68.培养基适用性检查标准操作规程

******制 药 有 限 公 司 文件名称 起 草 人： 审 核 人： 审 核 人： 批 准 人： 颁发部门 分发部门 质量部 质量部、质量保证室、质量控制室 培养基适用性检查标准操作规程 起草日期： 审核日期： 审核日期： 批准日期： 部门： 文件编号： SOP-QC-000-03 页 码 版 本 号 生效日期 1/6 03 1 目的

建立培养基适用性检查的标准操作规程，保证微生物限度检查结果的准确性和可靠性。 2 范围

适用于微生物限度检查中成品培养基、脱水培养基或按处方配制的培养基。 3 职责

质量部组织制订，微生物限度检查操作人员负责实施。 4 内容

4.1 依据：《中国药典》2015年版四部。 4.2 概述： 4.2.1

培养基质量是影响微生物限度检查结果的重要环节。计数测定用培养基的促

生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。 4.2.2

培养基适应性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生

长状态或特征来评价判断检验用培养基是否符合检验要求。 4.2.3

微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和

控制菌检查用培养基两部分。 4.2.4

微生物限度检查用培养基质量控制的一般原则

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SOP-QC-000-03 4.2.4.1不同处方培养基的替代使用不能通过培养基适应性试验简单确定。

4.2.4.2如果没有特殊规定，培养基配制采用蒸馏水或纯化水均可，但应采取一定措施加以检测控制；如蒸馏水应测PH值是否为5～7；采用离子交换法制备的纯化水，电阻值应不小于2МΩ等。

4.2.4.3尽量现用现配。培养基灭菌后在能取出的前提下，尽快取出，切忌在高压锅内过夜存留；固体培养基灭菌或熔化后，融化状态放置不得超过8h；固体培养基熔化再使用应不超过一次；一般预制培养基可置洁净环境2～25℃保存，但不应超过21天。 4.2.4.4干粉培养基变质、过期均不应再用；预制培养基储存过程中发现浑浊、变色、长菌、严重脱水等变化均不应再用。 4.3 计数培养基的适应性检查 4.3.1菌种

培养基大肠埃希菌 CMCC（B）44 102 金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26 003 枯草芽孢杆菌 CMCC（B）63 501 白色念珠菌 CMCC（F）98 001 黑曲霉 CMCC（F）98 003

4.3.2培养基

（1）需氧菌总数计数用培养基

胰酪大豆胨琼脂被检培养基 胰酪大豆胨琼脂对照培养基 或

胰酪大豆胨液体被检培养基 胰酪大豆胨液体对照培养基

（2）霉菌和酵母菌计数用

沙氏葡萄糖琼脂被检培养基 沙氏葡萄糖琼脂对照培养基

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4.3.3菌液制备

SOP-QC-000-03 （1）接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时后，将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。

（2）接种白色念珠菌、黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于20~25℃培养5~7天（或直到获得丰富的孢子）后，将白色念珠菌、黑曲霉的新鲜培养物用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。 4.3.4培养基适用性检查

（1）分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液至胰酪大豆胨液体被检培养基中，或分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂被检培养基，每株试验菌平行制备2管或2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养时间不超过3天。

（2）分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂被检培养基和沙氏葡萄糖琼脂被检培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，胰酪大豆胨琼脂被检培养基置30～35℃培养时间不超过3天。沙氏葡萄糖琼脂被检培养基置20~25℃培养时间不超过5天。

（3）同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 4.3.5结果判定

若被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.5～2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该固体培养基的适用性检查符合规定。若被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌生长良好，判该液体培养基的适用性检查符合规定。 4.4控制菌检查用培养基适用性检查 4.4.1 菌种

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SOP-QC-000-03 大肠埃希菌 CMCC（B）44 102 金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26 003 铜绿假单胞菌 CMCC（B）10104 乙型副伤寒沙门菌CMCC(B) 50094

4.4.2 培养基

肠道菌增菌液体样品培养基 肠道菌增菌液体对照培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂样品培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基 麦康凯液体样品培养基 麦康凯液体对照培养基 麦康凯琼脂样品培养基 麦康凯琼脂对照培养基 RV沙门菌增菌液体样品培养基 RV沙门菌增菌液体对照培养基 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂样品培养基 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂对照培养基 三糖铁琼脂样品培养基 三糖铁琼脂对照培养基

溴化十六烷基三甲胺琼脂样品培养基 溴化十六烷基三甲胺琼脂对照培养基 甘露醇氯化钠琼脂样品培养基 甘露醇氯化钠琼脂对照培养基 4.4.3 菌液制备

将大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，将上述培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。 4.4.4 培养基适用性检查

4.4.4.1液体培养基促生长能力检查：分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。

4.4.4.2固体培养基促生长能力检查：用涂布法分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，被检培养基和对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。

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SOP-QC-000-03 4.4.4.3培养基抑制能力检查：接种不少于100cfu的试验菌于被检培养基中，在相应控 制菌检查规定的培养温度及最长培养时间下培养，试验菌应不得生长。

4.4.4.培养基指示特性检查：用涂布法分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养基温度及最短培养基时间下培养。被检培养基上试验菌的菌落形态特征、菌落颜色及指示剂反应情况应与对照培养基一致。

表1控制菌检查用培养基的促生长、抑制和指示能力检查

控制菌检查 培养基 肠道菌增菌液体培养基 耐胆盐革兰氏阴性菌 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 麦康凯液体培养基 大肠埃希菌 麦康凯琼脂培养基 RV沙门菌增菌液体培养基 沙门菌 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 三糖铁琼脂样品培养基 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基 甘露醇氯化钠琼脂培养基 促生长能力+指示能力 乙型副伤寒沙门菌 指示能力 促生长能力 抑制能力 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 特性 促生长能力 抑制能力 试验菌株 大肠埃希菌、铜绿 金黄色葡萄球菌 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌、铜绿 促生长能力 抑制能力 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 促生长能力 抑制能力 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 促生长能力+指示能力 金黄色葡萄球菌 抑制能力 大肠埃希菌

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