生物实验常用试剂配制

一，蛋白质电泳相关试剂及缓冲液

（一）30％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 30％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于250ml烧杯中。 Acrylamide 29g BIS 1g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（二）40％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 40％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于200ml烧杯中 Acrylamide 38g BIS 2g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（三）10％（W/V）过硫酸铵

﹡组分浓度 10％（W/V） 过硫酸铵 ﹡配制量 10ml ﹡配制方法 1．称取1g过硫酸铵。

2．加入10ml的去离子水后搅拌溶解，贮存于4℃。 （注意：10％过硫酸铵溶液在4℃保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）

（四）5X Tris－Glycine Buffer

﹡组分浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（W/V） SDS ﹡配制量 1L

﹡配制方法 1．称取下列试剂，置于1L的烧杯中 Tris 15.1g Glycine 94g

SDS 5.0g

2．加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。 3．加入去离子水定容至1L后，室温保存。

（五）2X SDS－PAGE Loading Buffer

﹡组分浓度

100mM Tris－HCl （pH 6.8） 4％（W/V） SDS 0.2％（W/V） 溴酚蓝 20％（V/V） 甘油

2％（W/V） β－巯基乙醇 ﹡配制量 5ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中 1M Tris－HCl （pH 6.8） 0.5ml SDS 0.2g 溴酚蓝 10mg 甘油 1ml 2．加入去离子水溶解定容至5ml。 3．小份分装，0.5ml一管，室温保存。 4．使用前将25μl的β－巯基乙醇加入混匀。

（六）5X SDS－PAGE Loading Buffer

﹡组分浓度

250mM Tris－HCl （pH 6.8） 10％（W/V） SDS 0.5％（W/V） 溴酚蓝 50％（V/V） 甘油

5％（W/V） β－巯基乙醇 ﹡配制量 5ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中 1M Tris－HCl （pH 6.8） 1.25ml SDS 0.5g 溴酚蓝 25mg 甘油 2.5ml 2．加入去离子水溶解定容至5ml。 3．小份分装，0.5ml一管，室温保存。 4．使用前将25μl的β－巯基乙醇加入混匀。

二，核酸电泳相关试剂及缓冲液

（一）50X TAE Buffer （pH8.5）

﹡组分浓度 2M Tris－醋酸，100mM EDTA

﹡配制量 1L

﹡配制方法 1．称取下列试剂，置于1L烧杯中 Tris 242.2g Na2EDTA·2H2O 37.2g

2．加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解，再加入57.1ml的醋酸，充分搅匀

3．加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

（二）10X TBE Buffer （pH8.3）

﹡组分浓度 890mM Tris－醋酸，20mM EDTA ﹡配制量 1L

﹡配制方法 1．称取下列试剂，置于1L烧杯中 Tris 108g Na2EDTA·2H2O 7.44g

硼酸 55g 2．加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3．加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

（三）10X MOPS Buffer

﹡组分浓度 200mM MOPS，20mM NaAc，10mM EDTA ﹡配制量 1L ﹡配制方法

1．称取41.8g MOPS，置于1L烧杯中，加入约800mlDEPC处理水，搅拌溶解。 2．用1M NaOH调节pH至7.0。 3．再加入一下试剂

1M NaAc（DEPC处理） 20ml 0.5M EDTA（pH8.0）（DEPC处理） 20ml 4．用DEPC处理水将溶液定容至1L。

5．用0.45μm滤膜过滤除杂，室温避光保存。 （注意：溶液见光或高温灭菌后会变黄，仍可以使用，但变黑则不能使用）

（四）溴化乙锭（10mg/ml）

﹡组分浓度 10mg/ml 溴化乙锭 ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取1.0g溴化乙锭，加入到200ml容器中。 2．加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。

3．将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。 4．溴化乙锭最终工作浓度为0.5μg/ml。

（五）6X DNA Loading Buffer（单染料）

﹡组分浓度

0.25％（W/M） 溴酚蓝 30％（W/M） 甘油 ﹡配制量 10ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中

溴酚兰 25mg

2．向离心管中6ml去离子水，充分搅拌溶解。 3．加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保存。

（六） 6X DNA Loading Buffer（双染料）

﹡组分浓度

0.25％（m/M） 溴酚蓝

0.25％（m/M） 二甲苯腈蓝FF 30％（m/M） 甘油 ﹡配制量 10ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中

溴酚兰 25mg 二甲苯腈蓝FF 25mg

2．向离心管中6ml去离子水，充分搅拌溶解。 3．加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至 10ml，

室温保存。

（七）10X RNA Loading Buffer（单染料）

﹡组分浓度

10mM EDTA

0.25％（m/M） 溴酚蓝 50％（m/M） 甘油

﹡配制量 10ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中 0.5M EDTA（pH 8.0） 200μl 溴酚兰 25mg

2．向离心管中4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。 3．加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。

（八）10X RNA Loading Buffer（单染料）

﹡组分浓度 10mM EDTA

0.25％（W/V） 溴酚蓝

0.25％（W/V） 二甲苯腈蓝FF 50％（V/V） 甘油 ﹡配制量 10ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中

0.5M EDTA（pH 8.0） 200μl 溴酚兰 25mg 二甲苯腈蓝FF 25mg

2．向离心管中4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。 3．加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。

三，分子生物学常用试剂

（一），氨苄青霉素

﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法

1．称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心管中。 2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

（二），卡那霉素

﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法

1．称取2.5g 卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）

后，置于－20℃保存。

（三）RNase A

﹡组分浓度 10mg/ml RNase A ﹡配制量 50ml ﹡配制方法

1．取0.5g RNase A置于50ml塑料离心管中。 2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3．100℃煮沸15min,缓慢冷却至室温，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

（四）IPTG

﹡组分浓度 24mg/ml IPTG ﹡配制量 50ml

﹡配制方法

1．称取1.2g IPTG置于50ml塑料离心管中。 2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

3．用0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）

后，置于－20℃保存。

（五）X-Gal

﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal ﹡配制量 50ml ﹡配制方法

1．称取1g X-Gal置于50ml塑料离心管中。 2．加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解之后定容至50ml。

3．小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

（六）DTT

﹡组分浓度 1M DTT ﹡配制量 10ml ﹡配制方法

1．称取1.54g DTT置于15ml塑料离心管中。 2．加入8ml的10mM NaAc（pH5.2），充分混合溶解之后定容至10ml。

3．用0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

（七）EDTA溶液

﹡组分浓度 0.5M EDTA ﹡配制量 1L ﹡配制方法

1． 称取186.1g Na2EDTA·2H2O置于1L烧杯中。 2． 加入800ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。

3． 用NaOH调节调节pH值至8.0（约20gNaOH），当pH接近8.0时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。

4．小份分装后，高温高压灭菌，室温保存。

四，于定量PCR检测的SYBR?Green I 核酸染料

采用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺电泳方法检测双链DNA时，SYBR?Green I最灵敏的荧光染料，当其结合到核酸上时，会产生很强的荧光及高量子产额，DNA/SYBR?Green I复合物的量子产额约为0.8。由于与核酸结合后能产生很强的信号，背景极低，并且对核酸的亲和力高，因此SYBR染料可在低浓度条件下使用。SYBR?Green I的最低检出限：20pg DNA（254nm）；60pg DNA（300nm 紫外透射）；此外，SYBR?Green I还可以用于检测寡核苷酸（1-2ng，300nm紫外透射），比EB灵敏20至100倍。

SYBR?Green I用于电泳检测DNA时，既可预染，也可电泳后再进行染色。SYBR?Green I用于琼脂糖电泳检测DNA后，可直接将DNA转移至膜上，进行后续核酸印迹杂交反应。此外，SYBR?Green I与DNA的结合对多种常用的限制性内切酶活性无抑制作用，可直接进行消化或连接。

SYBR?Green I主要用于溶液中DNA的定量，特别适用于荧光定量PCR检测（即实时PCR）。SYBR?Green I原液是无水DMSO配制10,000倍浓缩液。配制工作液时需用TAE、TE或TBE缓冲液。

SYBR?Green I应避光存放，原液保存于—20℃；工作液保存于4℃，最好存于密封聚丙烯容器。 图示为DNA分子量标准电泳SYBR GREEN I染色图。

本品为美国MP公司生产 规格、价格如下：

编号 PB11141 PB11142 PB11143 PB11144

品名

SYBR Green I Loading buffer SYBR Green I 10000×,DMSO SYBR Green I 10000×,DMSO SYBR Green I 10000×,DMSO

规格 500ul 500ul 100ul 1ml

价格 100 450 800 5400

*注：本产品后三种均为原液，第一种为普博实验室所配工作液，只需5-8ul样品加1ul工作液（含溴酚兰）混合即可上样。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/m1n3.html