植物蛋白质提取方法
更新时间:2023-10-20 09:36:01 阅读量: 综合文库 文档下载
一、 植物蛋白质提取
1. TCA-丙酮法
(1)称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中,加少许PVPP,反复加液氮研磨至粉末。
(2)研磨好的样品用10 倍体积(w/V)的10%的TCA-丙酮溶液悬浮,加入0.1 M PMSF、
1 M DTT 至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT,超声5 分钟,于-20℃静置6 小时或
过夜后,4℃,20000g 离心15 分钟,弃上清。
(3)沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮,于-20℃静置1 小时后,4℃,20000g 离
心15 分钟,弃上清。
(4)重复步骤(3)一次。 (5)沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗,于-20℃静置1 小时后,4℃,20000g 离
心15 分钟,弃上清。
(6)重复步骤(3)一次。
(7)取出沉淀真空干燥约5 分钟,除尽有机溶剂。 (8)按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例,加入1 mM PMSF、10mM DTT,超声5
分钟,充分溶解1 小时,10℃,35000g 离心30 分钟,上清为所需的蛋白溶液。 (9)用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。 (10)蛋白样品溶液小量分装,-80℃保存。
注意事项:
(1) TCA 有利于去除酚类色素等物质,但不利于蛋白的抽提,使用浓度不宜过高,在后
面丙酮处理中,尽量除去。
(2) 蛋白样品保存:样品浓度不宜过高,建议将高浓度样品适度调整,为避免反复冻融
应分装保存,长期保存用-80℃,短期保存用-20℃。
(3) 1M DTT:0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解,-20℃保存。 (4) 0.1M PMSF:0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解,-20℃保存。
正在阅读:
植物蛋白质提取方法10-20
经典黑鸡汤负能量语录02-22
I-Shift变速箱概述 - 图文01-03
致自己的毒鸡汤语录02-22
杨绛作文素材自己整理的08-07
五上15《艾滋病小斗士》10-18
书籍《芦花荡》读后感2022年03-24
销售技能培训手册07-26
- 多层物业服务方案
- (审判实务)习惯法与少数民族地区民间纠纷解决问题(孙 潋)
- 人教版新课标六年级下册语文全册教案
- 词语打卡
- photoshop实习报告
- 钢结构设计原理综合测试2
- 2014年期末练习题
- 高中数学中的逆向思维解题方法探讨
- 名师原创 全国通用2014-2015学年高二寒假作业 政治(一)Word版
- 北航《建筑结构检测鉴定与加固》在线作业三
- XX县卫生监督所工程建设项目可行性研究报告
- 小学四年级观察作文经典评语
- 浅谈110KV变电站电气一次设计-程泉焱(1)
- 安全员考试题库
- 国家电网公司变电运维管理规定(试行)
- 义务教育课程标准稿征求意见提纲
- 教学秘书面试技巧
- 钢结构工程施工组织设计
- 水利工程概论论文
- 09届九年级数学第四次模拟试卷
- 蛋白质
- 提取
- 植物
- 方法