高纯度燕麦β-葡聚糖测定方法研究

高纯度燕麦β-葡聚糖测定方法研究

随着人类物质生活水平的提高，人类的饮食结构反而愈不均衡。因此具有显著降血脂、降血糖及维持肠道微生物生态环境功能的燕麦葡聚糖[1~4]的需求市场明显增大，而高纯度的燕麦葡聚糖因其功效更为显著，其需求更为明显。但目前国内外对于高纯度燕麦葡聚糖的检测并无统一标准，这极其不利于高纯度燕麦葡聚糖的研究发展。

目前，谷物麸中β-葡聚糖的测定[4~7]主要是采用AOAC995.16酶法，该方法应用于测定高纯度燕麦葡聚糖的原理虽然相同，但是由于含量的增加，产品的分子量不同，对于酶解的用量，水解的时间等条件有所不同，因此，本文着重研究酶解测定高纯度葡聚糖时的作用条件，并通过对方法的精密度和回收率进行判断方法的准确性。

1 材料

1.1试剂与待测样

70%纯度燕麦β-葡聚糖：广东省食品工业研究所 试剂盒：Megazyme ；K-BGLU 1.2主要仪器设备

移液枪：Tomos；L1160471

恒温水浴锅：上海申胜生物技术有限公司；W201B 漩涡混合振荡器：上海琪特分析一起有限公司；XW-80A 紫外可见分光光度仪：上海美谱达仪器有限公司；UV-6300PC 2 实验方法 2.1测定步骤

准确称量约10mg70%纯度燕麦β-葡聚糖样品到试管内，确保全部样品完全落入试管。

用0.2ml乙醇（50％v/v）湿润样品，加磷酸钠缓冲液（4.0ml，20mM，Ph6.5）并且用振荡器振荡。

然后，马上将试管放入开水中，保持一分钟。用振荡器振荡样品，保持在开水中2分钟，再次振荡。

把含有样品的试管放入40℃水中，保持5分钟。加地衣多糖酶试剂（0.2ml），振荡。

放入40℃水浴中分解2小时，并不时振荡。加醋酸钠缓冲溶液（50ml，200mM，Ph4.0），用振荡器振荡样品。

将试样降到室温。准确用移液枪在三个测定试管中添加0.1ml的已经过地衣多糖酶酶解的高纯度燕麦β-葡聚糖样品。

加β-葡萄糖苷酶试剂0.1ml到三个测定试管中的两个，第三个作为空白，添加0.1ml50mM醋酸钠缓冲液。加GOPOD试剂3.0ml到三个试管中，在37℃水浴中分解20分钟。取出样品，并用分光光度计测定（510nm）。

2.2标准曲线

以标准葡萄糖配成浓度分别为0.0，6.4，9.6，12.8，16.0，19.2μg/ml的标准样品，以分光光度计在510nm下测定吸光度。

表1 标准曲线标样表

Table1 Sample Table of Standard curve

1、葡萄糖标准曲线 葡萄糖浓度x (μg/ml) 吸光度y

0 0

6.4 0.2

9.6 0.283

12.8 0.377

16 0.476

19.2 0.583

2、精密度实验

配制样品溶液为2mg/ml，分别在4支试管中加入5mL样品溶液，依上述检测方法测定

序号 吸光度 测定值（mg） 平均值（mg） 相对标准偏差（RSD） 计算方法：RSD=S/X*100

X——测定值的平均值 S——标准差 3、回收率实验

为了确定本方法的准确度,分别取不同量的标准葡聚糖样品到已知含量的燕麦葡聚糖产品中，依据上述检测方法测定。

称取已知含量的燕麦葡聚糖样品125mg，定容到250mL水中，备用； 称取标准葡聚糖样品（含量=8.8%,水分=10.07%）200mg，定容至50mL水中，

1 0.166 5.54

2 0.170 5.69

5.72 2.4%

3 0.173 5.79

4 0.176 5.86

备用；

每个试管分别移取20ml已知含量的燕麦葡糖溶液，再分别加入0.5ml、1 ml、

1.5ml、2 ml、2.5 ml、3ml标准葡聚糖样品溶液，然后定容至25ml，依法测定。

单位：mg

序号

本底值X2

1 2 3 4 5 6 平均值

回收率计算公式：

P=X /m*100% P——加入标准物质的回收率 m——加入的标准物质的量； X——实际测得的标准物质的量； 4、结论：

燕麦葡聚糖的产品是采用AOAC995.16进行检测的，通过对该方法可行性的验证，进行精确度及回收率的实验，结果表明：采用此法的相对标准偏差RSD=2.4%，回收率P=99.43%，因此采用此法进行检测燕麦葡聚糖是可行的。

- 5.72

添加量m 0.158 0.316 0.474 0.632 0.79 0.948 -

加标的吸光度

0.176 0.181 0.185 0.19 0.195 0.201 -

实测值X1 0.15 0.319 0.457 0.623 0.788 0.997 -

回收率% 95.3 101.2 96.5 98.6 99.8 105.2 99.43

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/lkk4.html