实验一氨茶碱体外透皮吸收实验
更新时间:2024-04-21 17:02:01 阅读量: 综合文库 文档下载
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实验一氨茶碱体外透皮吸收实验
一、实验目的
1、掌握透皮吸收的基本实验方法。 2、了解影响药物经皮吸收的因素。 二、实验原理
皮肤用药常起保护皮肤与局部治疗的作用,但作为全身给药的途径己有很多研究,无论起局部治疗作用,还是通过皮肤吸收产生全身治疗作用,药物均需通过皮肤外层的屏障进入皮肤,因而研究药物通过皮肤的转运过程及其影响因素,有利于设计高效安全的皮肤给药制剂。
药物透皮吸收途径:
1、透过角质层和表皮进入真皮,被毛细血管吸收进入血液循环; 2、通过皮肤的附属器,即通过毛囊、皮脂腺和汗腺。
根据皮肤的结构,在透皮吸收中采用透皮吸收促进剂,促进药物分子扩散,改善药物透皮吸收,为药物非口服给药提供有效的吸收途径。 三、器材与试药 器材:
分光光度计,垂直式扩散池3个,磁力搅拌器1个,搅拌子3个; 5m1注射器4个、注射器弯头3个,50m1烧杯10个,1000m1容量瓶1个,10ml容量瓶7个,剃刀1个,脱脂棉若干,小剪刀3把,移液管0.5m1, 1m1, 5m1各1个,格尺一把
试药:氨茶碱注射液(125mg/ml)、生理盐水、氢氧化钠
动物:小鼠3只,20±2g 四、实验方法 (一)溶液的配制:
1、0.1M氢氧化钠溶液的配制:取氢氧化钠4g,加蒸馏水溶解,并定容到1000ml容量瓶中。
2、氨茶碱系列标准溶液的配制:精密吸取氨茶碱注射液(125mg/mL) 2ml,加0.1M氢氧化溶液定容至10ml容量瓶中,得浓度为25mg/ml的氨茶碱溶液。精密吸取0.2ml氨茶碱溶液(25mg/mL),加0.1M氢氧化钠溶液定容至100ml容量瓶中,得浓度为0.05mg/ml的氨茶碱储备液。分别精密吸取氨茶碱储备液0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0m1,加0.1M氢氧化钠溶液定容至lOml容量瓶中,得到浓度分别为2.5, 5, 7.5,10,12.5,15ug/ml的氨茶碱系列标准溶液。 (二)标准曲线的制备
设置吸收波长为269nm,以0.1M的氢氧化钠溶液调空白测定各标准溶液的A269吸收值,将吸收度对溶液浓度作线性回归,得标准曲线方程,计算相关系数r,确定线性范围(2.5ug/m1—15ug/ml )。 (三)鼠皮的制备:
1、小鼠脱臼处死,将背部鼠皮剥下,平铺在一干净烧杯上,用剪刀小心剪去背部鼠毛,再用剃刀小心将毛剃千净。
2、用镊子撕下皮下筋膜,用蘸有生理盐水的脱脂棉除去皮下脂肪,剪下适合面积进行透皮实验。 (四)体外透皮实验:
将搅拌子放入扩散池的下池,将完整皮肤固定在上下池之间,在下池加入生理盐水作为接受液,上池加入2m1茶碱注射液,或含有促进剂的茶碱注射液(1%SDS)。
将扩散池上池用封口膜覆盖,扩散池放到水浴槽中(事先预热37℃),将水浴槽放置在磁力搅拌器上。开动搅拌器,记录时间,分别于15、30, 45, 60,90min,用带弯头的注射器从下池中取样1.0ml,并立刻补充同体积的生理盐水。
样品1.0ml加入2.0ml 0.1M的氢氧化钠,置分光光度计测定。记录吸收度,计算溶液浓度。如果溶液浓度过高,则用0.1M的氢氧化钠成倍稀释,记录稀释倍数,以便换算。 五、数据处理
1、标准曲线的绘制:以氨茶碱浓度横坐标,吸收度为纵坐标绘制标准曲线,求算回归方程和相关系数。
2、计算不同时间的累积渗透量,根据得到的累积渗透量绘制累积渗透曲线。将测得的的吸光度代入标准曲线求出相应的药物浓度,按下式计算累积渗透量(Q) 。
Cn为第n个取样点测得的药物浓度(ug/ml); Ci为第i个取样点测得的药物浓度(ug/ml); S为渗透面积(cm2);以累积渗透量Q对时间t1/2进行线性回归所得方程即为Higuchi方程,所得斜率K即为渗透系数J[ug(cm2·h)]。
3、比较完整皮肤,以及在加入吸收促进剂的情况下的渗透量及表观透皮系数,并讨论影响透皮吸收的因素以及怎样通过改善条件增加透皮吸收量。 六、注意事项
1、剃鼠毛的时候一定注意不要弄破鼠皮!
2、下池加接受液及补充接受液的时候一定注意将扩散池横置以便将空气排出。
3、测定扩散池直径,计算扩散面积A 4、捉拿小鼠时注意安全。 七、思考题
1、下池加接受液及补充接受液的时候为何要将扩散池空气排净?
2、促进药物经皮渗透的方法有哪些?
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