医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6

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医学微生物学实验 综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测(六)药敏实验结果分析 糖发酵、动力实验结果分析 玻片凝集试验 高压蒸汽灭菌 细菌综合性实验总结 实验报告撰写 细菌感染的检查方法和防治原则(录像) 洗刷

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常用药敏试验纸片判断标准P21抗菌药物 纸片含药量抑菌圈直径(mm) 耐药 中度敏感 敏感 ≤28 ≤11 ≤12 12~14 13~14 15~18 13~17 13~16 ≥29 ≥15 ≥15 ≥19 ≥18 ≥17

青霉素G(葡萄球菌) 10单位 链霉素 10微克 庆大霉素 10微克 四环素 30微克 氯霉素 30微克 磺胺 300微克

≤14 ≤12 ≤12

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药敏实验结果分析 青霉素 黄色细菌 白色细菌 紫黑细菌 粉红细菌 注：耐药-,中度敏感±,敏感+。 链霉素 庆大霉素

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抗菌素药敏试验纸片法结果G+金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌对青霉素 敏感，对链霉素中度敏感。 G-粉红色和紫黑色细菌对青霉素耐药，对链 霉素敏感。 G+球菌和G-杆菌对广谱抗菌素庆大霉素都敏感。

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糖发酵、动力试验结果判断反应现象 结果描述 符号

培养基变色无气泡 培养基变色有气泡 培养基不变色

分解×糖产酸不产气 分解×糖产酸又产气 不分解×糖

+

⊕-

细菌扩散生长,培基混浊 沿接种线生长,培基清澈透明

细菌有鞭毛 细菌无鞭毛

+ -

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肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表葡萄糖 埃希菌属 ⊕ 志贺菌属 + 沙门菌属 ⊕/+ 霍乱弧菌 + 变形杆菌属 ⊕ ★ +产酸或阳性， 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖 半固体 ⊕ ⊕ ⊕ √ + √ √ +/- -/+ ⊕ ⊕ + + + + + √ √ + ⊕产酸产气，-阴性，

+/-多数阳性， -/+多数阴性， √不确定。

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常见肠道感染细菌主要生化反应特征葡萄糖 乳糖 半固体(动力) 大肠埃希菌 ⊕ ⊕ + 痢疾志贺菌 + 伤寒沙门菌 + + 霍乱弧菌 +★ + 幽门螺杆菌 不分解糖类 + 变形杆菌 ⊕ + ★产酸能迅速杀死该菌。

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组号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 结果

细菌生化反应结果分析 甲、乙→紫黑 丙、丁→粉红 ↓ ↓ ①葡萄糖 ②乳糖 半固体 ③葡萄糖 ④乳糖

半固体

⊕

⊕+ -

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实结果错误 错误可能性 错误纯培养时，菌落挑错了。 无菌操作不严格，污染杂菌。 接种时未协调好，接种错误。

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玻片凝集试验在适量电解质存在的情况下，颗粒性抗原(细菌)与 特异性抗体混合，如果比例合适，则出现肉眼可见 的凝集块，称为凝集反应。 用于细菌的抗原分析、鉴定及分型，也可应用已知 细菌检查未知血清的抗体。 诊断血清与待检测细菌混合→细菌凝集→阳性→报 告：检出××细菌。

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玻片凝集试验原理凝集反应的机制是由于抗原与其相应抗体间 存在着相对应的极性基。极性基的相互吸附， 使抗原外周的水化膜除去，由亲水溶胶变成 憎

水溶胶。 电解质具有降低电位的作用，使抗原颗粒间 的排斥力消除，从而产生了凝集现象。

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玻片凝集反应实验步骤取洁净干燥的载片一片，分试验与对照区。 滴加生理盐水15ul,置于对照区中心；滴加诊断 血清15ul,置于试验区中心。 用接种环取菌苔，分别研磨乳化于盐水或血清内， 混合均匀。 将玻片反复旋转或倾侧、菌液充分混匀，凝集速 度更快、结果更清楚。 观察是否有凝集块出现，如有则记为阳性，没有 则记为阴性。

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载玻片1张

痢疾血清，生 理盐水各15ul

粉红色菌苔 与血清混匀

粉红色菌苔 与盐水混匀

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玻片凝集结果

玻片来回倾侧 数次， 数次，肉眼观 察；2~3分钟 ~ 分钟 内仍不出现凝 集者,可认为 集者 可认为 阴性(- 。 阴性 -)。

……;菌液混 菌液混 浊，少量絮 凝集, 状,25%凝集 凝集 阳性(+ 。 阳性 +)。

……;菌液轻 菌液轻 度混浊,絮状 度混浊 絮状 凝集块较小, 凝集块较小 阳性(++ ++)。 阳性 ++ 。

……;菌液澄 菌液澄 清,有明显絮 有明显絮 凝集, 片,75%凝集 凝集 阳性(+++ +++)。 阳性 +++ 。

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安全警告本次实验操作，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径>100um沉降很快,<50um在0.4s内扩 散开,<5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明 原因的感染高达82%,大多数是气溶胶在空气中 扩散引起的。 实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作， 保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感 染病原菌。

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综合性实验一 实验总结采用平板划线分离法，从浓汁标本中分离出 黄色和白色两种菌落。显微镜下，这两株细 菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状， 是典型的葡萄球菌；结合菌落颜色，这两株 葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄 球菌。通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡 萄球菌是致病菌。

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用伊红美蓝平板，从粪便标本分离出紫黑色具有 金属光泽的菌落和粉红色半透明菌落。紫黑色菌 落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不 能分解乳糖的致病菌。显微镜下，它们都是G-杆 菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。 经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结 果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和痢疾志贺菌。 金黄色葡萄球菌和痢疾志贺菌，这两株致病菌分 别做了药敏试验，G+的金黄色葡萄球菌对青霉素 敏感，G-的痢疾杆菌对链霉素敏感；庆大霉素对 G+和G-菌都敏感。

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标本

脓汁和粪便标本细菌检测结果分析 血浆 痢疾 菌落 形态 葡 乳 半 青 链 庆 凝固酶 血清 黄色 G+球 + + + +

结论 金黄色 葡萄球菌

脓汁 白色 G+球 +

+ + 白色 葡萄球菌

紫黑 粪便

G-杆

⊕ ⊕ +

-

+

+

大肠 埃希菌

粉红 G-杆

+

-

-

+

-

+

+

福氏 志贺菌

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细菌鉴定的原则及基本方法必须用纯的细菌培养物作鉴定。因为不同的细菌生化反应结果相 差较大，而反应结果是以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生 化反应，结果不可分析。 鉴定试验的选择：测定细菌的实验方法很多，根据鉴定目的选择 适当的试验项目，既能完成鉴定，项目又尽可能少。一般考虑以 下几个问题。 选择有价值的试验：鉴别两种细菌选择的试验应该其一为阳 性，另一为阴性，且阳性和阴性的概率大于90%。否则，试验 无鉴别价值。 选择快速简便的试验。因为是常规实验室，选择的方法应快 速方便，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等应为首选方法。鉴 定一种细菌如果有几种特异方法，只选一两种，多选无价值。 测定细菌的一种生物特性可能有几种不同方法。应该了解所 用方法的敏感性，否则会导致错误的鉴定。

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思考题如果细菌生化反应结果不佳，原因何在? 报告纸片法药敏试验结果，是否符合你所鉴 定的细菌的药敏特性? 玻片凝集试验观察完毕，应将载玻片立即放 入消毒缸内，为什么? 怎么设计一个实验，对伤寒沙门菌进行分离 和鉴定?

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