0C-ELSD法测定银杏叶分散片中萜内酯的含量

安徽中医学院学报第２９卷第１期２０１０年２月ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＮＨＵＩＴＣＭＣＯＬＬＥＧＥ

Ｖｏｉ．２９Ｎｏ．１Ｆｅｂ．２０１０

７３

ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ法测定银杏叶分散片中萜内酯的含量

谷薇薇１，张国升１，刘德娟１，刘丛彬－，张福田２

（１．安徽中医学院药学院，安徽合肥２３００３１；２．合肥大众医药科技开发有限公司，安徽合肥２３００３１）［摘要］目的

ｍｍ×４．６

建立银杏叶分散片中萜内酯的含量测定方法。方法

ｒａｍ）为色谱柱，以正丙醇一四氢呋喃一水（１：１５：８４）为流动相。结果

采用蒸发光散射检测器，以ＯＤＳ柱（１５０

白果内酯在７．８４８～３９．２４０

ｐｇ、银杏内酯Ａ在３．８～１９．０

ｇｇ、银杏内酯Ｂ在７．０８～３５．４０弘ｇ、银杏内酯Ｃ在３．７６８～１８．８４０弘ｇ范围内

进样量的对数与峰面积的对数线性关系较好，平均回收率依次分别为９８．３９％（ＲＳＤ一０．３１％）、９８．４１％

（ＲＳＤ＝０．２０％）、９７．０７％（ＲＳＤ—Ｏ．４８％）、９８．３９％（ＲＳＤ一１．６１％）。结论

本法准确，重现性好，适用于

银杏叶分散片中萜内酯的含量测定。

［关键词］银杏叶；萜内酯；银杏内酯；白果内酯；含量测定

［中图分类号３Ｒ９２７．２［文献标志码］Ａ［文章编号］ＩＯＯＯ一２２１９（２０１０）Ｏｌ一００７３—０３

银杏叶为银杏科植物银杏（白果树、公孙树）

Ｇｉｎｋｇｏ

ｂｉｌｏｂａ

白果内酯峰计算应不低于２２．２对照品溶液制备

５００，白果内酯峰与银杏

Ｌ．的干燥叶。银杏叶中的主要活性内酯Ｃ峰的分离度应大于１．５。

分别精密称取经五氧化二

磷干燥过夜的白果内酯、银杏内酯Ａ、银杏内酯Ｂ、

白果内酯２

物质包括黄酮类和萜内酯类化合物，萜内酯化合物中研究较多的主要是银杏内酯Ａ（Ｃ。。Ｈ：。Ｏ。）、银杏内酯（Ｃ。。Ｈ，。Ｏ。）。文献报道的萜内酯类化合物的含量测定方法有很多，如气相层析一质谱联用法ｎ］、高效液相色谱一电喷雾电离一质谱分析Ｅｚ］、高效液相色谱一蒸发光散射检测法（ｈｉｇｈ

ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—－ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ

ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｇｈｔ

ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ

ｌｉｑｕｉｄｄｅｔｅｃ—

内酯Ｂ（Ｃ。。Ｈ：。０。。）、银杏内酯Ｃ（Ｃ。。Ｈ。。Ｏ。。）和白果银杏内酯Ｃ对照品，加流动相制成每毫升中分别含

ｍｇ，银杏内酯Ａ、银杏内酯Ｂ、银杏内酯

Ｃ各１

ｍｇ的混合溶液，即得。

ｍｇ、萜

２．３供试品溶液制备取本品２０片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮醇苷７６．８类内酯１９．２

５０

ｍｇ的粉末，精密称定适量，加入甲醇

ｍｉｎ，放冷，再称定质

ｔｏｒ，ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ）法［３］、傅立叶红外光谱法‘引、核磁共振法、生物测定法［５３等。本研究主要以ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法来检测银杏叶分散片中萜内酯的含量。１仪器与试药１．１仪器

Ｗａｔｅｒｓ２４８７高效液相色谱仪；蒸发光

２０００）；Ｒ一２０５旋转蒸发仪：上

散射检测器（Ａｌｈｅｃｈ

试药

ｍｌ，称定质量，超声处理２０

量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续

滤液２０

ｍｌ，回收甲醇，残渣加水１０ｍｌ，置水浴中温

ｍｌ洗涤，ｍｌ，合

热使溶散，加２％盐酸溶液２滴，用醋酸乙酯振摇提取４次，合并提取液，用５％醋酸钠溶液２０分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯１０

并水洗液，用醋酸乙酯１０

ｍｌ洗涤。合并醋

海申胜生物技术有限公司。

１．２

酸乙酯提取液及洗液，用水洗２次，每次２０液，回收醋酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解转移至５

ｍｌ量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，即得。

２．４

银杏叶分散片：安徽大东方药业公司产

ｍ１洗涤，合并醋酸乙酯

品，批号２００６０９０３，２００６０９０４，２００６０９０５；甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯；银杏叶对照品：购于中国生物制品检定所，包括银杏内酯Ａ（批号０８６２—２００００４）、银杏内酯Ｂ（批号１１０８６３－２００２０４）、银杏内酯Ｃ（批号１１０８６４—２００２０３）、白果内酯（批号０８６５－

９６０１）。

阴性对照液制备取空白辅料按“２．３”项制备

方法制备溶液，分别吸取对照品和阴性对照液各１０扯ｌ进针，色谱图见图１。

２．５

线性关系

６，ｒ＝０．９９９

通过线性关系试验数据，分别得到

８

２方法与结果

各样品的回归方程。白果内酯：ｌｇＡ＝１．３３０

用十八烷基硅

４．３４８

ｌｇＭ＋

２．１色谱条件与系统适用性试验

９，表明白果内酯在７．８４８～

烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇一四氢呋喃一水（１：１５：８４）为流动相；用ＥＬＳＤ检测。理论塔板数按

作者简介：谷薇薇（１９８４一），女，硕士研究生

通讯作者：张国升，１３９５６９７３８７６，ｗｅｉｎｉｓｉ２２＠１２６．ｃｏｒｎ

３９．２４０“ｇ范围内进样量的对数和峰面积的对数呈良好的线性关系；银杏内酯Ａ：回归方程为ｌｇＡ一

１．２２２

９

ｌｇＭ＋４．４５８

９，ｒ＝０．９９９

６，表明银杏内酯

Ａ在３．８～１９．０，ｕｇ范围内进样量的对数和峰面积的对数呈良好的线性关系；银杏内酯Ｂ：回归方程为

７４

安徽中医学院学报第２９卷第１期２０１０年２月ＪＯＵＰ。ＮＡＬＯＦＡＮＨＵＩＴＣＭＣＯＩ．ＬＥＧＥ

Ｖｏｋ

２９Ｎｏ．１Ｆｅｂ．２０１０

ｌｇＡ＝１．１３８

９

１９Ｍ＋４．２９５１，ｒ－－－－０．９９９１，表明银杏

方程为ｌｇＡ＝１．２１３

Ｓ

ｌｇＭ＋４．４３９，ｒ一０．９９９

６，表

内酯Ｂ在７．０８＂一３５．４０

ｂｔｇ范围内进样量的对数和

｝

明银杏内酯Ｃ在３．７６８

吾

２

‘

峰面积的对数呈良好的线性关系；银杏内酯Ｃ：回归

ｌ

１８．８４０／ｌｇ范围内进样量

的对数和峰面积的对数呈良好的线性关系。

Ｂ

３

４

敛

图１

ｎ

笺天

一九人

墨

ＨＰＩ。Ｃ图谱（Ａ：对照品；Ｂ：样品；Ｃ：阴性对照）

１．白果内酯；２．银杏内酯Ｂ；３．银杏内酯Ａ；４．银杏内酯Ｃ

２．６精密度试验取对照品溶液，照含量测定下方

’表１加样回收率试验结果

法连续进５针，每次１０“ｌ，结果测得白果内酯、银杏内酯Ａ、银杏内酯Ｂ、银杏内酯Ｃ的ＲＳＤ分别为

０．６５％、１．０９％、１．５６％、１．００％。表明本法精密度

较好。

２．７重复性试验按含量测定下方法，称取适量，共５份，结果测得白果内酯、银杏内酯Ａ、银杏内酯Ｂ、银杏内酯Ｃ的ＲＳＤ分别为１．９２％、１．６４％、０．８６％、０．７４％。表明本法重现性良好。＋２．８稳定性实验取对照品溶液，照含量测定下方法分别于０，１，２，４，８，１６ｈ进样测定，结果测得白果内酯、银杏内酯Ａ、银杏内酯Ｂ、银杏内酯Ｃ的ＲＳＤ分别为０．３２％，１．８５％，０．８７％，０．３７％。表明本品溶液的稳定性较好。

２．９加样回收率试验采用加样回收法，精密称取已知含量的银杏叶分散片２．８５６

０

ｇ，照含量测定项

ｍｇ、银

下方法处理，分别加入白果内酯对照品３．２３杏内酯Ａ

１．０２

３．４５

ｍｇ、银杏内酯Ｂ１．７８ｍｇ、银杏内酯Ｃ

ｍｇ，依含量测定项下方法测定。通过本品加样

回收率试验数据可知：本法回收率较好。白果内酯、银杏内酯Ａ、银杏内酯Ｂ、银杏内酯Ｃ的平均回收率分别为９８．３９％，９８．４１％，９７．０７％，９８．３９％。ＲＳＤ分别为０．３１％，０．２０％，０．４８％，１．６１％。见表１。２．１０样品测定分别精密吸取对照品溶液１０，２０肛１，供试品溶液１０一，注入液相色谱仪，测定，用外标两点对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯Ａ、银杏内酯Ｂ、银杏内酯Ｃ的含量，即得。

本品每片含内酯以白果内酯、银杏内酯Ａ、银杏内酯Ｂ、银杏内酯Ｃ的含量之和计，不得少于４．８

ｍｇ。见表２。３讨论

批号

含量／（ｍｇ／片）

平均含量

／（ｎａｇ／片）

第１次第２次

版）‘“，采用ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ法对银杏叶分散片含量

目前，对银杏叶制剂的研究较多，检测方法日趋

测定进行研究，发现该法准确，重复性较好，是一种检测银杏叶分散片中萜内酯成分的有效方法。

成熟，本研究主要参考《中华人民共和国药典））（２００５

安徽中医学院学报第２９卷第１期２０１０年２月ＪＯＵＲＮＡ＿Ｉ，ＯＦＡＮＨＵＩＴＣＭＣＯＬＬＥＧＥ．Ｖ０１．２９

Ｎｏ．１Ｆｅｂ．２０１０７５

教学研究

李济仁教授《内经》教学法探析

黄５辉

（中医药临床杂志社，安徽合肥２３００６１）

［摘要］国医大师李济仁先生是我国《内经》学科带头人之一，其《内经》教学经验曾受到高度的赞誉和评价。概括为“唯物辩证”法、辨异求同法、取类比象法、结合临床法、科研论证法、学术源流法、启发诱导法、由博返约法八大教学方法。在这八大教学法中，李济仁融合古今、结合中西、理论联系实际，较好地把握了《内经》理

论的精髓，从而“把最难懂的《内经》讲活了”。

［关键词］李济仁；内经；教学法

［中图分类号］Ｇ４［文献标志码］Ａ［文章编号１１０００—２２１９（２０１０）０１—００７５—０３

国医大师李济仁先生，从事教学、临床和科研工作６０

经》教研组组长、大基础教研窜主任，自编教材《内经知要通俗讲义》、《中国医学史》，主讲《内经》和《中国医学史》。《内经》成书于２

余载，其侣说《内经》教学法，冶其精，广其传，并参加了首批

国家卫生部高等学校规划教材《内经》、《中医基础理论》等的编写，是我国《内经》学科带头人之一。１９５９年１０月至１９７２年９月期间，其任教于安徽中医学院及安徽医学院，担任《内

０００多年前．文词古奥．理论深晦，较难理解，而先生

系安徽歙县人．讲课带着浓浓的“吴侬软语”、歙南乡音，却能将深奥的《内经》讲解得生动风趣、通俗易懂。早在１９６１年，

《光明Ｆ｛报》对其《内经》教学法就给予较高评价。现将其归纳

作者简介：黄辉（１９６４一），男届０编审

概括为八大教学法，以期对当今的中医教学有所启发。

参考文献：

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［－１３唐红芳，郑自强，朱晓雨，等．银杏叶中银杏萜内酯的

Ｃ－Ｃ－ＭＳ定性定量分析［Ｊ］．中草药，２００３，３４（３）：

２１４—２１７．

定银杏叶中提取物中的总内酯［Ｊ］．广西农业生物科学，

１９９９，１８（１）：４６—４９．

［５］ＨａｓｌｅｒＡ．色潜法与生物法测定收获季节银杏叶中总黄

２２１卢定强。欧阳平凯，陈钧．银杏叶中银杏萜内酯的高效液

相色谱一电喷雾电离一质谱分析［Ｊ］．药物分析杂志，２００２，

２２（１）：９－１１．

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学出版社，２００５：２２１．

（收稿日期：２００９—０７—１０）

［３］刘晓谦，王跃生，罗晓健。等．ＨＰＬＣ—ＥＩ。ＳＤ法测定不同

厂家银杏叶中提取物中４种银杏内酯的含量研究ＥＪ］．

江西中医学院学报，２００８，２０（１）：８９—９０．

Ｃｏｎｔｅｎｔ

Ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

Ｔａｂｌｅｔｓ

ｏｆ

Ｔｅｒｐｅｎｅ

Ｌａｅｔｏｎｅｓ

ｂｙ

ＨＰＬＣ—ＥＩ。ＳＤｉｎ

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Ｌｅａｖｅｓ

ＧＵ吼ｉ—ｗｅｉｌ，ＺＨＡＮＧＧｕｏ—ｓｈｅｎ９１，ＬＪＵ

（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ

Ｄｅ－ｊＵＣｌｎｌ，ＬＪＵ

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ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＬｔｄ，Ａｎｈｕｉ

ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ａｎｈｕｉ

Ｄａｚｈｏｎｇ

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Ｆｕ—ｔｉａｎＣｏｎｇ—ｂｉｎｌ，ＺＨＡＮＧ

ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＡｎｈｕｉＨｅｆｅｉＨｅｆｅｉ

２３００３１，Ｃｈｉｎａ）ｌａｃｔｏｎｅｓＯＤＳ

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２

２３００３１，

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Ｔａｂｌｅｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ

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ｖａｌｕｅ

Ｔｈｅ

ｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

ｏｆｔｅｒｐｅｎｅ

Ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ４．６ｒａｍ）

Ｔｈｅ

ｔｈｅｓａｍｐｌｅ

ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎｍｏｂｉｌｅ

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ｃｏｎｓｉｓｔｅｄｇｏｏｄａｎｄ

ｏｆｐｒｏｐａｎｏｌ—ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ—ｗａｔｅｒ（１：１

ｗｉｔｈ

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ｖａｌｕｅ

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７．８４８—３９．２４０ｗａｓ

Ｆｇ，７．０８～３５．４０肛ｇ，３．７６８—

１８．８４０＂ｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙ

９８．３９％（ＲＳＤ＝Ｏ．３１％），９８．４１％（ＲＳＤ＝Ｏ．２０％），９７．０７％

ＴｈｉｓＬｅａｖｅｓ

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（ＲＳＤ＝Ｏ．４８％），９８．３９％（ＲＳＤ＝１．６１％），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ

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ｃｏｎｔｅｎｔ

ｗｉｔｈ

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ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｌｅａｖｅｓ；Ｔｅｒｐｅｎｅ

ｏｆｔｅｒｐｅｎｅ

ｌａｃｔｏｎｅｓ

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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｇｉｎｋｇｏ

ｌａｃｔｏｎｅｓ；Ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ；Ｂｉｌｏｂａｌｉｄｅ；Ｃｏｎｔｅｎｔ

ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

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