果

2.1　标准曲线的制作

值)为纵坐标,糖浓度(X,μg/mL)为横坐标得标准曲线.

2)多糖水解、比色:取9支大试管各加1g鸡油菌

以吸光度OD为纵坐标,葡萄糖的浓度X为横坐标绘制标准曲线,得回归方程OD=0.009731X+0.003714,R=0.9998

.

2

子实体粉末,不同条件(见表1)提取得到多糖浸提上清液(由图1所示的方法得到),稀释100倍后各取1mL,加入3mL蒽酮试剂,迅速浸入于冰水中冷却,

待9只试管均加完后,一起浸入沸水浴中(为防止水分蒸发,应在试管口上加盖一个玻璃球,自沸腾起记时间),准确煮沸10min后,,中平衡片刻(约10min),测OD值,量X.

3):根据以下公式换算出

图2　葡萄糖浓度标准曲线

2.2　多糖最佳提取方法

根据2.1所得回归方程,求出OD值对应的多糖浓度X,然后,根据1.3.1中列出的公式求出鸡油菌多糖提取率.计算结果见表2:

表2　正交实验结果

实验号

123456789K1K2K3R

鸡油菌多糖提取率.

2

鸡油菌多糖提取率(%)=[(X×n×10×

-6

10)/W]×100%.

因素

A1112223334.3557.7596.0501.695A2

式中:n为提取时的加水倍数;W为原料粉末干重(g);10为上清液稀释倍数;10为微克与克的单位换算因

2

-6

B1231231233.9047.5575.3543.653B2

C1232313123.4055.6717.7754.370C3

D1233122317.6423.2045.9704.438D1

OD值0.1630.1970.3400.2550.4940.1040.1630.4000.387

鸡油菌多糖提取率/%2.4563.9726.6385.164

12.5931.5474.0936.1087.876

子.

1.3.2　正交优化确定最佳提取方法

根据文献资料[7]及预实验结果,确定了以时间(A)、温度(B)、加水倍数(C)、木瓜蛋白酶(D)作为影

4

响因素,各选取3个水平进行L9(3)正交实验,实验

因素水平如表1所示.

表1　多糖提取正交实验的因素水平表

水平

123

时间/min

204060

因素

μg g-1温度/℃加水倍数加酶量/

601508020100

100

25

200

最优组合

以多糖提取率作为评价标准,表2结果说明第5号处理即40min、80℃、25倍水、不加酶的条件下,其多糖提取率最高,可以达到12.593%.2.3　鸡油菌单糖组分

1.4　鸡油菌单糖组分分析

单糖组分分析采用薄板层析色谱法(略有修

[4,8]

改),具体为:1)取粗多糖干品20mg,加入2mol/L的H2SO4溶液,置于沸水浴中封管水解4h后,取出冷却,然后加入Ba(OH)2中和,最后3000r/min离心除去BaSO4沉淀,即得单糖混合液

[4]

以葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、棉子糖、麦芽糖、核糖标准品和鸡油菌多糖水解液进行薄层层析,结果表明,鸡油菌多糖水解物主要由葡萄糖、甘露糖、核糖组成,3种单糖的Rf值见表3.

表3　多糖水解物薄层色谱的Rf值

项　目

葡萄糖

标准品甘露糖

核糖

子实体多糖

Rf值

.2)将3g硅胶G和

7mL0.3M的NaH2PO4溶液混合,在研钵中研磨均

匀,均匀涂布于干净的玻板(10cm×20cm)上,自然晾干后在110°的烘箱中活化1h备用,然后点样、展开、显色.所用展开剂为:正丁醇:乙酸乙脂:异丙醇:乙醇:水(7∶20∶12∶7∶3)(V/V);显色剂为:2%二苯胺丙酮溶液:2%苯胺丙酮溶液:85%磷酸(5∶5∶1)(V/V).

0.226

——0.225—0.310—0.306——0.4550.462

鸡油菌

120重庆大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2005年

此外,薄板层析结果显示核糖色度明显比葡萄糖和甘露糖低,说明其含量少于葡萄糖和甘露糖.

参考文献:

[1]　车振鹏.“三菌”复合保健口服液的功效研究(一)[J].食

3　讨　论

目前,关于食用菌多糖提取的方法大多采用热水浸提和酒精沉淀法进行.影响多糖提取率的因素很多,如:浸提温度、时间、加水量以及酶活力等.实验通过正交实验确定了鸡油菌多糖提取最佳条件,即:40min、80℃、25倍水,在此条件下其多糖提取率最高,可达12.58%.极差分析结果显示4品科技,2002,(2):69-70.

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(1):65-69.

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[8]　连宾,郁建平.树舌、茯苓多糖的提取分离及组成研究[J].

40min、80℃、25、不加酶.此实验中加入木瓜蛋

白酶并没有提高鸡油菌多糖的提取率,具体原因有待于进一步研究.但黄才欢成和结构有关.

蒽酮比色法是一个快速而方便的定糖方法,蒽酮可以和游离的或多糖中存在的己糖、醛戊糖及己糖醛酸起反应,反应后呈绿色,在620nm处有最大吸收.蒽酮也可与其他一些糖类等发生反应,但呈现的颜色不同,如和色氨酸反应呈现绿色.实验结果表明:鸡油菌多糖主要由葡萄糖、甘露糖、核糖组成,而且核糖含量很低.由于葡萄糖、甘露糖、核糖的结构均属于己糖、醛戊糖及己糖醛酸范畴,并且笔者在测定鸡油菌多糖时已经测定了其子实体氨基酸组成,结果显示鸡油菌子实体蛋白中并不含有色氨酸(另文发表),所以用蒽酮比色法测定鸡油菌总糖提取率是可行的.

许多实验结果表明,食用菌多糖能够促进人体免疫功能,具有抗肿瘤、抗病毒、抗突变、抗辐射、降血压

[10-13]

等功能.目前国际上食用(药用)菌的医疗保健品走俏,有关抗癌、增寿、强力、益智、美容以及提高免疫力和防止衰老等为特点的系列制品不断涌现,几十种食用菌多糖的药物制剂都已投放市场

[14-16]

[9]

重庆大学学报(自然科学版),2004,27(1):120-122.

[9]　黄才欢,李炎,王秀芬.茯苓多糖的提取及其结构表征

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在提取茯苓多糖时也曾得

出类似的结论,这可能与糖蛋白或蛋白质的氨基酸组

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[16]　杜德清,王丽霞,陈志生.液体深层发酵技术在食用菌方

,大大促

进了食用菌加工产业的快速发展.市场需求的逐步增加又反过来刺激多糖资源开发、结构分析、药理药效和作用机理等方面的研究

[17-19]

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[19]　潭周进,谢达平.多糖的研究进展[J].食品科技,2002,

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多糖研究报道的频率相当高,人们在努力寻找新的功能性多糖资源和新的多糖提取利用方法上正不断获得新的进展.鸡油菌作为我国重要的野生食用菌资源,其多糖的研究工作将有助于对野生菌物资源的开发和利用.

鸡油菌

第28卷第7期　　　　　　　　　　王茂胜,等:　鸡油菌多糖的提取及组成分析121

ExtractionandtheCompositionofPolysaccharidesfromCantharelluscibarius

WANGMao2sheng,LIANBin

1

1,2

,LIANGZong2qi,LIUAi2ying

11

(1.GuizhouProvincialKeyLaboratoryofFermentationEngineeringandBio2Pharmaceutical,

GuizhouUniversuty,Guiyang550003,China;

2.KeyLaboratoryfortheExploitationofSouthwesternResources&theDolEngineering

UndertheStateMinistryofEducation,Abstarct:Theextractiontechnologyofrelluscibariushasbeenstudied.Theeffectsofseveralfactorse..time,byusingmultipleofwaterandaddingPapainontheextractiofextractionconditionshavebeenoptimizedbythemethodoforthogonalde2sign.Thethatrateofpolysaccharidesisthehighestandupto12.58%whenextractionconditionsare40min,80,252time2volumewateroffruit2bodiesweight.ByusingthemethodofThinLayerChromatography(TLC),theauthorsprovethatthepolysaccharidesofCantharelluscibariusiscomposedofglucose,mannoseandribose.Keywords:Cantharelluscibarius;polysaccharides;extraction;composition

(编辑　陈移峰)

(上接第117页)

ProgressofResearchonHepatocellularCarcinomaCellsApoptosis

InducedbyChineseTraditionalMedicine

LUOQing,SONGGuan2bin,QINJian,SHENXiao2dong

(KeyLaboratoryforBiomechanicsandTissueEngineeringUndertheStateMinistryofEducation,

CollegeofBioengineering,ChongqingUniversity,Chongqing400030,China)

Abstract:UsingChinesetraditionalmedicine(CTM)toinduceapoptosisoftumorcellisprobablyapromisingwayoftumortherapy,whichisalsothefocusofthestudiesinthefieldsofbiomedicineandoncology.ThroughthereviewoftheresearchesinrecentyearsonhepatocellularcarcinomacellsapoptosisinducedbyCTM,suchasGS2Rh2(ginsenoside2Rh2),taxol,arsenictrioride,teapolyphenols,theauthorsconsiderthattherearethreemaininducementmechanisms.CTMinduceshepatocellularcarcinomacellsapoptosisbyeffectingthecellcycle,restrainingtheexpressionofcancer2re2latedgeneanddecreasingthetelomeraseactivity.AcertainkindofCTMinduceshepatocellularcarcinomacellsapopto2sismaythroughonewayofthethreeandsometimesmorethanone.

Keywords:Chinesetraditionalmedicine;hepaticellularcarcinomacells;apoptosis

(编辑　李胜春)

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/mg14.html